Pt-Pd合金纳米颗粒标记口蹄疫A型病毒抗体检测的免疫层析方法

2021-03-09孙燕燕李昕林密李峰松包艳芳陈夏辉杨光曾巧英蒋韬

中国农业科学 2021年3期

孙燕燕，李昕，林密，李峰松，包艳芳，陈夏辉，杨光，曾巧英，蒋韬

孙燕燕1,2，李昕2，林密2，李峰松1,2，包艳芳2，陈夏辉2，杨光2，曾巧英1，蒋韬2

1甘肃农业大学动物医学院，兰州 730070；2中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/口蹄疫国家参考实验室，兰州 730046

【】为建立一种新型、高灵敏度，可直观与定量分析的快速检测方法，本研究创新使用具有氧化还原酶活性的合金纳米材料，将其作为标记物制备免疫层析试纸。待反应结束，使用TMB显色剂对免疫反应进行级联放大，可以显著提高检测的灵敏度，不仅可直观判断，也可精确定量分析，这为免疫层析技术标志物筛选与敏感性提高开拓了新的思路与方法。采用超声水浴法，通过抗坏血酸（AA）还原K2PtCl4和Na2PdCl4成功出制备Pt-Pd合金纳米颗粒，将其用于标记口蹄疫A型纯化抗原FMDV-146S，作为捕获抗原纳米标记物，再将纯化的A型表达抗原及其抗体（FMDV-146S-Ab）包被在硝酸纤维素膜（NC）上，分别作为检测线（T线）和质控线（C线），经条件优化，建立口蹄疫A型病毒抗体Pt-Pd合金纳米颗粒试纸条检测方法。对该免疫层析检测技术进行方法学考核，检测结果定量分析并建立标准曲线，同时与LPB-ELISA进行结果比对。该试纸条可在10 min内完成定性和定量检测，定量检测灵敏度为1:28/test，线性范围 1:26/test—1:29/test；检测A型FMDV阳性血清，敏感性为98%，检测FMDV阴性血清、O型和Asia 1型的FMDV阳性血清以及其他动物常见病毒病阳性血清，特异性为94.8%；该试纸条重复检测效果良好；与OIE推荐LPB-ELISA法比较，相关性好，相关系数为0.9112。本研究开拓采用Pt-Pd合金纳米颗粒为标记物建立免疫层析方法，并首次应用于口蹄疫病毒抗体检测，结果证实其具备较高灵敏度，相比胶体金灵敏度可提高24倍，同时具备可操作性与重现性。该研究是快速免疫层析技术的新尝试，为合金类纳米材料应用提供新的思路，未来具有实践应用前景。

