乳腺癌组织中Cath-D、c-erbB-2的表达及其与肿瘤标志物水平、淋巴结转移的相关性

齐小芬 白 宾 薛会朝 王 瑜 王国英 秦 双

乳腺癌患者的基础发病率较高，其远期多器官功能衰竭或者临床预后恶化风险的比例持续维持在较高的水平[1]。乳腺癌患者容易早期发生淋巴结转移，而淋巴结转移的发生能够显著影响患者治疗方案的选择和临床预后水平。不同的病理性因素均能够促进淋巴结转移的发生，分子生物学水平的改变，能够在促进癌细胞转移和淋巴结浸润过程中发挥重要的作用[2]。组织蛋白酶D(Cath-D)的表达能够通过促进癌细胞间质成分的分解，为癌细胞侵袭淋巴结提供基础[3]；表皮生长因子受体2(epidermalgrowthfactorreceptor，c-erbB-2)的上升，能够通过诱导其他生长因子家族成员的激活，最终提高肿瘤细胞的生长和复制风险[4]。为了揭示Cath-D、c-erbB-2的表达与乳腺癌的关系，从而为临床上乳腺癌患者的淋巴结转移高危评估提供参考，本次研究探讨了Cath-D、c-erbB-2的表达及其与乳腺癌患者体内肿瘤标志物和淋巴结转移的关系，报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2017年2月至2018年2月在我院接受手术治疗的乳腺癌患者为研究对象。纳入标准：①成年者；②经术中病理检查确诊为乳腺癌者；③无其他原发肿瘤者。排除标准：①不愿参与本项研究者；②合并严重基础疾病者。根据标准共纳入乳腺癌患者100例，年龄30～56岁，平均(45.83±8.05)岁。乳腺纤维腺瘤纳入标准：年龄≥18周岁，经术中病理确诊为乳腺纤维腺瘤者，共纳入100例，年龄28～52岁，平均(45.72±10.13)岁。2组的资料分布无明显差别，具有可比性。

1.2 检测方法

石蜡切片采用二甲苯进行脱腊至水，5%的双氧水常温在孵育10 min，采用磷酸盐缓冲液孵育5 min，蒸馏水冲洗3次，每次5 min，5%的山羊血清抗体封闭10 min，不冲洗，滴加一抗(购自abcum公司，浓度：1∶500)，4 ℃冰箱孵育过夜，蒸馏水冲洗3次，每次5 min，滴加生物素标记好的二抗(购自北京康泰生物，浓度：1∶1000)，37 ℃孵育30 min，蒸馏水冲洗3次，每次5 min，滴加第二代辣根酶标记的工作液体，37 ℃孵育10 min，蒸馏水冲洗3次，每次5 min，显色之后采用酒精脱水、二甲苯透明、树胶封片，镜下观察。采集入院后静脉血，离心后收集上清液，采用免疫发光法检测CEA、CA15-3、CA125水平，检测仪器为美国Bio-Bad全自动酶标仪，配套试剂盒购自罗氏检测公司。

1.3 评价指标

观察乳腺癌(有、无淋巴转移组)、乳腺纤维腺瘤患者组织切片Cath-D、c-erbB-2阳性表达情况，比较乳腺癌(有、无淋巴转移组)、乳腺纤维腺瘤患者血清肿瘤标志物水平的差异，分析淋巴结转移的乳腺癌患者Cath-D、c-erbB-2阳性表达与肿瘤标志物水平的相关性。

1.4 统计学处理

采用SPSS 11.5软件分析。采用卡方检验、t检验进行统计学处理。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 乳腺癌组和纤维腺瘤组患者组织切片Cath-D、c-erbB-2阳性表达的比较

乳腺癌组患者的组织切片Cath-D、c-erbB-2阳性表达率均高于乳腺纤维腺瘤组(χ2值=51.796、70.090，P<0.001)，见表1。

表1 乳腺癌组和纤维腺瘤组患者组织切片Cath-D、c-erbB-2阳性表达的比较(例，%)

2.2 有、无淋巴结转移乳腺癌患者组织切片Cath-D、c-erbB-2阳性表达的比较

有淋巴结转移的乳腺癌患者组织切片Cath-D、c-erbB-2阳性表达率高于无淋巴结转移组(P<0.05)。见表2。

表2 有、无淋巴结转移乳腺癌患者组织切片Cath-D、c-erbB-2阳性表达的比较(例，%)

