PPAR γ基因多态性与新生儿肺炎易感性及血清炎症细胞因子的关系

田静，惠晓君，张靖，任亚方，张朋

（南阳市中心医院1.新生儿科，2.小儿外科，河南 南阳473000）

感染性肺炎是新生儿的常见疾病之一，也是引起新生儿病死的常见病因之一，其发生与新生儿免疫系统尚未发育完善，容易感染细菌、病毒、支原体等病原菌有关，但具体的发病机制未完全阐明。 过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator activated receptor γ, PPAR γ）属于核受体超家族，是一类由配体激活的转录因子，参与糖脂代谢、炎症反应、氧化应激反应的调控[1-2]。编码PPAR γ基因存在广泛的单核苷酸多态 性（single nucleotide polymorphism, SNP），其 中rs1801282 是研究最多的PPAR γ基因SNP 位点[3-4]。该位点CCA 向GCA 的突变被证实是≥14 岁的肺炎脓毒症患者发生多器官功能障碍的保护因素[5]，但这一突变是否与新生儿肺炎的发生有关尚未见明确报道。为此，本研究拟检测肺炎新生儿PPAR γ基因rs1801282 位点的SNP，分析该基因SNP 与新生儿肺炎发生、血清炎症细胞因子质量浓度的关系，进而为新生儿肺炎发病机制的研究及未来疾病的个体化防治提供理论支持。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性选取2016年3月—2019年3月南阳市中心医院收治的感染性肺炎新生儿90 例。纳入标准：①符合新生儿细菌性肺炎的诊断标准；②胎龄37～42 周；③临床资料及临床样本完整；④取得家长知情同意。排除标准：①有宫内缺氧或新生儿窒息史；②有吸入性肺炎、新生儿呼吸窘迫综合征；③合并先天性畸形或其他先天性疾病；④合并免疫缺陷。根据病情将感染性肺炎新生儿分为轻症肺炎组52 例和重症肺炎组38 例。另取同期在该院分娩的80 例健康新生儿作为对照组。本研究经医院伦理委员会批准。3 组新生儿一般资料的比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。见表1。

表1 3组新生儿一般资料的比较

1.2 方法

1.2.1 重症肺炎的评价方法感染性肺炎新生儿符合下列任意1 项，即判断为重症肺炎：①吸入氧浓度（FiO2）≥60%，监测动脉血氧饱和度（SaO2）＜92%；②出现休克；③出现呼吸窘迫或多器官衰竭；④出现反复呼吸暂停或慢而不规则的呼吸。

1.2.2 PPAR γ 基因rs1801282 位点SNP的检测采集3 组新生儿的静脉血2 ml，EDTA 抗凝后采用血液基因组DNA 提取试剂盒（北京天根公司）分离提取抗凝静脉血中的基因组DNA，操作按照试剂盒说明书进行。得到基因组DNA 后，配置PCR 体系：基因组DNA 1 μl、2×Taq PCR 预混试剂Ⅱ10 μl、10 μmol/L 的正反向引物各0.4 μl、去离子水8.2 μl。按照下列程序进行反应：95℃预变性3 min，95℃变性30 s，50℃退火30 s，72℃延伸30 s，循环35 次。取PCR产物，配置酶切体系，37℃水浴过夜。次日，取酶切产物，在琼脂糖凝胶中电泳，根据电泳结果判断PPAR γ基因rs1801282 位点的SNP。

1.2.3 血清炎症细胞因子的检测采集3 组新生儿的静脉血2 ml，室温静置30 min 后自然凝血，3 000 r/min 离心20 min，分离上层血清后采用酶联免疫吸附试验（试剂盒购自上海西唐公司）检测白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的质量浓度，操作按照试剂盒说明书进行。

1.3 统计学方法

数据分析采用SPSS 21.0 统计软件。计量资料以均数±标准差（±s）表示，比较用t检验或方差分析，进一步两两比较用LSD-t检验；计数资料以构成比（%）表示，比较用χ2检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3组新生儿PPAR γ基因rs1801282位点多态性的比较

PCR 酶切产物的琼脂糖电泳图如图1所示，酶切产物为267 bp 是GG 基因型，酶切产物为267 bp、224 bp、43 bp 是GC 基因型，酶切产物为224 bp、43 bp 是CC 基因型。PPAR γ基因rs1801282 位点CC为野生基因型，GC、GG 为突变基因型。3 组新生儿CC 基因型的比例及等位基因C 的频率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；重症肺炎组和轻症肺炎组新生儿CC 基因型的比例及等位基因C 的频率高于对照组，GC+GG 基因型的比例及等位基因G 的频率低于对照组；重症肺炎组新生儿CC 基因型的比例及等位基因C 的频率高于轻症肺炎组，GC+GG 基因型的比例及等位基因G 的频率低于轻症肺炎组。见表2。

2.2 3组新生儿血清炎症细胞因子的比较

图1 PCR酶切产物的琼脂糖电泳图

表2 3组PPAR γ基因rs1801282位点多态性的比较例（%）

3 组新生儿的血清IL-6、TNF-α、ICAM-1 的质量浓度比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；进一步两两比较，重症肺炎组和轻症肺炎组新生儿的血清IL-6、TNF-α、ICAM-1 质量浓度高于对照组（P＜0.05），重症肺炎组新生儿的血清IL-6、TNF-α、ICAM-1 质量浓度高于轻症肺炎组（P＜0.05）。见表3。