免疫层析法；Pt-Pd合金纳米颗粒；过氧化物酶；口蹄疫A型病毒

0 引言

【研究意义】近年来，随着纳米材料的发展，其催化性能已被广泛应用于物理、化学和生物等领域[1]。纳米颗粒还可以通过与荧光分子或酶分子等相结合作为生物探针或免疫标记物[2-3]。区别于传统胶体金的不稳定性、与抗体结合不牢固、只能定性等缺点，本研究创新的将具有氧化还原酶活性的Pt-Pd合金纳米颗粒作为标记物建立免疫层析方法[4]，取代传统的金颗粒标记物，使得快速检测具有高灵敏度，精确定量的效果，为免疫层析技术标志物的筛选以及纳米材料的应用方向提供新的思路。【前人研究进展】免疫层析技术作为一项快速诊断技术，已被广泛地应用于医学、环境监测、检验检疫等领域[5-7]。免疫层析法中最常用的标记物为胶体金和单分散乳胶[8-9]。以胶体金或者乳胶微球为标记物的光学定量免疫层析检测技术，是通过检测硝酸纤维素膜表面标记物光反射信号的密度来实现定量检测，因此其灵敏度较低[10-12]。而随着对纳米材料研究的深入，人们发现纳米合金材料在光、电、磁、抗蚀性、催化等方面表现出非常优良独特的性质[13-15]，并且与相应的单金属纳米颗粒相比，双金属纳米颗粒具有更好的类酶催化性能[16-18]。纳米材料模拟酶区别于天然酶和传统模拟酶，它们更加稳定，且在宽的温度范围仍能具有同样高效的催化活性[19-21]。近年来，由于纳米科学技术的巨大发展，纳米科技在环境保护、生物医学、化学工艺等领域中起到了根本性变革作用。新型纳米材料标记物的研制也日新月异，将其应用于免疫层析技术亦朝着高灵敏度、多元化、实现定量或半定量的检测方向发展[22-23]。目前一些新型的纳米材料标志物在研究领域被广为知晓，如纳米磁珠、镧系元素、上转换发光颗粒、纳米乳球及量子点等[24-25]。【本研究切入点】具有催化活性的纳米材料多应用于电化学检测，将其创造性应用于免疫层析技术由蒋韬等[4]于2016年提出。以具有类酶活性的合金纳米材料为标记物的免疫层析技术不存在胶体金需大量聚集才能显色的缺点，在反应完成后通过使用TMB显色剂对免疫反应进行级联放大，可以提高检测灵敏度，减少样品本底的干扰。另外，因合金纳米颗粒性能稳定，故将其作为标记物便于定量检测标准曲线的建立，拥有传统标记物所无法比拟的优势。到目前为止，在国内制备出良好酶学活性的Pt-Pd合金纳米材料并应用于动物疫病诊断属首次。【拟解决的关键问题】在前期研究的基础上，首次建立以具有类酶活性的合金纳米颗粒为新型标记物的免疫层析定量检测方法，根据文献[26-28]，制备出性能稳定的Pt-Pd合金纳米颗粒，用于口蹄疫病毒抗体检测，并对该方法的性能进行鉴定评价。证实本方法灵敏度高，可操作性强，重现性良好。该方法的建立突破传统免疫层析方法标记物的应用思路，开拓性地将酶级联放大方法引入试纸条显色判断。为未来免疫层析技术高灵敏度的可视化方法提供新的手段。

1 材料与方法

本试验于2018年5月至2019年12月在中国农业科学院兰州兽医研究所完成。

1.1 毒种、血清样品

牛源口蹄疫A型疫苗株由中农威特生物科技股份有限公司提供；口蹄疫A型感染血清12份（猪、牛和羊各4份），A型免疫血清28份（其中阳性血清18份，包括猪、牛和羊各6份；弱阳性血清10份，包括猪血清4份、牛和羊各3份），口蹄疫O型免疫血清18份（猪、牛各7份、羊4份），口蹄疫Asia1型免疫血清12份（牛7份，羊5份），健康血清22份（猪血清8份、牛和羊各7份）,猪呼吸与繁殖综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪圆环病毒2型（PCV2）、塞内卡谷病毒（SVV）抗体阳性猪血清，羊小反刍兽疫（PPRV）抗体阳性羊血清，牛病毒性腹泻病毒（BVDV）抗体阳性牛血清各1份，均由口蹄疫国家参考实验室收集保存。兔抗口蹄疫A型病毒纯化抗体由口蹄疫国家参考实验室制备。

1.2 主要试剂和仪器

K2PtCl4、Na2PdCl4、抗坏血酸、普朗尼克-F127均购自Sigma公司；Bechman optimal XP100超速离心机购自美国Beckmen公司；XY3000喷膜机、CM3000切条机，购自美国Bio-Dot公司；TU-1900紫外可见分光光度计，购自北京普析公司。

1.3 FMDV标记抗原与检测抗原的制备

将灭活好的牛源口蹄疫A型疫苗株进行差速、超速离心，将离心后的一部分抗原进行分装，置于-20℃冻存，作为标记抗原。另一部分抗原用于150—450 g·L-1蔗糖密度梯度离心后，再用紫外分光光度计测定其OD259nm值，取OD259nm大于0.4的部分合并，作为检测抗原，抗原定量公式为146S（µg·ml-1）=128.7× OD259nm。

1.4 Pt-Pd合金纳米颗粒的制备

分别取900 μL K2Ptcl4（20 mmol·L-1）、100 μL Na2Pdcl4（22 mmol·L-1）、22 μL HCl（6 mol·L-1）、1 mL抗坏血酸（100 mmol·L-1）加入10 mg普朗尼克-F127中，充分混匀，30℃水浴加热超声处理5 h。将处理后的液体用丙酮和纯水交替洗5次，每次洗完均离心 3 000 r/min，5 min，弃去上清，收集沉淀，4℃备用。采用透射电子显微镜对Pt-Pd合金纳米颗粒的超微结构进行扫描，观察其聚集状态及粒径分布[29]。

