液相色谱-质谱联用技术测定食品中乌洛托品 残留分析方法

彭桂庄

（广东方舟检测技术有限公司，广东惠州 516006）

食品安全问题是现阶段人们最为关注的问题，尽管食品生产中有严格的生产标准以及生产流程，但是仍然存在不法分子为了提升食物色泽、延长食物保质期在食品生产中添加对人体有害的物质[1]。乌洛托品白色吸湿性结晶粉末或无色有光泽的菱形结晶体，具有较好的抗腐蚀性，因此不法商家将该物质被用于食品生产中起到防腐保鲜作用，该物质摄入人体后对会造成消费者出现胃痛、恶心、呼吸困难，长期摄入对消费者的心脏、肾脏以及中枢神经均会造成影响，加强乌洛托品食品检验是食品安全发展过程中的重要组成[2-3]。液相色谱-质谱联用技术是目前食品安全监测中的重要技术，该技术原理主要是利用液相色谱进行分离，而后利用串联质谱技术对食品样本进行电离情况分析。该种食品检测方法具有较高的选择性和灵敏度，将两者有效结合可以对食品中有害物质进行分析，目前技术已经被广泛用于农药残留、兽药残留以及化学物质测定中[4-5]。

《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单（第1～5批汇总）》中包括乌洛托品，传统的食品检验方法在检验过程中只能对肉质内脏、肾脏及猪肉中的乌洛托品残留量进行检验，无法满足其他食品中该物质的检验需求。常见检验乌洛托品手段主要利用点电导滴定法、极谱法、电位滴定法，这些检验方法尽管可以满足基础食品检验需求，但检验灵敏度较低，检验时间较长。因此加强乌洛托品液相色谱-质谱联用技术测定并进行稳定试验极为重要，笔者结合自身经验以及文献总结，对食品中乌洛托品含量进行测定，保证食品检测 安全。

1 材料与方法

1.1 试剂与设备

本次研究中涉及的试剂及仪器如表1所示。

表1 试验使用的试剂与仪器

1.2 试验方法

1.2.1 标液配制

精密称取乌洛托品10 g，放置在100 mL容量瓶中，利用乙腈将其稀释溶解摇匀，制成标准储备液（100 mg/L）。吸取标准储备液1.0 mL，放置于 100 mL容量瓶中，用乙腈稀释，制成标准中间溶液（1 mg/L），将其放置在4 ℃遮光环境保存。样品处理过程中，称取3.0 g样本，将其放置在50 mL离心管内，加入无水硫酸钠2 g、乙腈10 mL涡旋混匀 2 min，而后进行离心，10 000 r/min离心5 min，使用0.22 μm滤膜过滤。再次进行样本处理，与前者处理方法相似，离心完成后将乙腈溶液放置于10 mL比色管中，用氮气（50 ℃）吹干，利用2 mL 0.2 mol/L的醋酸铵溶液活化PCX固相萃取柱。

1.2.2 仪器条件

（1）色谱条件。Agilent Zorbax 300SCX色谱柱（150 mm×2.1 mm，5 μm）；柱温：40 ℃；流速： 0.4 mL/min；流动相A：0.01 mol/L醋酸铵，B：乙腈。线性脱洗程序：0～3 min，70%A；3～5 min，70%A线性降 至20%A；5.01～8 min，20%A；8～ 8.01 min，由20%A线性升至70%A。进样量控制 在10 mL。

（2）质谱条件。电喷雾离子源，正离子模式，扫描方式以多反应监测；4 000 V毛细管电压，40 Psi雾化器；干燥气体温度控制在350 ℃（N2），流速控制在9 L/min。