表3 3组血清IL-6、TNF-α、ICAM-1质量浓度的比较（±s）

表3 3组血清IL-6、TNF-α、ICAM-1质量浓度的比较（±s）

组别n IL-6/（pg/ml）TNF-α/（ng/ml）ICAM-1/（ng/ml）对照组轻症肺炎组重症肺炎组F 值P 值80 52 38 9.93±1.34 20.37±5.57 41.94±8.94 470.862 0.000 41.22±7.96 60.39±11.91 131.28±26.58 462.197 0.000 137.65±28.79 201.41±48.93 376.57±71.47 327.475 0.000

2.3 肺炎组中不同PPAR γ 基因多态性新生儿血清炎症细胞因子的比较

肺炎组中PPAR γ基因rs1801282 位点GC+GG 基因型新生儿的血清IL-6、TNF-α、ICAM-1 质量浓度低于CC 基因型新生儿，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 肺炎组中不同PPAR γ基因多态性新生儿血清IL-6、TNF-α、ICAM-1质量浓度的比较 （±s）

表4 肺炎组中不同PPAR γ基因多态性新生儿血清IL-6、TNF-α、ICAM-1质量浓度的比较 （±s）

组别n IL-6/（pg/ml）TNF-α/（ng/ml）ICAM-1/（ng/ml）GC+GG基因型CC基因型t 值P 值9 8 1 26.12±6.68 59.69±11.83 13.088 0.000 87.75±10.39 113.46±29.49 5.497 0.000 266.59±44.48 354.31±89.49 4.967 0.000

3 讨论

PPAR γ是重要的核转录因子，参与糖脂代谢、炎症反应、氧化应激反应的调控。PPAR γ基因存在广泛的多态性，其中rs1801282 是目前研究最广泛的PPAR-γ基因SNP 位点，该位点位于外显子2 第12位密码子，发生CCA 向GCA 的突变后、编码的氨基酸从脯氨酸转变为丙氨酸，进而造成编码产物蛋白结构及功能的改变[6-7]。该突变在不同人群中存在差异，其中亚洲人群中PPAR γ基因rs1801282 位点SNP 的发生率低于白种人[8]。张晓伏[9]报道，汉族人群PPAR γ基因rs1801282 位点GC+GG 突变基因型的比例约15%且发生纯合突变，即GG 基因型的患者仅1 例。本研究所纳入的健康新生儿中，PPAR γ基因rs1801282 位点SNP 的发生率为20%，与国内已有的研究报道基本一致。

PPAR γ基因的编码产物具有抑制炎症反应的作用[10-11]，当rs1801282 位点发生SNP 后，PPAR γ基因编码产物的抑炎作用可能受到影响，进而参与多种炎症疾病的发生[12-13]。朱小蔚[5]对肺炎脓毒症患者PPAR γ基因rs1801282 位点SNP 的分析证实，合并重度器官衰竭的肺炎脓毒症患者无一例发生GG 纯合突变，仅1 例发生GC 杂合突变，rs1801282 位点GC+GG 基因型的比例低于轻度器官衰竭的肺炎脓毒症患者，提示PPAR γ基因rs1801282 位点C 向G 的突变可能在肺炎脓毒症中起到保护作用。本研究肺炎新生儿PPAR γ基因rs1801282 位点CC 基因型的比例高于对照组，GC+GG 基因型的比例低于对照组，重症肺炎组CC 基因型的比例高于轻症肺炎组，GC+GG 基因型的比例低于轻症肺炎组，说明PPAR γ基因rs1801282 位点SNP 与新生儿肺炎的发生有关，C向G 突变的减少会造成新生儿肺炎的发生。

PPAR γ的抑炎作用与其对多种炎症细胞因子表达的抑制作用有关，孙小平[14]的动物实验证实，PPAR γ的激动剂罗格列酮对脓毒症小鼠炎症细胞因子IL-6、TNF-α 的分泌具有抑制作用；BHAT[15]的动物实验证实，PPAR γ对高脂血症小鼠体内炎症细胞因子ICAM-1 的分泌具有抑制作用。IL-6、TNF-α、ICAM-1 3 种炎症细胞因子在炎症反应的激活过程中起到促炎、促黏附等作用，已经被证实在新生儿肺炎的发病过程中大量分泌[16-18]。本研究对肺炎新生儿血清中炎症细胞因子的分析结果与已有的研究一致，即肺炎新生儿血清中IL-6、TNF-α、ICAM-1 的质量浓度升高且重症肺炎组血清中IL-6、TNF-α、ICAM-1 的质量浓度高于轻症肺炎组。进一步分析PPAR γ多态性对血清炎症细胞因子分泌的影响可知，肺炎组中PPAR γ基因rs1801282 位点GC+GG 基因型新生儿的血清IL-6、TNF-α、ICAM-1 质量浓度低于CC 基因型新生儿，说明PPAR γ基因rs1801282位点C 向G 的突变能够起到抑炎作用，减少炎症细胞因子的释放。

综上所述，本研究对PPAR γ基因rs1801282 位点SNP 的分析说明，PPAR γ基因多态性与新生儿肺炎的发生、发展有关，C 向G 的突变是在发病过程中起保护作用，能够减少多种炎症细胞因子的释放；PPAR γ基因rs1801282 位点SNP 的检测可能作为筛查新生儿肺炎高危人群的潜在靶点，为疾病的个体化防治提供依据。