长叶纽子果根化学成分的研究

廖张蓉， 周永强， 叶洪波， 殷 鑫， 魏 鑫， 雷传文， 周 英

(贵州中医药大学，贵州 贵阳 550025)

长叶纽子果ArdisiavirensKurz var.annamensis Pitard是紫金科紫金牛属植物，为纽子果的变种，主要分布于贵州、广西(上思)、云南等地[1]。紫金牛属的植物在全世界约400～500种，其中我国就有72种，12变种[2]。该属植物主要用于消炎、消肿、跌打损伤等病症，其化学成分的类型主要有皂苷类、香豆素类、苯酚类、苯醌类、三萜类等[3]。本课题组对长叶纽子果的根部化学成分进行了系统研究，从中分离得到9个化合物，且所有化合物均为首次从该植物中分离得到。

1 材料

DRX-500 AVANCE Ⅲ-600 MHz超导核磁共振共振仪、AVANCE NEO-400 MHz(德国Bruker公司)；RID-20A示差折光检测器(日本岛津公司)；SEP-LC52 MWD紫外检测器(中国北京分离技术有限公司)；RE-2000A旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵、DL-400循环冷却器(郑州长城科工贸有限公司)；SB-600DTY超声波多频清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司)；98-I-C数显控温电热套(天津市泰斯特仪器有限公司)； FW177中草药粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)。C-18反相柱填料ODS-A-HG(日本YMC公司)；半制备柱(250 mm×10 mm，5 μm，日本岛津公司)；柱层析硅胶(80～100、200～300目，青岛海洋化工厂)；Sephadex LH-20葡聚糖凝胶(北京索莱宝科技有限公司)。试剂均为重蒸后使用。

长叶纽子果由贵州中医药大学江维克教授鉴定为紫金牛属紫金科植物长叶纽子果ArdisiavirensKurz var.annamensis Pitard.。

2 提取与分离

取15 kg长叶纽子果干燥根粉碎成粗粉，用70%乙醇回流提取2次，2 h/次，回收溶剂浓缩成浸膏，总浸膏用蒸馏水加热搅拌分散，依次用石油醚、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取。将300 g正丁醇层浸膏以硅胶(80～100目)拌样，进行柱层析，以二氯甲烷-甲醇(100∶0～0∶100)梯度洗脱，合并极性相同流分，得21个组分F1～F21，对其中F5、F6、F8、F12组分进行分离。F5用填料为Sephadex LH-20柱重蒸之后的纯甲醇进行纯化，得到多组化合物，对其中极性相似的化合物进行合瓶得到2个组分(Fr5-1～Fr5-2)，其中Fr5-1无色结晶为化合物1(300 mg)，Fr5-2利用半制备条件为甲醇-水(5∶7～7∶10)共30 min进行分离，在保留时间为20.29、21.10、22.50、26.71 min分别得化合物4(4 mg)、5(5 mg)、6(8 mg)、7(4 mg)；F6用填料为Sephadex LH-20重蒸之后的纯甲醇进行纯化得到2个组分(Fr6-1～Fr6-2)，从Fr6-1得化合物9(14 mg)，Fr6-2利用半制备条件为甲醇-水(4∶6～6∶ 10)共30 min进行分离，在保留时间为14 min得化合物2(8 mg)；F8用填料为Sephadex LH-20重蒸之后的纯甲醇进行纯化得化合物3(16 mg)；F12用ODS进行分段得到5个组分(Fr12-1～Fr12-5)，Fr12-3利用半制备得化合物8(30 mg)。

3 结构鉴定

化合物1：无色晶体。ESI-MSm/z: 327.1[M-H]-。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ：3.43 (1H, dd,J=9.5, 8.6 Hz, H-3), 3.63 (1H, m, H-4), 3.73 (1H, m, H-4a), 3.81(1H, t,J=9.0 Hz, H-2),3.93(3H, s, 9-OCH3),3.95～4.11(2H, m,H-11a and H-11b), 4.96(1H, d,J=10.4 Hz, H-10b), 7.09(1H, s, H-7);13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ: 83.1 (C-2), 71.9 (C-3), 75.6 (C-4), 81.4 (C-4a), 165.8 (C-6), 119.4 (C-6a), 111.0 (C-7), 152.4 (C-8), 142.3 (C-9), 149.5 (C-10), 117.3 (C-10a), 74.2 (C-10b), 62.7 (C-11), 60.9 (9-OCH3)。以上数据与文献[4-6]对照基本一致，故鉴定为岩白菜素。

