麦门冬汤对间质性肺炎小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞自噬及肺水清除的作用机制研究

赵跃恒 常姗 史瑞玲 张华

1.河南省荣军医院 河南，新乡 453002 2.郑州大学附属郑州中心医院

特发性肺纤维化 （idiopathic pulmonary fibrosis，IPF）是一种慢性进行性间质性肺部疾病，肺部损害不可逆转，患者预后较差，确诊后患者的预计生存期为3～5年，男性发病率高于女性[1]。该病以慢性进行性肺间质损害和肺纤维化为主要特征，患者表现为慢性咳嗽和渐进性呼吸困难，组织病理学检查可见肺间质细胞增生和细胞外基质过度沉积，药物造成的肺损伤还可出现肺水肿、呼吸性碱中毒等情况[2]。IPF的病因复杂，与环境、遗传和衰老等多种因素有关，现有治疗药物较少，且不良反应较多，尚不能显著提高患者存活率，因此寻找有效的治疗药物是当前亟待解决的问题[3]。

麦门冬汤源于《金匮要略》，临床用于治疗虚热肺痿、胃阴不足之证，研究表明，麦门冬汤对肺纤维化、肺癌等严重的肺部疾病均有较好的治疗作用，但其治疗肺纤维化的作用机制尚不清楚[4]。自噬是一种基本的细胞生物学过程，可以降解病毒和细菌等微生物、受损细胞器和无法被蛋白酶降解的蛋白质等，是控制肺纤维化发展的一种保护机制[5-6]。自噬微管相关蛋白轻链3-Ⅱ（microtubule-associated protein light chain 3-Ⅱ，LC3-Ⅱ）是构成自噬体膜的主要成分，泛素结合蛋白p62则可结合泛素化蛋白和LC3，是一种选择性自噬接头蛋白，LC3和p62被证明是检测细胞自噬的重要标志物[7]。研究证明，IPF患者的肺上皮细胞和肺成纤维细胞自噬受到抑制，LC3-Ⅱ的表达显著降低，而哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（target of rapamycin，mTOR）的活性则显著增加，抑制磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol-3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B （protein kinase B，AKT）/mTOR通路的异常表达可能是减轻肺纤维化的有效策略[8]。自噬活动与肺纤维化发病密切相关，而目前关于麦门冬汤对肺纤维化细胞自噬的作用尚缺乏研究，故本研究以肺纤维化经典胞内代谢过程“自噬”为切入点，观察麦门冬汤对间质性肺炎小鼠肺纤维化和肺上皮细胞自噬的影响，并初步探究其作用机制，为IPF的药物治疗提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 实验动物 无特定病原体（specific pathogen free，SPF）级C57BL/6小鼠120只，雌雄各半，6～8周龄，体质量（20±2）g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司 [实验动物生产许可证号码：SCXK （京）2016-0006]，饲养于河南省实验动物中心实验室独立动物房[实验动物使用许可证号码：SYXK（豫）2016-0002]，饲养条件符合《实验动物管理条件》要求。饲养条件：室温（22±2）℃，湿度（50±10）%，每天定时换气，12h明暗交替，食水不限。研究方案获河南省荣军医院伦理委员会批准。

1.2 药品及试剂 麦门冬汤组方由麦门冬42g，半夏、甘草各6g，人参9g，粳米3g，大枣4枚组成，由郑州中心医院药剂科提供并制备；硫酸博来霉素（bleomycin，BLM）购于Sigma-Aldrich公司（批号：15361-1MG）；醋酸泼尼松片购于浙江仙琚制药股份有限公司（批号：170623）；蛋白定量试剂盒购于博士德生物公司（批号：AR0145）；胰蛋白酶、Ⅰ型胶原酶、杜氏改良Eagle培养基（Dulbecco's Modified Eagle Medium，DMEM）、胎牛血清、小鼠免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）、放射免疫沉淀法 （radio immunoprecipitation assay，RIPA）裂解液、苯甲基磺酰氟（phenylmethyl sulfonyl fluoride，PMSF）、电化学发光（electro chemi luminescence，ECL）、聚偏氟乙烯（polyvinylidene fluoride，PVDF）转印膜、苏木精-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色试剂盒、Masson三色染色试剂盒、Evans Blue、牛血清白蛋白、羟脯氨酸含量检测试剂盒、中性树胶均购于北京索莱宝科技有限公司（批号：T1300、C8140、12800017、1011-8611、SP031、R0010、P0100、PE0010、ISEQ00010、G1121、G1340、IE0280、A8020、BC0255、G8590）；α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、p62、LC3-Ⅱ、 磷酸化磷酯酰肌醇-3-激酶（phosphorylated-phosphatidylinositol-3-kinase，p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated-protein kinase B，p-AKT）和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（phosphorylated-mammalian target of rapamycin，p-mTOR）兔源单克隆抗体和羊抗兔二抗均购于美国CST公司（批号：19245、23214、3868、17366、4060、5536、7074）。

