基于Wnt/β-catenin信号通路探讨黄芪甲苷对慢性肾衰竭大鼠钙磷代谢紊乱的改善作用及机制

尤云 洪丽萍 张宏涛

1.信阳职业技术学院附属医院 河南，信阳 464000 2.郑州颐和医院 3.河南省人民医院

慢性肾衰竭（chronic renal failure，CRF）是各种原因造成的肾损伤发展到一定阶段的结果，肾脏组织萎缩，无法维持基本功能，导致体内代谢产物蓄积，水、电解质、酸碱平衡紊乱，最终全身各系统受累[1]。钙磷代谢紊乱是CRF的特征，可导致体内活性维生素D代谢异常与成纤维生长因子-23分泌紊乱，继发肾性骨病、甲状旁腺功能亢进及血管钙化等情况，并加重肾功能的恶化，形成恶性循环，对患者预后造成极大影响[2-3]。因此，对CRF钙磷代谢紊乱及时采取有效的干预和防治措施具有重要意义。

黄芪甲苷（astragaloside-Ⅳ，AS-Ⅳ）是中药黄芪的有效成分，具有增强机体免疫力、抗炎、抗衰老、降压、改善血液循环、降糖等多种作用[4]。研究证实，AS-Ⅳ具有肾脏保护作用，可降低肾性高血压，抑制肾脏纤维化，缓解病理损伤[5]。目前关于AS-Ⅳ对肾脏保护的相关研究较多，但对CRF钙磷代谢紊乱的影响的相关研究较少。故本研究通过建立CRF钙磷代谢紊乱大鼠模型，探讨AS-Ⅳ对钙磷代谢紊乱的调节作用及相关机制，旨在为CRF钙磷代谢紊乱的药物防治提供参考。

1 材料和方法

1.1 实验动物 无特定病原体（specific pathogen free，SPF）级雄性Wistar大鼠60只，4周龄，体质量220～240g，购于河南省实验动物中心[实验动物生产许可证号码：SCXK（豫）2015-0005]，饲养于河南省实验动物中心SPF环境[实验动物使用许可证号码：SYXK（豫）2016-0002]。大鼠购入后适应性饲养1周，环境清洁通风，温度（23±2）℃，湿度（50±10）%，12h昼夜节律。

1.2 主要试剂和仪器 AS-Ⅳ购于南京泽郎生物科技有限公司（批号：ZL120305，纯度≥98%）；骨化三醇胶囊购于青岛正大制药有限公司（国药准字：H20030491）；兔抗大鼠Wnt4多克隆抗体、β-连环蛋白（β-catenin）多克隆抗体均购于武汉艾美捷科技有限公司 （批号：AAF2162a、ABP50538）；辣根过氧化物酶标记的羊抗兔二抗购于北京中杉金桥生物技术有限公司 （批号：ZB-2305）；血清肌酐（serum creatinine，Scr）检测试剂盒购于上海江莱生物科技有限公司（批号：JL18878）；血尿素氮 （blood urea nitrogen，BUN）、钙（calcium，Ca）、磷（phosphorus，P）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）检测试剂盒购于美国Solarbio公司（批号：BC1530、BC0720、BC1650、BC2140）； 甲状旁腺激素（parathyroid hormone，PTH）检测试剂盒购于南京森贝伽生物科技有限公司（批号：SBJ-R0596）。BK-800全自动生化分析仪购于山东博科科学仪器有限公司；BX51T-PHD-J11型显微镜为日本奥林巴斯公司产品；RM2015型石蜡切片机购于德国莱卡公司；3550UV型酶标仪、7500实时荧光定量PCR仪为美国Bio-Rad公司产品；iRICELL型全自动尿液分析仪购于美国贝克曼库尔特有限公司。

