西门塔尔犊牛腹泻病例的病原分离及鉴定

黄海波，莫 岩，张智刚

（1.大庆市兴牧科技有限公司，黑龙江 大庆 163319；2.黑龙江省和平牧场有限公司农业发展部，黑龙江 大庆 163851；3.肇东市动物疫病预防控制中心，黑龙江 肇东 151100）

腹泻是近年来规模化牛场犊牛的常见疾病，主要由传染病、寄生虫和中毒等引起，特别是在冬春季节变换，气温骤变时发病率升高。幼龄犊牛感染大肠杆菌的主要临床症状是发生腹泻，而成年牛主要以乳腺炎等局部感染为主，严重的会引发全身感染形成败血症导致死亡。大肠杆菌属于肠杆菌科、埃希菌属，是革兰阴性无芽孢杆菌，菌体形状呈椭圆形，周身有鞭毛存在，可运动，也有的有菌毛，大多数菌株无荚膜。过去大肠杆菌常被认为是人和动物体内肠道的正常菌群，属于非致病菌，但越来越多的研究证实一些血清型的大肠杆菌是存在致病性的。大肠杆菌在动物和人类出生后几小时便可经各种渠道进入机体进行大量増殖，伴随人类和动物终生。研究表明致病性大肠杆菌是人畜共患性细菌，在给人类健康造成巨大威胁的同时，还给养殖业带来很大的经济损失。

1 发病情况

2021年3月13日，接到大庆地区某养殖户所送病料。养殖户存栏20头左右西门塔尔犊牛。犊牛出现持续性发病，出现腹痛、腹泻、消瘦、毛粗乱无光并带有精神沉郁等临床症状，据畜主介绍近期刚引进的断奶犊牛没有进行相应的疫苗接种，并且养殖牛群密度较大，且饮用未经消毒的自来水进行饲喂。牛群近10d发病，送检病料前死亡7头，发病养殖场附近无相似病例。发现疾病时，兽医进行了相应治疗。根据临床诊断和流行病学调查，初步诊断为牛大肠杆菌感染。发病原因主要是饮用大肠杆菌污染的自来水。

2 临床症状

患牛初期除出现食欲减退，长卧不起和排出少量稀便外无其他明显症状。随着病情的发展，出现严重腹泻且腹痛不安，共济失调、不断努责排出黄白色稀样便。体温升高，脉搏虚弱、呼吸困难迅速进入昏迷状态并虚脱死亡。

3 实验室诊断

3.1细菌分离培养 无菌采取死亡犊牛的小肠，在超净工作台取肠内容物及粪便进行平板划线，接种于营养琼脂培养基中，37℃培养18～24h。观察菌落的形态，挑取单个菌落划线接种于营养琼脂培养基，纯化后的菌落划线接种与伊红美蓝和麦康凯鉴别培养基。37℃培养18～24h。将分离的菌株进行革兰染色镜检，结果显示为革兰氏阴性杆菌；在伊红美蓝培养基上形成黑色并带有金属光泽的菌落；在麦康凯培养基上可见光滑粉红色中等大小的菌落。

3.2 细菌16s rRNA的PCR鉴定选择细菌16s rRNA通用引物，用纯化培养的菌液提取DNA做模版，PCR扩增后将产物进行1%琼脂糖凝胶电泳和照相。结果表明，扩增出大小约为1384 bp目的片段，与预期扩增片段相符。

3.3 药敏试验吸取100μL菌液放置于营养琼脂上，随后用灭菌过的L棒将菌液均匀的涂布，观察营养平板的吸收情况，待菌液吸收完全后，在营养琼脂平板中贴上新生霉素、大观霉素、氯霉素、多粘菌素、氨曲南、多链霉素、环丙沙星、头孢他啶、甲氧嘧啶、四环素、庆大霉素、林可霉素等药敏片，37℃培养18～24h。结果显示大部分药物对该分离株都显示出耐药性，只有多链霉素和氨曲南中度敏感。

4 综合防治措施

（1）对牛舍进行彻底清扫和消毒，死亡犊牛进行无害化处理。（2）加强饲养管理，注意环境卫生和防止水质污染，切断病原传播途径，强化防疫卫生意识。注意母牛的营养均衡，增强犊牛体质。（3）通过药敏实验结果可知，从犊牛中分离出来的致病性大肠杆菌对多种抗生素产生耐药。建议临床用药时，根据药敏试验结果和该养殖场的用药历史，选择敏感药物进行治疗，最好选择多种药物联合治疗。

5 小结

该牛场犊牛腹泻死亡,经实验室诊断为致病性大肠杆菌感染。由于奶牛饮用了被大肠杆菌污染的自来水,致使牛群体内致病性大肠杆菌群滋生，肠道菌群紊乱，造成腹泻，严重的脱水死亡。母牛应该在产前加强饲养管理，可以进行疫苗免疫；犊牛产后尽快哺喂初乳，保障犊牛的健康。