1.5 最适标记条件的选择与抗原标记量的优化

1.5.2 Pt-Pd合金纳米颗粒标记抗原量的优化选择最适条件的Pt-Pd合金纳米颗粒溶液。将FMDV抗原超离部分稀释为38.69 µg·mL-1后，分别取适量在缓慢揽拌条件下加入到Pt-Pd合金纳米颗粒溶液中，控制最终抗原量分别为0.774、0.387和0.193 µg·mL-1，组装试纸条，比较试纸条跑条结果，以确定Pt-Pd合金纳米颗粒标记抗原时的最佳抗体量。

1.6 Pt-Pd合金纳米颗粒试纸条的制备

将最佳标记量的FMDV抗原超离部分加入Pt-Pd合金纳米颗粒溶液中，磁力搅拌10—15 min，加入100 g·L-1BSA至终浓度为10 g·L-1，继续磁力搅拌10—15 min。之后6 000 r/min离心10 min，将沉淀用相应缓冲液重悬喷涂于玻璃纤维制成合金标记垫。

将纯化好的FMDV-146S与FMDV-146S-Ab倍比稀释后确定最佳包被量并分别标记于NC膜的T线与C线，按顺序装配，即制成口蹄疫A型病毒抗体检测试纸条（图1）。

1.7 样品检测及结果判定

1.7.1 定性检测向试纸卡的样品孔中加入35 μL待检血清，之后再加入等体积稀释液，反应10 min后向NC膜反应区加入TMB显色剂，随即进行结果判定。

1.7.2 定量检测

1.7.1 有效性评价指标 ①腹痛发作天数，②腹痛程度，③伴随症状，以上均于基线、治疗后第1、2周记录，治疗结束评价；④中医证候疗效，基线、治疗结束记录，治疗结束评价；⑤腹痛复发情况，治疗结束后4周评价。以腹痛发作天数为主要评价指标。

1.7.2.1 判定值(CUT-OFF)的确定液相阻断ELISA方法（LPB-ELISA）为OIE推荐的用于检测血清中口蹄疫抗体效价的经典方法。分别取已知LPB-ELISA抗体效价为1:64、1:128、1:256和1:512的口蹄疫A型阳性血清各1份，用本试验制备的试纸条进行检测，每份血清重复检测10次，用金标免疫分析仪扫描读取信号T/C比值。将T/C比值的平均值作为CUT-OFF值，并建立标准曲线。

1.7.2.2 定量检测判定将显色后的试纸条放入金标免疫分析仪扫描，读取信号T/C比值，并以此在标准曲线上对应该份血清的抗体效价。

图1 免疫层析试纸条结构

1.7.2.3 定量检测的重复性取口蹄疫A型阳性血清（LPB-ELISA抗体效价1:1024）进行1:2—1:25稀释，每个稀释度重复检测20次，并用金标分析仪扫描读取信号T/C值。将20次检测的T/C值的标准差与平均值的比值定为变异系数。

1.8 敏感性与特异性试验

分别用Pt-Pd合金纳米颗粒检测试纸条和胶体金试纸条检测本课题组保存的FMDV O型、A型和Asia I型抗体阳性血清，FMDV阴性血清以及猪、牛、羊常见病毒病感染阳性血清，比较两种试纸条的阴、阳性检出率，确定纳米材料试纸条对不同性质样本的敏感性和特异性。

将口蹄疫A型阳性血清样品（LPB-ELISA抗体效价1:2048）从1﹕4开始进行4倍稀释，分别用Pt-Pd合金纳米颗粒试纸条和胶体金试纸条进行检测，静置10 min观察结果，评估试纸条的灵敏度。

1.9 新纳米材料试纸条与LPB-ELISA抗体效价相关性分析

将本课题组保存的背景清晰的102份口蹄疫A型阳性血清、O型、Asia1型阳性血清与阴性血清分别使用Pt-Pd合金纳米颗粒试纸条和LPB-ELISA进行平行对比试验，并进行相关性分析。

2 结果

2.1 FMDV标记抗原与检测抗原含量的确定

紫外分光光度计检测，收集OD260 nm≥0.4的抗原，计算可得标记抗原病毒含量为386.9 µg·mL-1，检测抗原病毒含量为275.3 µg·mL-1，-20℃冻存备用。