1.3 方法

1.3.1 CRF钙磷代谢紊乱大鼠模型建立 建模参照文献[6-7]，采用5/6肾切除（左肾切除2/3，右肾全切）及高磷饮食建立CRF钙磷代谢紊乱模型。大鼠术前禁食不禁水12h，称重后仰卧位固定，常规备皮消毒，以6mL/kg的剂量腹腔注射1%戊巴比妥钠麻醉，于左肾肋角部行长约2cm切口，逐层切开至腹腔，暴露左侧肾脏，分离肾周脂肪及肾被膜，以止血钳夹紧肾蒂，切除约2/3的左肾组织，明胶海绵压迫止血，确认无出血后复位左肾，逐层缝合，术后给予青霉素7.2mU/100g腹腔注射，1次/d，连续3d。7d后再次手术完全剥离摘除右肾，麻醉、手术过程及术后处理同上。术后予1.2%高磷饲料饲养，持续4周。第4周后尾静脉采血，检测Scr、BUN水平，以Scr、BUN≥正常值2倍为造模成功。

1.3.2 分组及干预 60只大鼠随机分为假手术组、模型组、AS-Ⅳ低剂量组、AS-Ⅳ高剂量组、西药组，各组12只。假手术组术中仅分离肾脏包膜，无肾脏切除，其余各组均采用5/6肾切除（左肾切除2/3，右肾全切）及高磷饮食建立CRF钙磷代谢紊乱模型。建模及干预期间，模型组死亡3只，AS-Ⅳ低剂量组与西药组各死亡2只，AS-Ⅳ高剂量组死亡1只，剔除各组死亡大鼠。

取建模成功大鼠，按照成人-大鼠体表面积等效换算，AS-Ⅳ以0.5%羧甲基纤维素钠溶液溶解，AS-Ⅳ低剂量组、AS-Ⅳ高剂量组分别按20mg·kg-1、80mg·kg-1的剂量灌胃给药；模型组、假手术组则予0.5%羧甲基纤维素钠2mL·kg-1灌胃；骨化三醇胶囊破开后内容物以0.5%羧甲基纤维素钠配制成质量浓度为0.252μg/56mL的混悬液，西药组以骨化三醇混悬液0.045μg·kg-1灌胃。 各组给药均1次/d，连续6周。

1.3.3 肾功能指标及矿物代谢水平检测 药物干预完成后第2天，大鼠以代谢笼法收集24h尿液，3 000r/min离心15min后取上清液，以尿液分析仪检测24h尿蛋白定量。尿液收集后大鼠逐一称重，以1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，打开腹腔，暴露腹主动脉，取腹主动脉血5mL，3 000r/min离心15min，分离血清，-20℃冰箱保存，以全自动生化分析仪及相关试剂盒检测Scr、BUN、Ca、P、ALP、PTH水平。

1.3.4 肾脏组织病理学观察 各组大鼠腹主动脉抽血后迅速分离残余左肾，去包膜，0.9%氯化钠冲洗后，各组随机选取4只左肾，置于4%多聚甲醛缓冲液中固定24h，乙醇脱水，石蜡包埋，制成5μm厚度切片，行苏木精-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色，于光学显微镜下观察肾脏组织病理变化。

1.3.5 免疫组化检测大鼠肾脏组织Wnt4、β-catenin蛋白表达 残肾分离固定及切片同1.3.4，切片常规脱蜡入水，组织抗原修复，置于3%H2O2液中室温孵育30min，磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline，PBS）冲洗，加入一抗（稀释比例：1∶200），4℃孵育过夜，37℃复温30min，PBS冲洗后二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色，显微镜下观察，苏木素复染核5s，1%盐酸乙醇分化，常规脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，高倍镜下观察各组肾组织Wnt4、βcatenin表达分布。阳性染色为细胞质、细胞核或细胞膜呈棕褐色。每组随机选择10张切片，每张切片随机选取定点下5个相邻的视野，以Image-Pro-Plus图像分析软件测量每视野的平均光密度值（integral optical density，IOD），IOD值越高说明表达水平越高。