1.3 仪器 MET VX200-T型涡旋振荡器购于上海施锐贸易有限公司；IX53显微镜为日本奥林巴斯公司产品；G：BOX多功能凝胶成像系统购于Syngene公司；Multiskan MK3酶标仪购于Thermo Fisher Scientific公司；TGL16MB型高速冷冻离心机为长沙湘智离心机仪器有限公司产品。

1.4 方法

1.4.1 分组与造模 将120只C57BL/6小鼠随机分为6组：正常组、模型组、强的松组、麦门冬汤高剂量组、麦门冬汤中剂量组和麦门冬汤低剂量组，每组20只。除正常组小鼠经鼻腔滴注等量0.9%氯化钠溶液之外，其余各组小鼠均通过鼻腔滴注BLM建立间质性肺炎模型。以0.5%戊巴比妥钠溶液腹腔注射麻醉小鼠，捉持小鼠使其头部后仰，暴露鼻腔，用移液器吸取BLM溶液50μL缓慢滴入小鼠鼻腔，BLM浓度为6μg·μL-1，造模剂量为1μL·g-1，不足的部分以0.9%氯化钠溶液补充。药液经鼻腔进入小鼠气管内，将小鼠直立并旋转使药液均匀分布于肺组织，听诊器置于小鼠前胸，若闻及哮鸣音及湿罗音即提示造模成功[9]。造模完毕将小鼠放回笼内。

1.4.2 药物制备 取麦门冬汤组方，加入5倍量蒸馏水浸泡2h，煎煮3次，每次30min。用纱布过滤每次煎煮的药液，将3次煎煮所得药液浓缩至生药量1g·mL-1，分装后4℃冰箱保存备用。

1.4.3 给药方法 各组小鼠造模第2天开始给药。按照人与小鼠体表面积折算等效剂量，中剂量为8.58g·kg-1，高剂量为17.16g·kg-1，低剂量为4.29g·kg-1。 麦门冬汤高剂量组、中剂量组和低剂量组小鼠按照上述剂量灌胃给药，强的松组采用0.46g·kg-1强的松灌胃，正常组和模型组小鼠灌胃0.9%氯化钠溶液，给药体积均为0.2mL/10g，1次/d，连续28d。

1.4.4 肺组织湿干重比（wet/dry weight ratio，W/D）检测 每组选择10只小鼠，分离右上肺叶用于W/D检测，其余肺叶一部分置于4%多聚甲醛中固定，用于HE染色和Masson染色，另一部分用于羟脯氨酸含量检测和Ⅱ型肺泡上皮细胞分离。用吸水纸擦干肺组织表面水分后称重，记录为湿重（wet weight，W）；随后将肺组织放入80℃恒温干燥箱中烘干，24h后称重，记录为干重（dry weight，D），计算W/D。