化合物2：白色羽状结晶。ESI-MSm/z: 507.1[M-H]-。1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ：3.96 (1H, ddd,J=2.2, 6.7, 9.9 Hz, H-2), 3.55 (1H, dd,J=8.7, 10.0 Hz, H-3), 4.41 (1H, dd,J=6.7, 12.2 Hz, H-4a), 7.09 (1H, s, H-6), 5.04 (1H, d,J=10.5 Hz, H-10b), 4.11 (1H, dd,J=9.4, 10.5 Hz, H-11a), 3.85 (1H, d,J=9.1 Hz, H-11b), 7.09 (1H, s, H-2′), 7.09 (1H, s, H-6′), 3.90 (3H, s, H-3′and H-5′), 3.86 (3H, s, H-9);13C-NMR (151 MHz, CD3OD)δ: 81.3 (C-2), 71.8 (C-3), 75.4 (C-4), 80.5 (C-4a), 165.7(C-6), 111.2 (C-7), 152.4(C-8), 142.3 (C-9), 151.8 (C-10), 117.0 (C-10a), 74.4 (C-10b), 64.9 (C-11), 126.1 (C-1′), 110.3 (C-2′), 149.3 (C-3′),149.3 (C-5′) 110.3 (C-6′), 167.7 (C-7′CO), 61.0(3′-OCH3and 5′-OCH3), 60.8(9-OCH3)。以上数据与文献[7]对照基本一致，故鉴定为 4-O-(3,5-二甲基没食子酰基)岩白菜素。

化合物3：白色簇状。ESI-MSm/z: 479.1[M-H]-。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 3.53～3.59 (1H, m, H-3), 3.90 (3H, s, 9-OCH3), 3.95～3.99(1H, m, H-2), 4.13 (1H, d,J=9.8 Hz, H-4a), 4.39 (1H, dd,J=6.7, 12.2 Hz, H-11a), 5.02 (1H, s, H-11b), 5.05 (1H, s, H-10b), 7.10 (1H, s, H-7), 7.11 (2H, s, H-2′and H-6′);13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ:80.7(C-2), 71.8 (C-3), 75.4(C-4), 81.3 (C-4a), 165.7 (C-6), 119.5 (C-6a), 111.2 (C-7), 152.4 (C-8), 140.1 (C-9), 149.3 (C-10), 117.0 (C-10a), 74.4 (C-10b), 64.6(C-11), 61.0(9-OCH3), 121.0 (C-1′), 110.3 (C-2′，6′), 146.6(C-3′，5′), 142.3 (C-4′), 168.2(7′-CO)。以上数据与文献[8]对照基本一致，故鉴定为11-O-没食子酸酰基岩白菜素。

化合物4：白色粉末。ESI-MSm/z: 477.1[M-H]-。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ：3.51～3.54 (1H, m，H-3), 3.55～3.58 (1H, m, H-4),3.82～3.88 (1H, m, H-2), 3.89 (3H, s, 9-OCH3), 3.91 (3H, s, 3′-OCH3), 3.97 (1H, ddd,J=2.2, 6.9, 9.3 Hz, H-4a), 4.10 (1H, dd,J=9.4, 10.5 Hz, H-11a), 4.39 (1H, dd,J=7.0, 12.2 Hz, H-11b), 5.03 (1H, d,J=10.4 Hz, H-10b), 7.00 (1H, d,J=8.5 Hz, H-5′), 7.08 (1H, s, H-7), 7.49 (1H, d,J=2.1 Hz, H-2), 7.60 (1H, dd,J=2.1, 8.5 Hz, H-6);13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ：80.6 (C-2), 71.9 (C-3), 75.5 (C-4), 81.3 (C-4a), 165.7 (C-6), 119.4 (C-6a), 111.2 (C-7), 152.4 (C-8), 149.3 (C-10), 117.0 (C-10a), 74.4 (C-10b), 64.4 (C-11), 123.7 (C-1′), 111.9 (C-2′), 147.6 (C-3′), 153.7 (C-4′), 123.5 (C-6′),167.8 (C-7′CO),60.9 (9-OCH3),56.4(3′-OCH3)。以上数据与文献[9]对照基本一致，故鉴定为11-O-香草岩白菜素。