1.3.6 实时荧光定量聚合酶链式反应（quantificational Real-time reverse transcription polymerase chain reaction，qRT-PCR） 检测大 鼠肾 脏组 织Wnt4、βcatenin mRNA的表达 残肾分离同1.3.4，取-80℃保存的肾组织，Trizol试剂盒提取总RNA，反转录得到cDNA，以甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）为内参基因，qRTPCR检测Wnt4、β-catenin mRNA表达情况，根据试剂盒说明书设定反应体系。反应条件：96℃预变性5min，95℃变性35s，55℃退火38s，72℃延伸40s，共40个循环，72℃再次延伸8min。以2-△△Ct法计算目的基因的相对表达量。Wnt4、β-catenin、GAPDH引物序列设计与合成由上海生工生物工程股份有限公司完成，引物序列见表1。

表1 引物序列Tab.1 Primer sequences

1.4 统计学分析 采用SPSS 20.0统计软件进行统计学分析，计量资料均以±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两样本比较采用最小显著性差异（least significant difference，LSD）-t检验。 以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠肾功能指标比较 各组间比较，血清Scr、BUN及24h尿蛋白水平差异有统计学意义（P＜0.01）。与假手术组比较，模型组、西药组、AS-Ⅳ各剂量组血清Scr、BUN及24h尿蛋白水平升高，差异有统计学意义（P＜0.01）。 与模型组比较，西药组、AS-Ⅳ各剂量组血清Scr、BUN及24h尿蛋白水平降低，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。 与西药组比较，AS-Ⅳ高剂量组血清Scr、BUN及24h尿蛋白水平降低，差异有统计学意义 （P＜0.05，P＜0.01）；AS-Ⅳ低剂量组血清Scr、BUN及24h尿蛋白水平差异无统计学意义（P＞0.05）。与AS-Ⅳ低剂量组比较，AS-Ⅳ高剂量组血清Scr、BUN及24h尿蛋白水平降低，差异有统计学意义（P＜0.01）。 见表2。

表2 各组大鼠肾功能指标比较（±s）Tab.2 Comparison of renal function indexes in each group（±s）

表2 各组大鼠肾功能指标比较（±s）Tab.2 Comparison of renal function indexes in each group（±s）

注：与假手术组比较，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与西药组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与AS-Ⅳ低剂量组比较，▲▲P＜0.01Note:Compared with sham operation group，**P＜0.01;compared with model group，#P＜0.05，##P＜0.01;compared with western medicine group，△P＜0.05，△△P＜0.01;compared with AS-Ⅳ low-dose group，▲▲P＜0.01

组别 n S c r（μ m o l·L-1） B U N（m m o l·L-1） 2 4 h 尿蛋白（m g）假手术组 1 2 4 0.5 8±5.9 8 7.8 8±1.2 2 4.7 0±1.1 5模型组 9 1 0 5.3 6±1 0.3 5** 2 0.3 5±3.0 1** 1 4.8 5±2.3 3**西药组 1 0 9 0.5 8±7.0 5**## 1 7.0 1±2.5 0**# 1 2.0 2±1.7 4**##A S-Ⅳ低剂量组 1 0 9 2.3 5±8.5 7**## 1 6.3 3±2.8 9**## 1 2.3 5±2.0 1**#A S-Ⅳ高剂量组 1 1 8 1.8 5±7.5 4**##△▲▲ 1 2.4 8±2.5 0**##△△▲▲ 9.2 5±1.8 0**##△△▲▲

2.2 各组大鼠矿物质代谢指标比较 各组间比较，Ca、P、ALP、PTH差异有统计学意义（P＜0.01）。与假手术组比较，模型组、西药组、AS-Ⅳ各剂量组血清Ca水平降低，P、ALP、PTH水平升高，差异有统计学意义（P＜0.01）。 与模型组比较，西药组、AS-Ⅳ各剂量组血清Ca水平升高，P、ALP、PTH水平降低，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。 与西药组比较，AS-Ⅳ低剂量组血清Ca水平降低，ALP、PTH水平升高，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）；高剂量组血清P水平降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。与AS-Ⅳ低剂量组比较，AS-Ⅳ高剂量组血清Ca水平升高，P、ALP、PTH水平降低，差异有统计学意义（P＜0.01）。西药组与AS-Ⅳ低剂量组血清P水平，西药组与AS-Ⅳ高剂量组血清Ca、ALP、PTH水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表3。