2.2 Pt-Pd合金纳米颗粒的形态与大小

制备好的Pt-Pd合金纳米颗粒的透射电镜扫描图如图2所示。从图中可以看出，Pt-Pd合金纳米颗粒近似于球体的胶体聚集体形式存在，由多个颗粒相互穿插，形成链枝状的稳定结构，其基本颗粒尺寸在50 nm左右。

图2 Pt-Pd合金纳米颗粒透射电镜图

2.3 最适标记条件的确定

静置20 min后，溶解于pH 7.5磷酸盐缓冲液和pH 8.5硼酸盐缓冲液中的捕获抗原纳米标记物出现肉眼可见的颗粒性沉淀；而在pH 9.5的碳酸盐缓冲液中则分散状态稳定，未出现团聚现象。最终确定pH 9.5 0.05 mol·L-1碳酸盐缓冲液为Pt-Pd合金纳米颗粒溶解与标记的最适缓冲体系。

当检测线标记量为0.774 µg·mL-1，加入TMB后试纸条背景整体显色较深，且出现非特异性反应；标记量为0.193 µg·mL-1时，试纸条检测线显色变浅；为保证试纸条显色和灵敏度，最终确定A型口蹄疫抗原最适标记量为0.387 μg·mL-1。

2.4 检测线与质控线最佳包被量的确定

检测口蹄疫病毒A型阳性血清（LPB-ELISA抗体效价1:128），能明显观察到T线显示黑色条带；检测口蹄疫病毒O型、Asia1型血清和阴性血清时，T线不显色，检测线包被抗原最适浓度为55.1 μg·mL-1。

将兔抗IgG用PB溶液稀释不同浓度，检测口蹄疫病毒A型阳性血清，当反应进行至C线时，C线立即显色，且C线颜色和T线一致，质控线包被兔抗最适浓度为0.67 mg·mL-1。

2.5 试纸条结果判定标准的确定

2.5.1 定性检测结果判定标准阳性：C线和T线均显色；阴性：C线显色，T线不显色；可疑：C线显色，T线若隐若现，颜色很浅；无效：C线不显色。

2.5.2 定量标准曲线建立在最优试验条件下，依据检测体系中待测物浓度与金标分析仪读值T/C比值在一定条件下呈线性关系的原理，以A型阳性血清样品的LPB-ELISA抗体效价为横坐标，金标分析仪读值T/C比值为纵坐标作图，建立标准曲线。当LPB-ELISA抗体效价为1:64—1:512时，与其金标分析仪读值T/C比值之间呈良好的线性关系（图3），线性回归方程为y=0.2056x-0.2155，相关系数2= 0.9692，线性良好。

图3 Pt-Pd合金纳米颗粒试纸条定量检测标准曲线

2.5.3 定量检测结果判定标准将待检血清的T/C值带入标准曲线，即可对应获得该份血清的抗体效价（表1）。

2.5.4 重复性试验重复检测稀释度1:2—1:25的标准阳性血清，每个浓度检测20次，变异系数介于3.4%—14.3%，证实该检测技术具有较好的精密度（表2）。

2.6 敏感性与特异性分析

如图4所示，对于50份A型阳性血清，Pt-Pd合金纳米颗粒试纸条可检测出阳性结果49份，胶体金试纸条可检测出阳性结果48份，敏感性分别为98%和96%。对于22份阴性血清，Pt-Pd合金纳米颗粒试纸条和胶体金试纸条均可检测出阴性结果22份，特异性均为100%；对于36份特异性血清（包括30份口蹄疫O、亚I型病毒血清和6份其他病毒感染动物阳性血清），Pt-Pd合金纳米颗粒试纸条可检测出阴性结果34份，胶体金试纸条可检测出阴性结果31份，特异性分别为94%和86%；综合以上分析，两种试纸条特异性分别为94.8 %和91.4%。结果表明，Pt-Pd合金纳米颗粒试纸条有更高的敏感性和特异性。

表1 定量检测结果判定

表2 Pt-Pd合金纳米颗粒免疫层析试纸条检测系统的变异系数

2.7 灵敏度最低检测限试验

Pt-Pd合金纳米颗粒试纸条能检出稀释度为1:28/test；而胶体金试纸条只能检测出稀释度1:24/test。因此，Pt-Pd合金纳米颗粒试纸条灵敏度更高（图5、表3）。