1.4.5 肺泡液体清除率（alveolar fluid clearance，AFC）检测 每组选择10只小鼠，仰卧位固定，以0.5%戊巴比妥钠溶液腹腔注射麻醉后，打开颈部皮肤，暴露气管，将气管剪开一“T”字形切口行气管插管，将小鼠调整为头高脚低的45°仰卧位，通过气管导管缓慢注入以浓度为0.15mg·mL-1的Evans Blue标记的5%白蛋白等渗0.9%氯化钠溶液250μL，每次50μL，每2min灌注一次，同时给予纯氧4mL/min持续吸入。灌注完毕20min后处死小鼠，将小鼠调整为头低脚高的45°仰卧位，轻轻挤压两侧胸壁，用移液器吸取肺泡液体，于620nm处检测吸光度（optical density，OD）值。根据标准曲线计算AFC，AFC（%）=[（Vi-Vf）/Vi]×100%，Vf=（Vi×Pi）/Pf，其中Vi为肺泡液体灌注量，Vf为肺泡液体最终剩余量，Pi为灌注前肺泡液体白蛋白浓度，Pf为灌注后肺泡液体白蛋白浓度。

1.4.6 小鼠肺组织病理学观察

1.4.6.1 肺组织病理学观察 取小鼠肺组织，置于4%多聚甲醛中固定48h，蒸馏水清洗，梯度乙醇脱水，制作组织蜡块，4μm切片，二甲苯脱蜡30min，95%、80%的乙醇及蒸馏水中复水，HE染色，脱水、透明后封片，镜下观察各组小鼠肺组织病理变化。

1.4.6.2 肺组织纤维化观察 取小鼠肺组织，肺组织切片、脱蜡、复水过程同1.4.6.1，Weigert铁苏木素染色5min，酸性乙醇分化5～15s，Masson蓝化液返蓝3～5min，丽春红酸性品红染液染色5～10min，弱酸工作液洗涤后磷钼酸溶液染色1min，弱酸工作液再次洗涤，苯胺蓝染色1～2min，弱酸工作液洗涤后，95%乙醇和无水乙醇梯度脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，镜下观察肺组织纤维化情况。

1.4.7 羟脯氨酸含量测定 取0.2g小鼠肺组织，剪碎后加入6mol·L-1盐酸2mL，煮沸消化至无肉眼可见的组织块，16 000r/min离心20min，离心半径为12.5cm，调整pH值至6～8，蒸馏水定容至4mL，取上清液，560nm波长检测OD值，根据标准曲线计算组织中羟脯氨酸含量。

1.4.8 小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞的分离 取各组小鼠新鲜肺组织，磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered solution，PBS）清洗、剪碎后放入离心管，加入适量1g·L-1胰蛋白酶（含脱氧核糖核酸酶Ⅰ 0.01g·L-1）混合均匀，37℃消化5min，加入等量DMEM完全培养基终止消化，此过程重复两次，合并两次消化所得的细胞悬液；消化后的剩余肺组织采用1g·L-1Ⅰ型胶原酶（含脱氧核糖核酸酶Ⅰ 0.01g·L-1）37℃消化15min，合并所有细胞悬液，200目筛网过滤，1 000r/min离心5min，离心半径为12.5cm，离心2次后弃去上清液，保留细胞沉淀，以DMEM完全培养基重悬，接种到包被小鼠IgG的培养皿中，置于37℃，5%CO2的培养箱内培养1h。将含有未黏附细胞的培养基接种到另一包被小鼠IgG的培养皿中，37℃培养箱培养1h，重复2次，最后吸出含有未黏附细胞的培养基，离心后弃去上清液，以DMEM完全培养基重悬，置于培养箱中继续培养，用于Western blot检测[10]。

1.4.9 Western blot法检测α-SMA、p62、LC3-Ⅱ、p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达水平 收集小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞，裂解、离心取上清液，测定蛋白浓度后行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecylsulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis，SDS-PAGE）电泳，转膜、封闭后，加入α-SMA、p62、LC3-Ⅱ、p-PI3K、p-AKT和p-mTOR兔源一抗稀释液（稀释比例均为1∶1 000）孵育过夜，Tris-Tween缓冲盐溶液（Tris butfered saline Tween，TBST）清洗后加入二抗（稀释比例1∶2 000），37℃孵育2h，TBST清洗后滴加ECL试剂，置于凝胶成像系统显影。以甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）为内参，采用Image J软件分析各蛋白灰度值，计算蛋白相对表达量，蛋白相对表达量=目的蛋白灰度值/内参蛋白灰度值。