表3 各组大鼠矿物质代谢指标比较（±s）Tab.3 Comparison of mineral metabolism indexes in each group（±s）

表3 各组大鼠矿物质代谢指标比较（±s）Tab.3 Comparison of mineral metabolism indexes in each group（±s）

注：与假手术组比较，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与西药组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与AS-Ⅳ低剂量组比较，▲▲P＜0.01Note:Compared with sham operation group，**P＜0.01;compared with model group，#P＜0.05，##P＜0.01;compared with western medicine group，△P＜0.05，△△P＜0.01;compared with AS-Ⅳ low-dose group，▲▲P＜0.01

组别 n Ca（mmol·L-1） P（mmol·L-1） ALP（U·L-1） PTH（pg·mL-1）假手术组 12 2.65±0.20 2.10±0.22 98.58±12.35 3.80±1.15模型组 9 1.58±0.15** 4.33±0.50** 191.32±20.32** 16.32±2.35**西药组 10 2.32±0.18**## 3.70±0.44**# 125.58±15.74**## 9.36±1.32**##AS-Ⅳ低剂量组 10 2.01±0.17**##△ 3.82±0.48**# 160.23±17.01**##△△ 14.35±1.50**#△△AS-Ⅳ高剂量组F值P值11 2.28±0.20**##▲▲46.989＜0.001 3.20±0.50**##△▲▲35.553＜0.001 130.28±15.80**##▲▲47.056＜0.001 10.01±1.40**##▲▲103.518＜0.001

2.3 各组大鼠肾组织病理学观察 HE染色镜下观察显示，假手术组肾单位完整，肾小球结构正常，肾小管上皮细胞排列规则，肾间质无病理变化。模型组可见肾小球萎缩、硬化坏死，上皮细胞数量减少、结构紊乱，肾间质大量炎症细胞浸润、水肿及纤维增生，肾小管扩张或灶状萎缩。西药组肾小球中度扩张、部分体积增大，存在局灶节段性硬化，肾小管中度扩张，肾间质内部分炎症细胞浸润及纤维增生，病变较模型组轻。AS-Ⅳ低剂量组病理变化与西药组无明显区别。AS-Ⅳ高剂量组肾小球及肾间质可见少量炎症细胞浸润，肾小管部分萎缩、坏死，病理变化较西药组及AS-Ⅳ低剂量组更轻。见图1。

图1 各组大鼠肾组织病理学改变（HE染色，400×）Fig.1 Pathological changes of renal tissue in each group（HE staining，400×）

2.4 各组大鼠Wnt4、β-catenin蛋白表达比较 各组间比较，Wnt4、β-catenin蛋白IOD差异有统计学意义（P＜0.01）。与假手术组比较，模型组、西药组、AS-Ⅳ各剂量组的Wnt4、β-catenin蛋白IOD升高，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。与模型组比较，西药组、AS-Ⅳ各剂量组的Wnt4、β-catenin蛋白IOD降低，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。与西药组比较，AS-Ⅳ高剂量组的Wnt4、β-catenin蛋白IOD降低，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。与AS-Ⅳ低剂量组比较，AS-Ⅳ高剂量组的Wnt4、β-catenin蛋白IOD降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。西药组与AS-Ⅳ低剂量组Wnt4、β-catenin蛋白IOD比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。 见表4、图2。

表4 各组大鼠Wnt4、β-catenin蛋白表达比较（±s）Tab.4 Comparison of Wnt4 and β-catenin protein expression in each group（±s）

表4 各组大鼠Wnt4、β-catenin蛋白表达比较（±s）Tab.4 Comparison of Wnt4 and β-catenin protein expression in each group（±s）

注：与假手术组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与西药组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与AS-Ⅳ低剂量组比较，▲P＜0.05Note:Compared with sham operation group，*P＜0.05，**P＜0.01;compared with model group，#P＜0.05，##P＜0.01;compared with western medicine group，△P＜0.05，△△P＜0.01;compared with AS-Ⅳ low-dose group，▲P＜0.05