2.3 乳腺癌组和纤维腺瘤组患者血清肿瘤标志物水平的比较

乳腺癌组患者血清CEA、CA15-3、CA125水平均高于乳腺纤维腺瘤组(P<0.001)。见表3。

2.4 有、无淋巴结转移乳腺癌患者血清肿瘤标志物水平的比较

有淋巴结转移组患者血清CEA、CA15-3、CA125水平高于无淋巴结转移组(t=16.681、27.880、23.216，P<0.001)。见表4。

表3 乳腺癌组和纤维腺瘤组患者血清肿瘤标志物水平的比较

表4 有、无淋巴结转移乳腺癌患者血清肿瘤标志物水平的比较

2.5 淋巴结转移的乳腺癌患者Cath-D、c-erbB-2阳性表达与肿瘤标志物的相关性

有淋巴结转移的乳腺癌患者Cath-D、c-erbB-2阳性表达率与血清CEA、CA15-3、CA125水平呈正相关。见表5。

表5 乳腺癌患者Cath-D、c-erbB-2与肿瘤标志物的相关性

3 讨论

在具有BRCA基因突变的患者中，乳腺癌的发病率可显著的上升[5]。现阶段临床上通过手术及放化疗措施综合性治疗乳腺癌，但治疗后的患者病情进展风险仍然较高。长期的临床随访研究认为，淋巴结转移的发生是影响乳腺癌治疗预后的重要因素[6]，淋巴结转移能够导致乳腺癌患者远期复发风险的上升，缩短乳腺癌患者的生存时间[7]。一项囊括了172例样本量的乳腺癌患者病情随访观察分析可见，发生淋巴结转移的乳腺癌可占到所有病例的35%以上，特别是在中晚期患者中，淋巴结转移的风险更高[8]。而本次研究对于乳腺癌患者体内Cath-D、c-erbB-2的表达与患者淋巴结转移关系的研究，能够揭示乳腺癌的临床病理特征的进展机制，从而为改善患者的生存预后提供参考。

Cath-D是组织蛋白酶家族成员，主要表达于平滑肌上皮组织和脂肪组织成分中。Cath-D结构上包含了多个可水解的蛋白酶区域，能够通过对于组织蛋白的水解作用，提高癌细胞的侵袭能力[9-10]；c-erbB-2是表皮生长因子家族成员，能够提高癌细胞的增殖速度，促进癌细胞DNA的持续性扩增。越来越多的研究还认为，c-erbB-2的表达能够提高癌细胞的变形能力，提高淋巴结前哨转移的风险[11]。

在本次研究中可以发现，Cath-D、c-erbB-2蛋白在乳腺癌患者中的表达浓度明显的上升，提示了Cath-D、c-erbB-2可能参与了乳腺癌的发生发展过程，这主要考虑与Cath-D的表达上升，能够影响到上皮细胞间质转换的风险，促进了肿瘤细胞的浸润，而c-erbB-2的表达上升能够影响癌细胞的增殖特性，进而促进癌细胞的持续性扩增过程。黄少江等[12]研究者也发现了c-erbB-2蛋白在乳腺癌患者中的异常表达情况，其发现在乳腺癌临床分期进展较为迅速的患者中，c-erbB-2蛋白的表达阳性率可明显上升。在探讨Cath-D、c-erbB-2的表达与淋巴结转移关系的过程中发现，在发生了淋巴结转移的患者中，Cath-D、c-erbB-2的表达阳性率明显的上升，高于未发生转移的乳腺组织，差异较为明显，提示Cath-D、c-erbB-2的表达能够显著促进淋巴结的转移。分析其原理，考虑与Cath-D、c-erbB-2的下列作用机制有关[13-15]：①Cath-D的表达上升能够提高肿瘤细胞伪足形成的风险，促进了肿瘤细胞的浸润和粘附；②c-erbB-2的表达上升能够促进癌细胞的转录和增殖活性的增强，维持癌细胞在淋巴结组织区域的生长能力。CEA、CA15-3、CA125是非特异性的肿瘤标志物，在乳腺癌患者中，相关肿瘤标志物的表达浓度明显的上升，特别是在合并有淋巴结转移的患者中，CEA、CA15-3、CA125的表达浓度可进一步的上升，这主要由于CEA、CA15-3、CA125能够提高癌细胞粘附淋巴结内皮组织的能力。最后相关关系分析可见，Cath-D、c-erbB-2阳性表达率与血清CEA、CA15-3、CA125水平正相关，进一步提示了Cath-D、c-erbB-2的表达与乳腺癌患者的病情关系。

本次研究的创新性在于探讨了Cath-D、c-erbB-2的表达与乳腺癌淋巴结转移的关系。综上所述，乳腺癌患者病理组织中Cath-D、c-erbB-2阳性表达率较高，且与淋巴结转移和肿瘤标志物水平相关。