化合物5：白色粉末。ESI-MSm/z: 477.1[M-H]-。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 3.49～3.54 (1H, m，H-3), 3.58 (1H, dd,J=4.6, 11.3 Hz, H-4), 3.87 (3H, s, 9-OCH3), 3.94 (3H, s, 4′-OCH3), 3.98 (1H, ddd,J=2.3, 7.8, 10.0 Hz, H-2), 4.08～4.14 (1H, m, H-4a), 4.30 (1H, dd,J=7.8, 12.2 Hz,H-11a), 4.97 (1H, dd,J=2.3, 12.1 Hz, H-11b), 5.05 (1H, d,J=10.4 Hz, H-10b), 6.84～6.88 (1H, m, H-7), 7.09 (1H, d,J=1.5 Hz, H-5′), 7.60 (1H, d,J=1.5 Hz, H-2′), 7.62 (1H, d,J=2.0 Hz, H-6′)；13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ：80.6 (C-2), 72.2 (C-3), 75.5 (C-4), 81.3 (C-4a), 165.6 (C-6), 119.5(C-6a), 111.2 (C-7), 152.5 (C-8), 149.4 (C-10), 117.0 (C-10a), 74.4 (C-10b), 64.4 (C-11), 122.0 (C-1′), 116.0(C-2′), 148.8(C-3′), 153.2 (C-4′), 113.6 (C-5′),125.4 (C-6′), 167.8 (C-7′CO),60.9 (9-OCH3), 56.6 (4′-OCH3)。以上数据与文献[9]对照基本一致，故鉴定为11-O-异香草岩白菜素。

化合物6：白色粉末。ESI-MSm/z: 507.1[M-H]-。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ: 3.48 (1H, m, H-3), 3.68 (1H, m, H-4), 3.85 (3H, s, 9-OCH3), 3.93 (6H, s, 3，5′-OCH3), 4.00 (1H, m, H-2), 4.12(1H, m, H-4a), 4.25 (2H, dd,J=8.3, 12.0 Hz, H-11a，11b), 5.05 (H, d,J=1.8 Hz, H-10b), 7.09 (1H, d,J=1.5 Hz, H-7), 7.39 (2H, s, H-2′，6′);13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ:80.5 (C-2), 72.4(C-3), 75.5 (C-4), 81.2 (C-4a), 165.6 (C-6), 119.5(C-6a), 111.2 (C-7), 152.7 (C-8), 149.5 (C-10), 117.0 (C-10a), 74.3 (C-10b), 64.4 (C-11), 119.5 (C-1′), 108.3(C-2′，6′), 142.4 (C-4′),167.7 (C-7′CO),60.9 (9-OCH3), 56.9(3′，5′-OCH3)。以上数据与文献[9-10]对照基本一致，故鉴定为11-O-丁香酰基岩白菜素。

化合物7：白色粉末。ESI-MSm/z: 491.1[M-H]-。1H-NMR (400 MHz, CD3OD)δ：3.58 (H, s，H-3), 3.85 (1H, d,J=9.4 Hz, H-4), 3.87 (3H, s, 9-OCH3), 3.91 (3H, s, 3′-OCH3), 3.92 (3H, s, 4′-OCH3), 3.97～4.01 (1H, m, H-2), 4.09～4.15 (1H, m, H-4a), 4.34(1H, dd,J=7.7, 12.2 Hz, H-11a), 4.97～5.01(1H, m, H-11b), 5.06 (1H, d,J=10.5 Hz, H-10b), 7.06(d,J=8.5 Hz, H-7), 7.10 (1H, s, H-5′), 7.60 (1H, d,J=2.0 Hz, H-2′), 7.74 (1H, dd,J=2.1, 8.5 Hz, H-6′);13C-NMR (100 MHz, CD3OD)δ：80.5 (C-2), 72.4 (C-3), 75.5 (C-4), 81.3 (C-4a), 119.5(C-6a), 111.2 (C-7), 152.6 (C-8), 150.1 (C-10), 117.0 (C-10a), 74.3 (C-10b), 64.4 (C-11), 123.3 (C-1′), 112.0 (C-2′), 155.1 (C-4′), 113.3 (C-5′),125.1 (C-6′), 167.6 (C-7′CO),60.9 (9-OCH3), 56.5 (3′-OCH3), 56.6 (4′-OCH3)。以上数据与文献[10]对照基本一致，故鉴定为11-O-(3′，4′-二甲氧基苯甲酰)岩白菜素。