2.8 Pt-Pd合金纳米颗粒试纸条与LPB-ELISA比对试验相关性分析

对背景清晰的102份血清样品分别用Pt-Pd合金纳米颗粒试纸条和LPB-ELISA方法进行检测，并将二者抗体效价（Log10）进行比对（图6）。Pt-Pd纳米颗粒试纸条的检测结果与LPB-ELISA的检测结果具有良好的一致性，线性回归方程为：y = 0.8969x + 0.2346，相关系数2=0.9112。比对结果说明，本研究建立的Pt-Pd合金纳米颗粒免疫层析方法可靠，适合于血清中口蹄疫病毒抗体的快速检测。

图4 Pt-Pd合金纳米颗粒试纸条与胶体金试纸条敏感性、特异性结果比较

（A）为胶体金试纸条灵敏度检测结果；（B）为Pt-Pd合金纳米颗粒试纸条检测结果

表3 标准品血清不同稀释度下两种试纸条最低检测限

3 讨论

目前市场上主打的免疫层析产品大部分基于胶体金为标记物[30]。随着检测方法的不断成熟以及多种标记物不断发展，逐渐出现脂质体、胶态碳、荧光微球、量子点、磷光发光粉和生物发光物等[30]标记物。高灵敏度和精准定量已成为免疫层析技术发展的新需求。纳米材料用于生物分析标记物质，可大大改善标记物的性能，显著提升现有分析方法的灵敏度及特异性，其在抗原抗体的标记上具有很大的应用潜能[31]。近年来，酶学性质合金纳米材料常规多应用于电化学领域，因为它的微量酶学反应活性，可以被电信号的变化捕捉，成为电化学诊断的首选标记物。但因合金材料无色，无发射光谱，所以在免疫层析技术发展近四十年历程中，它从来没有作为可选的标记物。本研究在有关类酶材料免疫层析应用的基础上，通过自制具有氧化还原酶活性的纳米材料，首次应用于口蹄疫免疫抗体检测。建立的新型免疫层析方法灵敏度相比胶体金试纸条可提高24倍。同时为了实现抗体效价精确判定，对TMB显色级联放大后的免疫反应建立定量曲线，根据T/C值可比对得到相应的经典LPB-ELISA 抗体效价。

图6 Pt-Pd合金纳米颗粒试纸条与LPB-ELISA相关性分析

为制备适宜标记的合金材料，研究初期通过多步骤探索性试验反复摸索，最终确定采用金属离子还原法[29]制备合金纳米材料。该方法是利用稳定剂（普朗尼克F127）聚合物胶束在强酸性介质中缓慢还原两种金属物质，实现了合金纳米颗粒的快速液相合成。相对传统晶种生长法[31]、模板法[29]和电化学法[32]解决了高温、高压等复杂的试验操作程序。制备过程由于加入化学试剂，可能会给纳米颗粒的催化性能造成影响，但通过反复多步丙酮和水交替洗涤、离心循环，即可去除未沉积的金属微粒和表面活性剂。最终收集到的纳米颗粒为分散良好、无沉淀、高质量的胶体溶液。在合金材料的选择上，初期阶段共制备出Pt-Au和Pt-Pd两种纳米材料作为备选的免疫层析标记物，但最终确定使用Pt-Pd合金纳米颗粒，是因为Pt-Pd与Pt-Au相比，其催化活性更强，在最适缓冲体系中能更好地捕获FMDV抗原，反应结束后加入TMB显色剂级联放大作用更明显。因此，本研究将Pt-Pd合金纳米颗粒作为检测的最佳免疫层析标记物。

本研究在对合金纳米颗粒缓冲体系选择的过程中发现，溶液的pH和离子强度是影响纳米材料标记物稳定性最为关键的指标，最终确定pH 9.5，浓度0.05 mol·L-1碳酸盐缓冲液是最佳的工作环境。分析在该环境下，一方面溶液的pH与标记蛋白本身等电点接近，使得纳米颗粒能够更好地与标记抗原结合，不易发生聚沉。另一方面使用适宜的低离子强度溶液，可以保证Pt-Pd合金纳米颗粒呈稳定的分散状态。因为纳米颗粒具有胶体的多种特性，对电解质较为敏感，若溶液中离子强度过高，则游离的电解质会破坏颗粒外围的永水化层，从而打破其稳定状态，使分散的单一颗粒凝聚成大颗粒，进而从液体中沉淀下来。