1.3 方法验证

分别使用乙腈对乌洛托品标准中间溶液进行稀释，分别稀释为浓度为5 μg/L、20 μg/L、100 μg/L、500 μg/L等浓度溶液，利用0.22 μm尼龙过滤后进行上机测定。测定结果显示乌洛托品浓度在5～ 500 μg/L浓度具有良好的线性，线性方程Y=481X- 6 600，r=0.998 8，进行空白样品分析，100 μg/L随机加标样品重复检验，其偏差为1.1%以及3.5%。为进一步对进行研究，利用标准加入法对该物质回收率进行测定，选取食品鱼仔熟食、湿米粉、腐竹等食品。

2 结果与分析

2.1 样品加标回收测定

通过研究发现子加标回收试验中湿米粉、鱼仔熟食、腐竹食品的加标回收率范围在52.5%～118%，相对标准差≤10.1%，具体见表2。

表2 样品加标回收测定

2.2 色谱图分析

以湿米粉、鱼仔熟食、腐竹食品为空白样品，而后加入3个浓度标准品，对加入标准品样品进行5次重复试验，图谱分析如下。通过色谱图分析，发现在空白样品测定过程中随着试验时间延长其峰值面积逐渐升高降低，而添加不同浓度乌洛托品后随着时间延长峰值明显，当6～8 min后峰值出现回落，见图1至图5。

图1 空白样品色谱图

图2 添加1.2 μg/kg乌洛托品的湿米粉色谱图

图3 添加1.2 μg/kg乌洛托品的鱼籽熟食色谱

图4 添加50 μg/kg乌洛托品的鱼籽熟食色谱

图5 添加50 μg/kg乌洛托品的腐竹色谱

2.3 干扰试验

在食品检验过程中会受到多种因素影响，而利用液相色谱与质谱联用技术检验乌洛托品检验中可能受到三聚氰胺、双氰胺等影响造成乌洛托品测定数据出现异常，因此研究中添加了干扰试验，试验分别对三聚氰胺、双氰胺进行标准溶液制备，并进行相同浓度分析。在相同的试验基础上进行质谱以及色谱检验，结果表明，上述两种物质均未检出，而且将上述溶液与标准溶液进行混合，发现对试验研究结果干扰并不明显，说明三聚氰胺，双氰胺等物质在质谱检验联合色谱检验乌洛托品中干扰性较低，可以忽略。

2.4 试验样品测定

对食品抽检的采用国际标准测定含量甲醛食物，鸡爪，墨鱼干、碱面、湿米粉、腐竹和猪肉等食品进行乌洛托品含量测定，测定结果如表3。在实际的食品乌洛托品测定中发现，在6种食物中仅鸡爪检测出乌洛托品，且含量为0.333 mg/kg，其他食物中并未检测出乌洛托品，但此次试验中由于食物均含有甲醛，不能绝对说明食品中不含乌洛托品，且乌洛托品易水解，因此食品检测中不仅需要加强食品安全检验研究，同时还需要从食品生产环节以及流通等环节进行监测，加强食品安全检验，保证人们的饮食安全。

表3 实际样品测定数据（单位：mg/kg）

3 结论

此次研究中将液相色谱一质谱联用技术应用于测定乌洛托品，检验结果显示，线性方程Y=481X- 6 600，r=0.998 8，进行空白样品分析，100 μg/L随机加标样品重复检验，其偏差为1.1%和3.5%。加标回收试验中湿米粉、鱼仔熟食、腐竹食品的加标回收率范围在52.5%～118%，相对标准差≤10.1%。充分说明该种检查方法可以满足当前食品中乌洛托品物质检查，使食物使用更加健康。

综上所述，液相色谱一质谱联用技术作为灵敏度高、检测效能高、准确度高且操作简单的食品安全检测方法，具有较广泛的适用范围。在进行乌洛托品检验中利用无水硫酸钠干燥，乙腈溶液提取，使用0.01 mol/L醋酸铵-乙腈溶液进行流动相梯度洗脱，利用SCX色谱柱分离，进行定量定性检验。液相色谱-质谱检验中检验速度快，时间花费少，且符合食品检验中大批量食物检验，对于保证消费者食品安全有重要积极意义。