组别 n Wnt4 β-catenin假手术组 4 0.10±0.02 0.08±0.02模型组 4 0.33±0.05** 0.25±0.04**西药组 4 0.23±0.04**# 0.18±0.03**#AS-Ⅳ低剂量组 4 0.22±0.04**# 0.17±0.03**#AS-Ⅳ高剂量组 4 0.15±0.03*##△▲ 0.12±0.01*##△△▲F值 101.521 38.080 P值 ＜0.001 ＜0.001

图2 各组大鼠Wnt4、β-catenin免疫组化检测（400×）Fig.2 Immunohistochemical detection of Wnt4，β-catenin in each group（400×）

2.5 各组大鼠Wnt4、β-catenin mRNA相对表达量比较 各组间比较，Wnt4、β-catenin mRNA相对表达量差异有统计学意义（P＜0.01）。与假手术组比较，模型组、西药组、AS-Ⅳ各剂量组的Wnt4、β-catenin mRNA相对表达量升高，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。与模型组比较，西药组、AS-Ⅳ各剂量组的Wnt4、β-catenin mRNA相对表达量降低，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。 与西药组比较，AS-Ⅳ高剂量组的Wnt4、β-catenin mRNA相对表达量降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。与AS-Ⅳ低剂量组比较，AS-Ⅳ高剂量组的Wnt4、β-catenin mRNA相对表达量降低，差异有统计学意义（P＜0.05）；西药组与AS-Ⅳ低剂量组比较，Wnt4、β-catenin mRNA相对表达量差异无统计学意义（P＞0.05）。 见表5。

表5 各组大鼠Wnt4、β-catenin mRNA相对表达量表达比较（±s）Tab.5 Comparison of relative expression of Wnt4 and β-catenin mRNA in each group（±s）

表5 各组大鼠Wnt4、β-catenin mRNA相对表达量表达比较（±s）Tab.5 Comparison of relative expression of Wnt4 and β-catenin mRNA in each group（±s）

注：与假手术组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与西药组比较，△P＜0.05；与AS-Ⅳ低剂量组比较，▲P＜0.05Note:Compared with sham operation group，*P＜0.05，**P＜0.01;compared with model group，#P＜0.05，##P＜0.01;compared with western medicine group，△P＜0.05;compared with AS-Ⅳ low dose group，▲P＜0.05

组别 n Wnt4 β-catenin假手术组 4 1.05±0.05 1.00±0.7模型组 4 1.83±0.16** 1.78±0.12**西药组 4 1.40±0.15**## 1.35±0.10**##AS-Ⅳ低剂量组 4 1.42±0.15**# 1.40±0.12**##AS-Ⅳ高剂量组 4 1.18±0.08*##△▲ 1.15±0.08*##△▲F值 22.21 34.822 P值 ＜0.001 ＜0.001

3 讨论

机体的钙磷稳态平衡受PTH、1，25-二羟维生素D3、降钙素及成纤维细胞因子-23的相互调控[8]。CRF患者肾损伤早期，血磷、钙、PTH水平基本维持正常，随着病情的进展，肾功能进一步恶化，1，25-二羟维生素D3合成受到抑制，刺激甲状旁腺增生，PTH水平升高超过正常代偿范围，继而出现低钙及高磷血症，并引起继发性的甲状旁腺功能亢进，加重水、电解质、酸碱平衡紊乱，形成恶性循环，导致残余肾功能进一步下降[9]。肾脏替代治疗是CRF晚期的有效治疗手段，但治疗费用昂贵，且受医疗资源限制，仍有部分患者无法获得肾脏替代治疗，因此在CRF早期采用有效的药物调节钙磷平衡具有重要意义。西药治疗CRF钙磷代谢紊乱主要采用钙磷结合剂、钙受体激动剂等药物，但是西药单因素靶向治疗容易导致高钙、高磷血症，治疗效果往往并不满意。目前中药治疗CRF钙磷代谢紊乱已在临床应用，中药具有多靶点、多活性的作用特点，为CRF钙磷代谢紊乱的治疗研究提供了新的方向。