通过使用Pt-Pd合金纳米颗粒试纸条检测方法以及OIE推荐用于检测血清中口蹄疫抗体效价经典液相阻断ELISA方法同时对口蹄疫A型阳性血清、O型、Asia1型阳性血清与阴性血清进行检测，结果显示，Pt-Pd合金纳米颗粒试纸条敏感性高，与LPB- ELISA方法相同，虽然特异性略低于LPB-ELISA，但试纸条检测方法的优势在于检测速度快，10 min左右即可得到检测结果；无需特殊仪器设备；操作简单，便于基层临床检测。本方法的建立打破传统胶体金试纸条的模式，开创了免疫层析标记物选择新方向，也使免疫层析试纸条的应用模式有了跨越式的发展。将具有类酶活性的合金纳米材料应用于免疫层析技术与传统的胶体金免疫层析技术相比，具有独特的优势，特别是在定量化方面的前景，非常符合近些年来快速诊断技术发展的新要求。但由于目前在合金纳米材料制备的过程中均使用进口化学试剂，导致制备成本较高，下一步需要进行国产试剂替代的尝试，同时扩大检测样本，确定该方法在产业化、市场化的应用前景。

4 结论

本研究成功制备具有类酶活性且适用于标记的Pt-Pd合金纳米颗粒，于国内属于首次，并开创性地将其作为标记物建立免疫层析定量检测方法，用于动物病毒抗体的检测。通过各种评价性试验证实该方法敏感性高、特异性强、重复性良好，可为免疫层析检测方法提供有效的技术支撑。

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Establishment of a Novel Immunochromatographic Assay Based on Foot-and-Mouth Disease Virus Serotype A Labeled by Pt-Pd Bimetal Nanoparticles

SUN YanYan1,2, LI Xin2, LIN Mi2, LI FengSong1,2, Bao YanFang2, CHEN XiaHui2, YANG Guang2, ZENG QiaoYing1, JIANG Tao2

1College of Veterinary Medicine, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070;2Key Laboratory of Veterinary Etiological Biology/National Foot-and Mouth Disease Reference Laboratory/ Lanzhou Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Lanzhou 730046

【】A novel immunochromatographic test strip with peroxidase-like activity of Pt-Pd bimetal nanoparticles (NPs) as a marker (shortened as NPs test strip) was developed. The signal amplification was based on Pt-Pd bimetal NPspossessing high peroxidase-like activity toward 3, 3, 5, 5＇-tetramethylbenzidine, which could produce characteristic colored bands. It could not only improve the sensitivity of detection, but also completed a quantitative analysis of results with reader. This method provided a rapid and effective screening means for monitoring.【】Pt-Pd bimetal NPs were prepared by K2Ptcl4and Na2Pdcl4,which were reduced by ascorbic acid (AA). The mixture was continuously sonicated in water bath. The purified antigen of FMDV serotype A was coupled with Pt-Pd bimetal NPs. The purified 146S particles of FMDV serotype A (FMDV-146S) and the antibodies against FMDV-146S (FMDV-146S-Ab) were blotted on nitrocellulose membrane as test line and control line, respectively. The sensitivity, specificity and stability of this NPs test strip were assessed by testing known positive and negative FMDV serum and positive serum against other animals’ disease. Parallel tests of the positive FMDV serum by LPB-ELISA were performed.【】This established method could be accomplished qualitatively as well as semi-quantitative detection in 10 minutes, the sensitivity was up to 1:28/test, and the linear range was from 1:26/test-1:29/test. The detection sensitivity for the serum positive for FMDV type A was 98%, and the detection sensitivity for FMDV-negative serum, serum positive for FMDV type O and type Asia 1 as well as sera positive for other common viral diseases in animals was 94.8%. The differences between batches were small. Test serum samples showed that the strip results were coincident with LPB-ELISA,2=0.9112. 【】An immunochromatographic assay based on Pt-Pd bimetal nanoparticles was established innovatively and applied to the detection of FMDV antibodies. The results demonstrated its high sensitivity, which was a 24-fold increase as compared with the colloidal gold. In addition, this novel assay also displayed excellent maneuverability and reproducibility. The established method represented a new attempt in fast immunochromatographic assay and probably predicted an alternative and highly promising application of the alloy nanoparticles.

immunochromatographic assay; Pt-Pd nanoparticles; peroxidase; foot-and-mouth disease virus (FMDV) type A