1.5 统计学分析 应用SPSS 25.0统计软件进行统计学分析，计量资料以±s表示，多样本比较采用单因素方差分析，两样本比较采用SNK-q检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组小鼠肺组织W/D和AFC比较 与正常组比较，模型组、强的松组、麦门冬汤高、中、低剂量组小鼠肺组织W/D值均升高，AFC均降低（P＜0.05）；与模型组比较，强的松组、麦门冬汤高、中、低剂量组小鼠肺组织W/D值均降低，AFC均升高（P＜0.05）；与强的松组比较，麦门冬汤高、中剂量组小鼠肺组织W/D值均降低，AFC均升高（P＜0.05），但麦门冬汤低剂量组W/D值和AFC与强的松组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 各组小鼠肺组织W/D和AFC比较（±s）Tab.1 Comparison of W/D and AFC of lung tissues in each group（±s）

表1 各组小鼠肺组织W/D和AFC比较（±s）Tab.1 Comparison of W/D and AFC of lung tissues in each group（±s）

注：与正常组比较，*P＜0.05；与模型组比较，#P＜0.05；与强的松组比较，△P＜0.05Note:Compared with normal group，*P＜0.05;compared with model group，#P＜0.05;compared with prednisone group，△P＜0.05

W/D AFC（%）正常组 4.80±0.33 29.27±2.65模型组 10.11±0.72* 18.51±2.84*强的松组 8.94±0.48*# 23.03±3.32*#麦门冬汤高剂量组 5.80±0.39*#△ 27.94±2.97*#△麦门冬汤中剂量组 7.31±0.40*#△ 25.32±3.01*#△麦门冬汤低剂量组 8.97±0.42*# 23.18±2.96*#组别

2.2 各组小鼠肺组织炎症和纤维化情况比较 HE染色和Masson染色结果显示，正常组小鼠肺组织未见明显结构异常，无充血、水肿和炎症浸润，肺间质仅有少量散在的蓝色胶原纤维组织。与正常组比较，模型组小鼠肺组织肺泡壁明显增厚，肺泡腔变小，肺组织正常结构基本消失，有部分炎症细胞浸润，并可见大量蓝色胶原纤维组织增生，呈实质样变化。与模型组比较，麦门冬汤高、中剂量组小鼠肺组织肺泡结构相对清晰，炎症细胞浸润和胶原纤维增生较少，蓝色胶原纤维组织亦显著减少，但麦门冬汤低剂量组和强的松组小鼠肺组织仍存在炎症细胞浸润、肺泡壁增厚、肺泡腔缩小和胶原沉积的情况。见图1～2。

图1 各组小鼠肺组织病理变化（HE染色，400×）Fig.1 Pathological changes in lung tissues in each group（HE staining，400×）

图2 各组小鼠肺组织胶原纤维沉积情况（Masson染色，400×）Fig.2 Deposition of collagen fibers in lung tissues of mice in each group（Masson staining，400×）

2.3 各组小鼠肺组织羟脯氨酸含量比较 与正常组比较，模型组、强的松组、麦门冬汤高、中、低剂量组羟脯氨酸含量均增加（P＜0.05）。与模型组比较，强的松组和麦门冬汤低剂量组羟脯氨酸含量差异无统计学意义（P＞0.05），麦门冬汤高、中剂量组小鼠肺组织羟脯氨酸含量均降低（P＜0.05）。与强的松组比较，麦门冬汤高、中剂量组羟脯氨酸含量降低（P＜0.05），麦门冬汤低剂量组羟脯氨酸含量差异无统计学意义（P＞0.05）。 见表2。

表2 各组小鼠肺组织羟脯氨酸含量比较（±s）Tab.2 Comparison of hydroxyproline content in lung tissues in each group（±s）

表2 各组小鼠肺组织羟脯氨酸含量比较（±s）Tab.2 Comparison of hydroxyproline content in lung tissues in each group（±s）

注：与正常组比较，*P＜0.05；与模型组比较，#P＜0.05；与强的松组比较，△P＜0.05Note:Compared with normal group，*P＜0.05;compared with model group，#P＜0.05;compared with prednisone group，△P＜0.05

