慢性输卵管炎动物模型建立方法的研究进展

朱博玉，黄叶芳，刘 柔，曹 雪，王 妍

（成都中医药大学附属医院，四川 成都 610075）

慢性输卵管炎多由急性输卵管炎迁延不愈所致。输卵管若长时间地受到炎症反应的刺激，可发生粘连及阻塞，导致输卵管炎性不孕（tubal inflammatory infertility，TII）。通过进行动物实验研究慢性输卵管炎的发生发展规律，可为临床上治疗该病提供丰富的理论依据及思路。建立动物模型是进行动物实验的基础。目前，临床上用于建立慢性输卵管炎动物模型的方法可分为化学性方法和生物性方法两种类型。其中，化学性方法以苯酚胶浆法为代表，生物性方法则是通过为实验动物接种衣原体、支原体、大肠杆菌及金黄色葡萄球菌等病原微生物来进行造模。本文就慢性输卵管炎动物模型建立方法的研究进展综述如下。

1 用化学性方法建模

建立慢性输卵管炎动物模型的化学性方法以苯酚胶浆造模法为代表。苯酚具有腐蚀性，能化学烧伤正常的组织结构，引发局部炎症反应。在上个世纪70年代，临床上将苯酚作为黏堵剂阻塞输卵管，以达到绝育的目的。目前，临床上仍沿用该思路用苯酚制作慢性输卵管炎的动物模型。在不同的研究中，用于制作苯酚胶剂的药物及其配比不完全相同，但大都是由苯酚加各种赋形剂制作而成的。申旭霁等[1]将大鼠麻醉后，向其双侧的输卵管中各注射 0.05 mL浓度为25%的苯酚胶浆。术后，大鼠输卵管的管腔明显阻塞，留存大量的液体，其输卵管的管壁变薄，并与周围的组织发生粘连。对大鼠的输卵管进行组织病理学检查的结果可见，其输卵管黏膜的上皮细胞发生增生、变性及坏死，其输卵管黏膜的固有层出现炎性浸润，其血液流变学指标也发生显著的变化。谷风[2]采用苯酚胶浆法制备慢性输卵管炎大鼠模型。在造模后第22天，模型组大鼠输卵管组织细胞的胞浆、间质细胞中的黄染颗粒明显多于正常组大鼠。徐昕[3]用苯酚糊剂制备慢性输卵管炎大鼠模型。造模1个月后，模型组大鼠输卵管的色泽苍白、管腔的粗细不均，并与周围组织发生不同程度的粘连，提示造模成功。王清等[4]为了对比经不同的途经用中药治疗慢性输卵管炎的疗效，在对2只新西兰雌兔进行预实验时为其注射复方苯酚糊剂。术后4周，对这2只雌兔进行光镜检查的结果显示，在其4条输卵管中，有3条输卵管内形成异物肉芽肿，并阻塞管腔，有1条输卵管内出现局灶性炎性细胞浸润。这表明，用苯酚糊剂制备的慢性输卵管炎动物模型可模拟女性输卵管发生炎性改变后出现的管腔阻塞或部分阻塞的病理变化情况。

由此可见，以苯酚胶剂为致炎剂建立慢性输卵管炎动物模型操作简便、容易控制，研究人员无被感染的风险。而且，用该材料建立的动物模型可较好地模拟女性输卵管炎的病理学变化情况。不过，由于用该材料建立动物模型的机制是利用化学物质的刺激作用直接引起炎症反应，与实际情况中由病原体感染致病的发病机制有所差别，故其不如生物性方法的使用广泛。

2 用生物性方法建模

2.1 金黄色葡萄球菌建模法

金黄色葡萄球菌是常见的食源性致病菌，能在各种恶劣的环境中存活下来。该菌也是导致输卵管感染发生的常见菌种。徐桂中等[5]将小鼠开腹后，向其输卵管（近卵巢方向）缓慢地注入1×109/mL的金黄色葡萄球菌悬液。术后第45 d，造模小鼠输卵管的通畅率低于对照组小鼠，其输卵管的肉眼外观、光镜结构变化均呈慢性炎症的表现，其受孕率明显低于对照组小鼠。胡喜姣等[6]将大鼠麻醉后开腹，向其腹中注入4×109/mL的金黄色葡萄球菌悬液，并在注射完的第7 d、第14 d、第21 d、第28 d分别将其处死，然后肉眼观察其输卵管的形态改变情况，并对其输卵管组织进行金黄色葡萄球菌培养及病理学检查。研究结果证实，用金黄色葡萄球菌可在7 d制备完成急性输卵管炎动物模型，在21 d制备完成慢性输卵管炎动物模型，在28 d制备完成TII动物模型。