化合物8：白色粉末。ESI-MSm/z: 1 058.6[M-H]-。1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ： 0.73 (1H, dd,J=2.1, 11.7 Hz，H-5), 0.85 (3H, s, H-24), 0.90 (3H, s, H-25), 0.98 (3H, s, H-29), 1.06 (3H, s, H-23), 1.14 (3H, s, H-26),1.28 (3H, s, H-27),1.76 (1H, m, H-2), 1.87 (1H, m, H-2), 1.97 (1H, m, H-19), 2.51 (1H, dd,J=12.5, 14.5 Hz, H-19), 3.00 (1H, d,J=7.6 Hz, H-28), 3.13 (1H,dd,J=9.4, 4.5 Hz, H-3), 3.17～3.21(2H, m, glu′-4，2), 3.35(6H, s, xyl-2，5，3；glu′-5，5，4), 3.37～3.41 (2H, m, glu′-3，2)，3.48(1H, d,J=7.7 Hz, H-28),3.53～3.54(2H, m, xyl-4), 3.54～3.55(2H, m, ara-5), 3.56(1H, m, glu-3), 3.60 (1H, dd,J=6.7, 12.0 Hz, glu′-6), 3.67 (1H, dd,J=5.7, 12.0 Hz, glu-6), 3.79～3.81 (2H, m, ara-2，3), 3.84 (1H, dd,J=2.2, 12.0 Hz, glu′-6), 3.86～3.90 (1H, m, ara-4), 3.93 (1H, d,J=5.2 Hz, H-16), 4.00 (1H, dd,J=5.3, 11.4 Hz, xyl-5), 4.23 (1H, dd,J=3.1, 12.7 Hz, ara-5), 4.39～4.41 (1H, m, ara-1), 4.52 (2H, dd,J=4.2, 7.7 Hz, glu-1 and xyl-1), 4.70 (1H, d,J=7.7 Hz, glu′-1), 9.41 (1H, s, H-30);13C-NMR (151 MHz, CD3OD)δ: 37.8(C-1), 27.2(C-2), 91.4(C-3), 40.6(C-4), 56.8(C-5), 18.7(C-6), 35.1(C-7), 43.4(C-8), 51.3(C-9), 40.2(C-10), 19.8(C-11), 32.7(C-12), 88.2(C-13), 45.3(C-14), 37.0(C-15), 77.6(C-16), 44.7(C-17), 54.0(C-18), 33.9(C-19), 49.9(C-20), 30.9(C-21), 32.7(C-22), 28.3(C-23), 16.7(C-24), 16.7(C-25), 18.8(C-26), 20.1(C-27), 78.4(C-28), 24.3(C-29), 209.3(C-30);arabinose: 105.6(C-1), 79.4(C-2), 74.3(C-3), 80.2(C-4), 65.8(C-5); Glucose: 104.8(C-1), 85.1(C-2), 77.6(C-3), 70.9(C-4), 78.0(C-5), 63.3(C-6); xylose: 107.3(C-1), 75.9(C-2), 77.9(C-3), 71.1(C-4), 67.4(C-5); Glucose′: 104.3(C-1), 76.0(C-2), 77.8(C-3), 72.0(C-4), 77.8(C-5), 62.4(C-6)。以上数据与文献[11]对照基本一致，故鉴定为百两金皂苷A。

化合物9：无色油状液体。ESI-MSm/z: 277.2[M-H]-。1H-NMR (600 MHz, CD3OD)δ：0.98 (6H, t,J=7.4 Hz, H-15，16), 1.49 (4H, m, H-13，14), 1.69 (4H, m, H-11，12), 4.29 (4H, t,J=6.6 Hz, H-9，10), 7.61 (2H, dd,J=3.3, 5.7 Hz, H-7，8), 7.72 (2H, dd,J=3.3, 5.7 Hz, H-5，6);13C-NMR (151 MHz, CD3OD)δ:14.0(C-15，16), 20.3 (C-13，14), 31.7(C-11，12), 66.6 (C-9，10)，129.9 (C-7，8), 132.3 (C-5，6), 133.6 (C-3，4), 169.3(C-1，2)。以上数据与文献[12]对照基本一致，故鉴定为邻苯二甲酸二丁酯。

4 讨论

岩白菜素具有较好的止咳作用，2015年版《中国药典》一部将其收载为镇咳祛痰药，主要用于治疗慢性支气管炎类疾病，而且不产生耐药性，不良反应小，在紫金牛属的其他植物走马胎、朱砂根中也均发现了该成分[13-14]，同时还有明显的消炎作用[15],在长叶纽子果中首次被分离出来。另外，三萜类具有很好的抗肿瘤作用[16-18]。本课题组从长叶纽子果中分离出1个岩白菜素、6个岩白菜的衍生物、1个三萜类和1个其他类，可为该植物药效物质基础与临床应用考察提供参考。