羟脯氨酸（mg·g-1）正常组 1.49±0.22模型组 2.55±0.38*强的松组 2.66±0.41*麦门冬汤高剂量组 1.96±0.24*#△麦门冬汤中剂量组 1.94±0.29*#△麦门冬汤低剂量组 2.39±0.35*组别

2.4 各组小鼠肺组织α-SMA、p62、LC3-Ⅱ、p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达比较 与正常组比较，模型组、强的松组、麦门冬汤高、中、低剂量组小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞α-SMA、p62、p-PI3K、p-AKT和pmTOR蛋白表达均增高，LC3-Ⅱ蛋白表达均降低（P＜0.05）。与模型组比较，麦门冬汤高、中、低剂量组和强的松组小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞α-SMA、p62、p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达均降低，LC3-Ⅱ蛋白表达均增高（P＜0.05）。与强的松组比较，麦门冬汤高、中剂量组小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞α-SMA、p62、p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达均降低，LC3-Ⅱ蛋白表达均增加（P＜0.05），而麦门冬汤低剂量组小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞中上述蛋白表达差异无统计学意义（P＞0.05）。见图3、表3。

图3 Western blot检测小鼠肺组织α-SMA、p62、LC3-Ⅱ、p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达Fig.3 Protein expressions of α-SMA，p62，LC3-Ⅱ，p-PI3K，p-AKT and p-mTOR in mice lung tissues detected by Western blot

表3 各组小鼠肺组织α-SMA、p62、LC3-Ⅱ、p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达比较（±s）Tab.3 Comparison of the protein expressions of α-SMA，p62，LC3-Ⅱ，p-PI3K，p-AKT and p-mTOR in each group（±s）

表3 各组小鼠肺组织α-SMA、p62、LC3-Ⅱ、p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达比较（±s）Tab.3 Comparison of the protein expressions of α-SMA，p62，LC3-Ⅱ，p-PI3K，p-AKT and p-mTOR in each group（±s）

注：与正常组比较，*P＜0.05；与模型组比较，#P＜0.05；与强的松组比较，△P＜0.05Note:Compared with normal group，*P＜0.05;compared with model group，#P＜0.05;compared with prednisone group，△P＜0.05

组别 α-SMA p62 LC3-Ⅱ p-PI3K p-AKT p-mTOR正常组 0.15±0.02 0.16±0.03 0.90±0.07 0.16±0.02 0.20±0.03 0.19±0.02模型组 0.99±0.10* 0.96±0.08* 0.18±0.03* 0.98±0.08* 0.95±0.08* 1.02±0.09*强的松组 0.69±0.03*# 0.68±0.02*# 0.26±0.04*# 0.70±0.08*# 0.67±0.03*# 0.76±0.01*#麦门冬汤高剂量组 0.26±0.02*#△ 0.27±0.03*#△ 0.50±0.02*#△ 0.28±0.03*#△ 0.26±0.02*#△ 0.28±0.02*#△麦门冬汤中剂量组 0.44±0.04*#△ 0.33±0.05*#△ 0.41±0.03*#△ 0.36±0.04*#△ 0.43±0.05*#△ 0.46±0.05*#△麦门冬汤低剂量组 0.72±0.06*# 0.65±0.08*# 0.29±0.01*# 0.73±0.06*# 0.65±0.06*# 0.78±0.08*#

3 讨论

IPF是一类弥散性实质性肺部疾病，尚无特效治疗药物，虽然糖皮质激素在临床应用广泛，但其疗效尚未得到明确认可，而且不良反应较多，往往造成患者免疫功能降低和肝肾功能损害[11-12]。麦门冬汤由麦门冬、半夏、甘草、人参、粳米和大枣6味药材组成，具有降逆下气和益胃生津之功效，临床用于治疗肺损伤、肺癌以及间质性肺病如IPF等[13-14]，但麦门冬汤治疗间质性肺疾病的作用机制尚不清楚。