2.2 大肠埃希菌建模法

大肠杆菌通常寄居在人体的肠道中，并不致病。当该菌进入输卵管等生殖系统时，可引起炎症反应[7]。李莉等[8]将小鼠开腹后，向其子宫角近卵巢的部位输注大肠杆菌悬液。输注完30 d后，将小鼠处死，在镜下观察其输卵管，可见其输卵管的管壁增厚、结构被破坏，输卵管黏膜中的间质细胞减少，输卵管内膜及肌层出现大量的炎性细胞浸润。冯子聪等[9]对比用单一的大肠埃希菌混悬液和混合菌液（按照2：1：1的比例将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌及链球菌混合）经阴道、宫腔插管灌注建立慢性输卵管炎兔模型的效果。结果显示，两组实验兔的输卵管均呈现典型的慢性炎症的表现。但用混合菌混悬液制备的兔模型更符合细菌逆行感染输卵管的实际情况。用单一的大肠埃希菌建模则具有操作简便、经济实用等优点。

2.3 衣原体和支原体建模法

慢性输卵管炎的发生与患者存在解脲支原体感染、沙眼衣原体感染及解脲支原体联合沙眼衣原体感染均具有密切的相关性[10]。利用解脲支原体与沙眼衣原体建立的动物模型也符合慢性输卵管炎实际的动态发展过程。Zhang Yu yang等[11]对发生沙眼衣原体感染的小鼠进行持续性的炎症刺激，以研究子宫输卵管交界处在预防衣原体上行感染中的作用。刘丽等[12]通过在小鼠的阴道内接种沙眼衣原体建立动物模型。在接种完22 d后处死小鼠，对其输卵管进行光镜观察。结果显示，小鼠输卵管的纤毛功能受损，并出现结缔组织增生、炎症细胞浸润等慢性炎症的表现。

2.4 混合菌建模法

混合菌建模法是指用大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌及链球菌混合制成感染致炎剂，以达到制备动物模型的目的。该建模法具有造模的成功率高、原料比支原体、衣原体易获得等优点，成为目前常用的造模方法。赵广兴[13]按照2：1：1的比例将大肠埃希菌、金葡菌、链球菌用无菌生理盐水稀释后，配制成混合菌悬浊液，并将其注入大鼠子宫角近输卵管部。注射完20 d后，模型组大鼠输卵管的组织形态出现慢性炎症的表现，并发生不孕。该方法成为建立慢性输卵管炎动物模型的常用方法。周波文[14]考虑到赵广兴打开大鼠腹腔、注入感染液造模的方法操作难度较大，对无菌条件的要求较高，对动物的损伤大，故使用更简便易行的经阴道注菌法进行建模。在注菌后第20 d，即可观察到炎症细胞扩散至大鼠的整个输卵管。

3 用病证结合的方法建模

用中医药治疗慢性输卵管炎的优势明显。随着现代中医学研究的不断发展，可反映中医特色的病证结合造模法也日渐完善。王婷婷等[15]使用混合菌（按照2：1：1的比例将大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌及链球菌混合）建立慢性输卵管炎动物模型后，对实验动物进行分组，然后分别对其进行光电刺激、夹尾、皮下注射肾上腺素操作，从而模拟气滞血瘀型输卵管炎大鼠的证候。郑悦[16]、邓天琦[17]使用金黄色葡萄球菌联合应激刺激（包括声、光、电及夹尾刺激）成功建立气滞血瘀型输卵管炎大鼠模型。顾仁艳[18]先将大鼠浸入冰水中5 min，制备血瘀型大鼠模型，再联合苯酚糊剂建立血瘀型输卵管炎大鼠模型。

4 小结与展望

慢性输卵管炎可引起不孕。对该病患者的病情进行及时准确的诊治对于改善其生活质量具有重要的意义。建立有效的动物模型是进一步探讨慢性输卵管炎致病机制、临床表现及特征的基础，故相关的研究人员越来越重视对建模方法的研究。成功的慢性输卵管炎动物模型应尽可能地模拟女性输卵管炎的发病过程。因此，单纯利用苯酚胶剂等化学物质的刺激建立动物炎症模型的建模方法在临床上的使用逐渐减少。随着临床上对解脲支原体、沙眼衣原体等病原体研究的逐渐深入，病原体感染建模法成为研究的热点。近年来，病证结合建模法获得快速发展，但尚缺乏统一的评价体系。另外，在使用各种生物活性物质建立动物模型时，均应严格控制病原体的数量及其流动情况，以保证实验人员的安全。