不同产地的蒲公英提取物中菊苣酸含量测定

◎ 黄绮敏，冯华业，李美珍，邱富源，江志鹏

（无限极（中国）有限公司，广东 江门 529100）

蒲公英是菊科植物蒲公英（Taraxacum mongolicumHand.-Mazz.）、碱地蒲公英（Taraxacum borealisinenseKitam.）或同属数种植物的干燥全草[1]。蒲公英提取物是以蒲公英为原料，经水提取、过滤、浓缩、干燥等工序制成的提取物[2]。蒲公英提取物中含有菊苣酸、咖啡酸等成分[3-5]，现代药理研究表明，蒲公英提取物具有提高免疫力[6]、降血糖[7]、辅助保护肝损伤[8-9]等作用。

目前在国内外未发现蒲公英提取物的官方质量评价方法[10]。本研究建立了蒲公英提取物的菊苣酸含量测定方法，并测定了不同产地的蒲公英提取物中菊苣酸含量，为初步评价蒲公英提取物的质量提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

HP1200型高效液相色谱仪，包括二极管阵列检测器，美国Agilent公司；KQ-400KDE型高功率数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司。

菊苣酸标准品（CAS号70831-56-0、批号110831-201906），中国食品药品检定研究院，含量以91.5%计；咖啡酸标准品（CAS号70831-56-0，批号111959-201903），中国食品药品检定研究院，含量以88.8%计；甲醇为色谱纯，德国Merck公司；乙腈为色谱纯，德国Merck公司；其他试剂均为分析纯，水为纯化水。

蒲公英提取物由适量蒲公英药材加8倍量水煎煮3次，合并滤液，70 ℃减压浓缩，经喷雾干燥而得。10批蒲公英提取物来源于4个厂家，编号1～10。

1.2 方法

1.2.1 菊苣酸的含量测定

（1）对照品溶液配制。精密称取菊苣酸对照品约8 mg于500 mL棕色容量瓶中，用50%甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成16 μg·mL-1的菊苣酸对照品溶液。

（2）试品溶液配制。精密称取本品约0.5 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，称定重量，超声（250 W，40 kHz）处理30 min，取出，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45 μm的针式过滤器过滤，取续滤液，即得供试品溶液。

（3）菊苣酸含量测定。精密吸取对照品溶液和供试品溶各10 μL，注入液相色谱仪测定。根据所得对照品溶液和供试品溶液色谱图中菊苣酸峰面积计算供试品中的菊苣酸含量。

1.2.2 色谱条件

（1）色谱柱。十八烷基键合硅胶柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液为流动相B。

（2）采用梯度洗脱。0～14 min流动相A由13%上升到15%，流动相B由87%下降到85%；14～29 min流动相A由15%上升到18%，流动相B由85%下降到82%；29～35 min流动相A由18%上升到26%，流动相B由82%下降到74%；35～48 min保持A为26%，B为74%。波长323 nm；柱温35 ℃；流速1.0 mL·min-1；进样量10 μL；理论塔板数按菊苣酸计不低于5 000。

1.2.3 方法学考察

（1）线性关系考察。精密称取菊苣酸对照品6.940 mg置于250 mL容量瓶中，加50%甲醇溶解制成储备液，再精密吸取该储备液1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL和10.0 mL分别至10 mL容量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，摇匀，测定峰面积。

（2）精密度试验。取1.2.1项中制备的菊苣酸对照品溶液，重复进样6次，分别计算峰面积及保留时间的RSD值。

（3）稳定性试验。精密称取蒲公英提取物（批号CPGY-C-925138），按1.2.1项中制备的供试品溶液，分别于0 h、2 h、4 h、6 h、12 h和24 h测定。

（4）重复性试验。精密称取同批号蒲公英提取物（批号CPGY-C-925138）同一天内按1.2.1项中制备的6份供试品溶液，按1.2.2项中色谱条件测定。

（5）回收率试验。取菊苣酸对照品12.06 mg置500 mL棕色容量瓶中，加50%甲醇溶解并定容，分别吸取该对照品溶液2.5 mL、5.0 mL、7.5 mL各3组，分别加入已各自精密称取同批号蒲公英提取物约0.25 g的9个具塞锥形瓶中，按1.2.1制成供回收率测定用供试品溶液，注入液相色谱仪测定，计算菊苣酸的回收率。

2 结果与分析

2.1 线性关系考察

以菊苣酸对照品的浓度（μg·mL-1）为横坐标，峰面积为纵坐标，求得回归方程Y=0.357 6X-0.074 9，R2=0.999 9。结果表明菊苣酸在2.709 4～27.093 8 μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。

2.2 精密度试验

以菊苣酸计，保留时间和峰面积的RSD值为0.31%，不对称度不高于1.1，理论塔板数约33 000，证明仪器精密度良好。

2.3 稳定性试验

稳定性试验结果显示，供试品中菊苣酸峰面积的RSD为0.12%（n=6），表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.4 重复性试验

菊苣酸平均含量为0.047%，RSD为1.35%，分离度大于1.5，表明该方法重复性良好。

2.5 回收率试验

平均回收率为96.55%（92%～105%），表明该方法准确度良好。

2.6 样品含量测定

10批蒲公英提取物中菊苣酸含量以干燥品计算在0.047%～0.360%，平均值约为0.23%，其中陕西B产地的含量偏高，为0.33%～0.36%；陕西A产地的含量最低，约为0.047%，但是每个产地本身数据差异较小，结果见表1。

3 结论与讨论

上述方法学验证表明，测定蒲公英提取物中菊苣酸含量的高效液相色谱法的适应性、精密度、线性关系、准确度等均符合要求，该方法稳定、可靠，可以作为蒲公英提取物中菊苣酸的含量测定方法。研究发现，不同产地的蒲公英提取物的菊苣酸含量存在一定差异，这可能与蒲公英药材本身的生长环境、采收时间、加工工艺等因素有关，有待进一步研究。