本研究构建BLM诱导的小鼠间质性肺炎模型，观察麦门冬汤对小鼠间质性肺炎的改善作用。既往研究证实，BLM滴鼻可诱导小鼠肺纤维化，引起肺W/D值升高，肺水含量增加，肺组织可出现间隔明显增厚和胶原纤维沉积等与人类肺纤维化相似的病理学改变[15]。本研究结果提示，麦门冬汤可显著降低小鼠肺组织W/D值，升高AFC，其中麦门冬汤高、中剂量的作用优于强的松组，并呈剂量依赖性，表明麦门冬汤能够减轻BLM导致的肺损伤，提高肺组织的肺水清除功能，其中麦门冬汤高剂量的疗效最佳。进一步以HE染色和Masson染色观察麦门冬汤对小鼠肺组织炎症和纤维化等病理变化的影响，结果显示BLM可明显改变肺组织结构，增加炎症浸润和胶原纤维的增生，而麦门冬汤高、中剂量组能够显著抑制肺组织炎症浸润和胶原纤维沉积，效果优于麦门冬汤低剂量组和强的松组。羟脯氨酸含量检测可以反映组织胶原蛋白的生成情况，本研究提示高、中剂量麦门冬汤可减少小鼠肺组织羟脯氨酸含量，使胶原蛋白表达显著减少，但该作用不呈剂量依赖性，低剂量麦门冬汤和强的松对肺组织胶原蛋白生成的作用无影响，说明一定剂量的麦门冬汤对BLM诱导的小鼠间质性肺炎炎症浸润和胶原蛋白形成过程具有抑制作用。

自噬是人体正常的细胞生物学行为，涉及正常细胞的细胞稳态和生存机制，在肺部感染和炎症反应中起着至关重要的作用[16]。mTOR是自噬活动的负调控靶点，根据环境营养的变化，调控细胞生长和代谢，磷酸化mTOR可抑制细胞自噬功能，而mTOR抑制剂雷帕霉素处理后可激活细胞自噬活性。研究发现，间质性肺炎患者肺成纤维细胞中mTOR被过度激活，LC3-Ⅱ蛋白表达明显下降，而p62的活性明显增加，肺组织细胞自噬活性降低，抑制mTOR则可增强自噬，使肺纤维化得到缓解[17]。同时，抑制自噬功能可使细胞外基质沉积增加，同时导致α-SMA蛋白表达增加，肺泡上皮细胞则出现异常修复，说明自噬缺陷是促进间质性肺炎肺纤维化发展的重要原因[6]。PI3K是mTOR的传统上游激活剂，通过磷酸化其下游重要的信号转导分子AKT来调节自噬，AKT激活后可通过使结节性硬化复合物2（tuberous sclerosis complex 2，TSC2）磷酸化进而激活mTOR，活化的mTOR进一步激活下游相关因子，调控细胞的增殖及蛋白质合成，加速细胞代谢，从而导致自噬的抑制[18]。徐昌君等[19]研究证明，PI3K/AKT/mTOR信号通路在细胞自噬活动调控中起重要作用，而间质性肺病中肺纤维化的形成可能与细胞自噬功能缺陷有关，抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路能够提升细胞自噬功能，从而抑制肺纤维化的进展。Hsu等[20]研究证明，PI3K/AKT/mTOR信号通路影响肺成纤维细胞的增殖，从而促进BLM诱导的肺纤维化。本研究发现，BLM可显著提高小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞α-SMA、p62、p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达，降低LC3-Ⅱ蛋白表达。与模型组比较，不同剂量麦门冬汤和强的松均能抑制小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞α-SMA、p62、p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达，升高LC3-Ⅱ蛋白表达，但与强的松组比较，麦门冬汤高、中剂量组小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞α-SMA、p62、p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达均降低，LC3-Ⅱ蛋白表达均增加，而麦门冬汤低剂量组蛋白表达差异无统计学意义，表明麦门冬汤可通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路增强自噬活性，从而阻止间质性肺炎小鼠肺纤维化的发展，其作用与强的松类似，甚至可能优于强的松。

综上所述，麦门冬汤可减轻间质性肺炎小鼠肺组织肺水含量，提高肺水清除能力，抑制肺组织炎症和纤维化病变，其作用可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路，增强肺组织细胞自噬活性有关。但本研究仅在动物水平进行初步探讨，更详细的分子机制尚需结合体外实验进一步深入探究。