黄芪是具有补血养血、解毒生肌、固表益气、利水消肿等多种功效的中药，其有效成分为多糖和皂苷[10]。AS-Ⅳ作用与黄芪多糖类似，但药效是黄芪多糖的2倍，包括保护肾脏及心血管、抗纤维化、抗氧化应激、调节免疫等[11]。研究显示，AS-Ⅳ可抑制应激反应警戒期的肾上腺增生与胸腺萎缩，阻止应激反应抵抗期和衰竭期出现的异常变化，起到拮抗应激的作用；并能抑制炎症反应，增强细胞的生理代谢，改善血液循环[12-13]。王雅宁等[14]研究中发现，AS-Ⅳ能调节肾组织的氧化还原状态，抑制高糖诱导的肾小管损伤。陈清青[15]发现AS-Ⅳ可抑制氧化应激及内质网应激的相关反应，从而阻止足细胞凋亡，发挥肾脏保护作用。本研究结果显示，模型组较假手术组血清Ca水平更低，P、ALP、PTH、Scr、BUN及24h尿蛋白水平更高，病理学观察提示存在明显的肾小球萎缩、硬化坏死，炎症浸润增生及纤维化等损伤表现，说明模型组大鼠存在钙磷代谢紊乱及肾功能衰竭的病理生理改变。经AS-Ⅳ干预后，血清Ca水平升高，P、ALP、PTH、Scr、BUN及24h尿蛋白水平下降，病理切片显示肾小球萎缩、硬化坏死、炎症浸润增生及纤维化等病理损伤减轻，且AS-Ⅳ高剂量组的血清P、Scr、BUN及24h尿蛋白水平低于西药组，病理改变较西药组更轻，提示AS-Ⅳ可改善CRF大鼠肾功能及钙磷代谢紊乱，减轻肾脏病理损伤，较常规的西药单因素靶向治疗具有更显著的优势。

肾足细胞的损伤凋亡是导致肾小球滤过率下降、肾功能恶化的重要病理因素，Wnt/β-catenin信号通路在肾足细胞损伤、凋亡，肾小球纤维化过程中发挥重要的调控作用[16]。Wnt/β-catenin是进化保守的细胞信号传导通路，参与调节多种生物过程，在维持和正向调节肾组织与肾单位发育中具有重要作用[17]。正常情况下，Wnt信号通路未激活时，络氨酸激酶Ⅰα和糖原合成酶激酶-3β可促使β-catenin磷酸化，磷酸化的βcatenin被泛素化和蛋白酶体降解，使胞质中的βcatenin浓度处于低水平[18]。肾功能受损时，Wnt信号被激活，Wnt蛋白能与Frizzled受体及其他相关受体结合，产生跨膜信号传导，使β-catenin去磷酸化并易位进入细胞核，与T细胞因子/淋巴增强因子结合，刺激Wnt的转录，诱导肾足细胞损伤[19]。另有研究显示，PTH水平升高可诱导Wnt/β-catenin信号转导通路的再激活[20]。陈亚茹等[21]则发现，抑制Wnt的亚型表达可降低β-catenin表达水平，阻断肾脏β-catenin介导的靶基因转录，说明CRF钙磷代谢紊乱与Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。本研究结果提示，西药组、AS-Ⅳ各剂量组的Wnt4、β-catenin蛋白IOD及mRNA相对表达量均低于模型组，进一步比较发现AS-Ⅳ高剂量组较西药组及AS-Ⅳ低剂量组更低，提示AS-Ⅳ能够减轻钙磷代谢紊乱，抑制肾脏损伤，从而改善CRF大鼠的肾功能，其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。

综上所述，AS-Ⅳ可抑制CRF大鼠的肾功能损伤，改善钙磷代谢紊乱，减轻肾脏病理损伤，其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。本研究结果提示，在今后CRF钙磷代谢紊乱的药物研究中，可将AS-Ⅳ相关药物作为选择之一。