SPE-HPLC同时测蔬菜中6种农药残留

安智慧，田清良，罗 珊

（西藏农牧学院，西藏林芝 860000）

0 引言

随着社会的发展，人们的生活水平在提高，对蔬菜的质量要求也越来越高。在日常生活中，由于蔬菜农药残留问题引起中毒事件时有发生，对人们的身体健康造成了一定影响，所以建立完善的蔬菜农药残留检测方法已成为了刻不容缓的任务[1]。农药残留检测，需要将蔬菜水果上低浓度的农药提取分离，进而定性、定量。通常需要将样品进行前处理，制样、提取、提纯、分离等过程，提取和提纯起着关键性作用，SPE是比较常用的农药残留纯化的方法[2]，固相萃取能够简化样品前处理，重复性好，节约实验人员的时间和劳动强度[3-4]。试验建立利用固相萃取-高效液法相同时检测大棚种22种蔬菜中吡虫啉、多菌灵、甲基硫菌灵、除虫脲、灭幼脲、氟啶脲6种农药残留的方法，有效缩短了前处理时间，又有效地避免了样品中农药残留量的损耗，结果表明，该方法前处理简单、快捷、灵敏度高检测结果准确等优点[5-6]。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

仪器：高效液相色谱仪（Agilent 1260）；匀浆机（FSH-2A，常州金坛良友仪器有限公司）；震荡器（HY-4，江苏科析仪器有限公司）；数显恒温水浴锅（A1901230，金坛市盛蓝仪器制造有限公司）；试剂：乙腈（HPLC色谱纯试剂，天津益仁达化学试剂厂）；甲醇（Honeywell）；二氯甲烷、丙酮、氯化钠为分析纯（津益仁达化学试剂厂）；农药标准品（吡虫啉、多菌灵、甲基硫菌灵、除虫脲、灭幼脲、氟啶脲，北京北纳创联生物技术研究院），氨基柱（500 mg/mL），22种蔬菜为林芝市巴宜区大棚中采摘。

1.2 试验方法

1.2.1 样品溶液制备。准确称取25.0 g蔬菜样品于锥形瓶中，并加入50 mL乙腈溶液，高速匀浆2 min，震荡仪震荡40 min后过滤，向滤液中加入7 g氯化钠剧烈摇晃后静待分层。取上层清液10 mL，水浴锅蒸干有机溶剂，用3 mL二氯甲烷：甲醇（95：3）溶液溶解，盖上铝箔待用，取2 mL混合液淋洗氨基柱，待页面达到吸附层表面时立即加入带净化液，用3 mL混合液洗涤烧杯并淋洗氨基柱，重复1次，再用4 mL混合液洗涤烧杯并将洗涤液倒入SPE柱。将上述洗脱液在65℃条件下水浴蒸近干，用甲醇定容至5 mL并摇匀，过0.22 um滤膜后装入样品瓶。

1.2.2 液相色谱条件的建立。色谱柱：Agilent C18-Ether（4.6 mm×250 mm，5 um）；流动相A为水、B为甲醇；柱温40℃；进样量：10 μl/min；梯度洗脱，梯度洗脱条件见表1；内标法测定。

表1 梯度洗脱条件

1.2.3 标准曲线与标准曲线的绘制。分别量取10 ug/mL的吡虫啉、多菌灵等6种农药标准品，逐级稀释成0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ug/mL的标准溶液，按步骤1.2.2的色谱条件进行测定，以标溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，并得出线性回归方程。

图1 0.5 ng/uL混标图谱

1.2.4 回收率与精密度实验。称取一种蔬菜空白样25g，向样品中添加吡虫啉、多菌灵等6种标准溶液0.5ng/μL，样品处理按1.2.1步骤完成，检测按1.2.2液相条件进行，重复5次，测得的图谱见图1。

2 结果与讨论

2.1 标准曲线与检出限

6种农药标准品，各化合物定量离子峰面积与浓度呈线性关系，相关系数R2＞0.996。以3倍信噪比计算出6种农药的检出限，以10倍信噪比计算出6种农药的定量限[7]，6种农药的检出限为0.01～0.05 ng/μL。此方法可用于大部分蔬菜中6种农药的定性定量分析。见表2。

表2 标准曲线与线性

2.2 精密度与回收试验

称取1份蔬菜空白样25 g进行加标回收实验，添加混标浓度为0.5 ng/μL，平行试验5次，得到回收率与精密度，见表3。根据表中结果可知，该方法的回收率在77.2%～116.8%，RSD在2.431%～18.98%，该方法的精密度和准确度良好，能够用该方法同时测吡虫啉等6种农药。

表3 标准曲线与线性

3 结语

实验建立了用SPE固相萃取法结合高效液相法检测了吡虫啉、多菌灵、甲基硫菌灵、除虫脲、灭幼脲、氟啶脲6种农药的检测方法，甲醇-水梯度洗脱，从6种农药的线性曲线、检出限、回收率、重复率结果表明，该方法前处理简单、分离度好、灵敏度高、线性范围广、检测精准。该方法适用于大部分蔬菜中这6种农药的同时测定。