Xpert MTB/RIF 在肺结核及耐药结核检测中的价值

王云格

结核病实验室检查可为结核病的确诊提供病原学证据,也是确诊传染性肺结核尤其是耐多药结核病的重要依据,是结核病诊断,治疗和防治效果评价的技术关键［1］。全国第五次结核病抽样调查资料显示,我国15 岁以上人群活动性涂阳和菌阳肺结核的患病率分别为459/10 万、66/10 万和119/10 万,结核分枝杆菌耐多药率为6.8%［2］。现今,因基层结核病防治机构实验室的基础设施、人力资源较为薄弱,以及研究经费也存在不足,菌阳肺结核主要采取痰涂片和痰培养等常规的方法检测。但常规方法的检出率相对较低,导致少数的菌阳肺结核无法及时发现。因此寻求一种结核分枝杆菌高检出率的方法,能够有效的确诊断肺结核以及其耐药性,可较好的控制结核病疫情。结核病的诊断取决于痰涂片的抗酸染色和结核分枝杆菌的培养,结核分枝杆菌培养和药物敏感性测试的条件较为苛刻,而在时效上,结核分枝杆菌培养和药物敏感性检测需要进行分离菌株培养,所耗时间达到2 个月,这定会对肺结核的最佳诊治时间造成延误,影响早期诊断结果［3］。耐药结核病的出现,对结核病的预防和控制带来了前所未有的挑战。随着分子生物学技术的飞速发展,Xpert MTB/RIF 技术应用在肺结核及耐药结核诊断检测中,从而为结核病的及时诊断起到了重要的作用。Xpert MTB/RIF 检测技术是世界卫生组织认可的一种全新的结核病快速检测方法,其操作简单,只需要一步的准备工作,2 h 够能够得到检测结果,具有生物安全性,并且具有很高的阳性检出率。Xpert MTB/RIF 技术与传统方法相比,敏感性和特异性更高,在基层结核病防治中有着重要的应用价值［2］。本次研究将150 例可疑耐药肺结核及初筛痰结核杆菌涂片阳性自愿行Xpert MTB/RIF 及结核杆菌培养的患者,对不同检测方法检测出的结核杆菌和耐药菌的情况进行研究分析如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 将本院于 2017年1 月～2019年1 月期间收治的可疑耐药肺结核及初筛结核杆菌涂片阳性自愿行Xpert MTB/RIF 及结核杆菌培养检查的150 例患者作为本次研究对象,其中男84 例,女66 例；年龄43～75 岁,平均年龄(54.78±6.75)岁；58 例为临床怀疑耐药结核病患者,占比38.67%,其中包括初治且规律一线抗结核治疗>3 个月结核杆菌涂片仍为阳性患者、复治失败患者、在发病前与开放性耐药肺结核有接触史的患者；92 例为初筛结核杆菌涂片阳性自愿行相关检测的患者,占比61.33%。以上患者均符合中华医学会结核病学分会发布的《肺结核诊断和治疗指南》中肺结核诊断标准。排除患有严重器官功能性障碍以及患有精神类疾病患者和近期采取抗结核治疗,在呼吸道中未留存足够标本的患者。患者及家属均对本次研究目的知悉,且自愿参加本次研究,此次研究已通过本院伦理委员会审核批准。

1.2 方法

1.2.1 设备与试剂 使用珠海贝索生物技术有限公司所生产的抗酸染色液,上海申贤恒温设备厂生产的隔水式恒温培养箱,珠海市银科医学工程股份有限公司生产的酸氏罗氏培养基,美国Cepheid 公司所生产的Xpert MTB/RIF 检测系统以及配套试剂。

1.2.2 检查方法 150 例可疑耐药结核病及结核杆菌涂片阳性的患者,取3 份清晨痰液样本予以荧光显微镜检查、结核菌培养和Xpert MTB/RIF 检查。如果结核菌培养的结果是结核分枝杆菌阳性,需要进行深入药敏试验。采取Xpert MTB/RIF 和常规结核菌培养技术对分枝杆菌和利福平耐药点检测予以对比。

1.3 观察指标 以结核杆菌培养及药敏试验结果为金标准,分析Xpert MTB/RIF 对疑似耐药结核病患者及结核杆菌涂片初筛阳性患者利福平耐药的检测灵敏度、特异度。

2 结果

2.1 Xpert MTB/RIF 对疑似耐药结核病患者利福平耐药的灵敏度、特异度分析 58 例疑似耐药结核病患者中,Xpert MTB/RIF 均检出结核分枝杆菌感染,检出利福平耐药5 例,占比8.62%；结核杆菌培养检出4 例利福平耐药,占比6.90%,以结核杆菌培养及药敏试验结果为金标准,Xpert MTB/RIF 对耐药结核病患者利福平耐药的灵敏度为100.00%(4/4),特异度98.15%(53/54)。

2.2 Xpert MTB/RIF 对结核杆菌涂片初筛阳性患者利福平耐药的灵敏度、特异度分析 92 例初筛结核杆菌涂片阳性患者中,Xpert MTB/RIF 均检出结核分枝杆菌,检出利福平耐药4 例,占比4.35%；结核杆菌培养检出3 例利福平耐药,占比3.26%。以结核杆菌培养及药敏试验结果为金标准,Xpert MTB/RIF 对结核杆菌涂片初筛阳性患者利福平耐药的灵敏度为100.00%(3/3),特异度98.88%(88/89)。

3 讨论

我国的结核病发病率较高,根据相关结核病流调结果得知,我国活动性肺结核患者较多,结核病耐药情况较为严重,因此对结核病、耐药结核病的早期诊断以及治疗格外重要［3］。结核病是一种常见的慢性传染性疾病,对患者的健康和生活质量产生严重影响［4］,每年全球有大约150 万人因结核病而导致死亡。一些结核病患者起病隐匿,早期可能没有症状,因此,结核病的早期发现、早期诊断和早期治疗对提高治愈率、降低感染率、死亡率具有重要的意义［5］。临床诊断中最常用的肺结核诊断方法则有分枝杆菌培养、抗酸染色显微镜检等,以上方法具有经济、简便等特点,但检出率相对偏低,且培养耗时。因此,采取快速、准确的检出方法将对提高结核病的诊断率起到重要作用。

现如今,医疗水平在不断发展,Xpert MTB/RIF 检测技术能够快速特异地检测出结核分枝杆菌及利福平耐药,为临床诊断和治疗提供可靠的参考,具有较好的临床价值。Xpert MTB/RIF 检测技术是一种半巢式实时荧光PCR 体外诊断技术,可对结核分枝杆菌DNA 以及利福平耐药突变基因进行检测,用于诊断结核病和利福平耐药结核病。全过程仅需约2 h,操作简单。在进一步提高诊断符合率的同时,提高诊断的敏感性和特异性。由于其全封闭式的检测技术,具有很高的生物学安全性。基于结核分枝杆菌DNA,可用于有效消除非结核分枝杆菌的干扰,与非结核分枝杆菌无交叉反应。在常凤霞［6］的相关研究中得知,Xpert MTB/RIF检测技术使用MTB DNA 作为检测对象,可以排除非结核分枝杆菌的干扰。荧光染色与固体培养只能检测到分枝杆菌,则会较大几率造成误诊。如果染色或培养阳性/Xpert MTB/RIF 阴性,则可能怀疑样品中含有非结核分枝杆菌,这需要通过菌株鉴定予以进一步确认。

在对结核杆菌涂片阳性的疑似耐药结核病患者采取Xpert MTB/RIF 检测后均检出结核分枝杆菌感染,其检测灵敏度、特异度较高。同时对耐药菌的检测的灵敏度和特异度也较高,充分说明了该方法在肺结核及耐药结核检测中有着重要的价值。在李桂杭等［7］的相关研究中得知,Xpert MTB/RIF 检测法的灵敏度为87.50%,高于液体分枝杆菌培养管(MGIT)培养法的66.67%,差异有统计学意义(P<0.05)；Xpert MTB/RIF检测法的特异性为91.67%,明显高于液体MGIT 培养法的25.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。在其结果中可以看出Xpert MTB/RIF 技术在上临床有着较好的应用价值,能够对肺结核的早期诊断起到很好作用。

综上所述,Xpert MTB/RIF 是一种准确、快速的诊断肺结核及耐药结核病的有效手段,生物安全要求较低,确具有生物安全性。并且具有很高的阳性检出率,和较高的检测灵敏度、特异度,该方法值得在临床检测上推广应用。