复方黄芪生脉饮化学成分的UPLC-Q-TOF/MS分析

信 悦，白 晶

(1.哈尔滨商业大学 药物工程技术研究中心，哈尔滨 150076；2.国家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心，哈尔滨 150076)

黄芪生脉饮由张元素所著的《医学启源》中生脉散演变而来，由黄芪、党参、五味子、麦冬组成[1]，常用治冠心病属气阴两虚而见心悸气短患者[2].近年来，黄芪生脉饮在临床上用于治疗病毒性心肌炎[3]、非小细胞型肺癌的临床辅助治疗[4]、慢性心力衰竭的治疗[5]、糖尿病肾病[6]等疾病.目前，对复方黄芪生脉饮的临床疗效研究较多，但对其化学成分进行全面地定性分析的文献报道并不多见.UPLC-Q-TOF/MS可以提供高水平的选择性、特异性、灵敏度和结构分析，被广泛运用到中药化学成分分析、药效物质基础研究、中药质量控制等研究领域中[7].实验采用 UPLC-Q-TOF/MS技术，结合标准品和相关文献，对复方黄芪生脉饮中的化学成分进行分析鉴定，为复方黄芪生脉饮的质量控制及其药效物质基础提供参考依据.

1 材料与方法

1.1 材料

SYNAPT G2-Si超高效液相色谱仪/超高分辨精确质谱串联四级杆-飞行时间/离子淌度高清质谱，配有电喷雾离子源(ESI)、Masslynx 4.1工作站(美国Waters公司)；OSB-2100 EYELA油(水)浴锅(上海和杰科技有限公司)；电子天平(奥豪斯仪器上海有限公司)；KQ5200DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司).

黄芪、党参、五味子、麦冬：购自哈尔滨宝丰医药连锁有限公司，经由哈尔滨商业大学药学院曲中原教授鉴定为豆科植物蒙古黄芪AstragaliRadixmembranace(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.) Hisco的干燥根，桔梗科植物党参CodonopsisRadix(Franch.)Nannf.的干燥根，木兰科植物五味子Schisandrachinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实，麦冬Ophiopogonjaponicus(Linn. f.) Ker-Gawl.的干燥块根；对照品芒柄花素(批号：3518)、党参炔苷(批号：6413)、黄芪甲苷(批号：2581)，质量分数大于98%，购自上海诗丹德标准技术服务有限公司；乙腈(北京迪马科技有限公司)；甲醇(色谱纯，北京市通广精细化工公司)，甲醇(分析纯，山东禹王试剂有限公司)，甲酸(北京市通广精细化工公司)，屈臣氏蒸馏水.

1.2 实验方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm×1.7 μm)，流动相：0.1%甲酸水溶液-乙腈，梯度洗脱，进样量：2 μL，流速：0.4 mL/min，全波长扫描，柱温：30 ℃. 见表1.

表1 UPLC方法的流动相梯度

1.2.2 质谱条件

采用电喷雾离子源(ESI)，负离子模式，质量扫描范围为m/z50～1200，脱溶剂气温度450 ℃，锥孔气体积流量50L/h，喷雾器气体流量6.5 Bar，离子源温度120 ℃，毛细管电压3 000 V，取样锥电压40 V，脱溶剂气体流量800 L/h.

1.2.3 对照品溶液的制备

精密称取芒柄花素、党参炔苷、黄芪甲苷对照品适量，甲醇溶解配制成0.1 mg/mL的对照品溶液.

1.2.4 供试品溶液的制备

按复方黄芪生脉饮的制备方法自制样品，微孔滤膜(0.22 μm)滤过，滤液作为供试品溶液.

2 结果与分析

2.1 化学成分分析鉴定

取“1.2.3”“1.2.4”项下的供试品及对照品溶液，根据“1.2.1”“1.2.2”项下色谱与质谱条件分别进样.根据UPLC-Q-TOF/MS产生的一级和二级质谱信息，结合对照品及相关文献[8-15]对复方黄芪生脉饮进行定性分析.负离子模式下黄芪生脉饮总离子流图见图1，负离子模式下黄芪生脉饮的化学成分信息见表2.

图1 负离子模式下黄芪生脉饮总离子流图

表2 负离子模式下黄芪生脉饮的化学成分信息

续表2

2.2 黄芪中几种特征性化学成分的分析

基于表2，黄酮类化合物，以化合物6为例，负离子模式准分子离子峰为m/z283.0605[M-H]-，脱去一分子CH3形成碎片离子268.037 3[M-H-CH3]-，再脱去一分子HCO形成碎片离子239.034 3[M-H-CH3-HCO]-，再脱去一分子CO形成碎片离子211.039 0[M-H-CH3-HCO-CO]-，再脱去一分子CH3形成碎片离子195.044 9[M-H-2CH3-HCO-CO]-，结合文献，黄芪中含有毛蕊异黄酮，其质核比m/z为283.060 6，根据裂解碎片信息判断该化合物可能为毛蕊异黄酮.化合物13，负离子模式准分子离子峰为m/z267.065 6[M-H]-，此外还存252.041 7[M-H-CH3]-，223.038 9[M-H-CH3-HCO]-，195.044 7[M-H-CH3-HCO-CO]-等碎片离子，对比芒柄花素对照品，两者的质谱裂解碎片信息一致，化合物13确定为芒柄花素.

皂苷类化合物：化合物14，准分子离子峰为m/z871.469 2[M+HCOO]-，825.461 2[M-H]-，二级质谱中产生765.440 4[M-H-Ac]-，633.312 3[M-H-(Ac-H2O-(xyl+H2O)]-，603.389 6[M-H-(Ac-H2O)-(glu+H2O)]-，489.221 8[M-H-(Ac-H2O)-xyl-glc)]-等碎片离子，结合文献，黄芪中含有黄芪皂苷II，其m/z为871.469 1[M+HCOO]-，根据裂解碎片信息判断该化合物可能为黄芪皂苷II.化合物18，负离子模式准分子离子峰为m/z829.458 2[M+HCOO]-，783.452 9[M-H]-，对比黄芪甲苷对照品，两者的质谱裂解碎片信息一致，确定其为黄芪甲苷.

2.3 党参中的特征性化学成分的分析

基于表2，苯丙苷类化合物：化合物1，负离子模式准分子离子峰为m/z677.229 5[M-H]-，二级质谱中脱去一分子C6H10O5和H2O形成碎片离子497.166 4[M-H-C6H10O-H2O]-，再脱去一分子HCOO形成碎片离子453.176 2[M-H-C6H10O5-H2O-HCOO]-，结合相关文献，党参中含有党参苷Ⅱ，其质核比m/z为677.229 3，根据裂解碎片信息判断该化合物可能为党参苷Ⅰ.

炔苷类化合物：化合物3，负离子模式准分子离子峰为m/z441.175 7[M+HCOO]-，395.169 6[M-H]-和305.122 6[M-H-C7H6]-等峰，对比党参炔苷对照品，化合物8和对照品党参炔苷的质谱裂解碎片一致，化合物8确定为党参炔苷.

2.4 五味子中的特征性化学成分的分析

基于表2中木脂素类化合物：化合物21，负离子模式准分子离子峰为m/z415.176 2[M-H]-，二级质谱中有397.136 1[M-H-H2O]-、383.148 3[M+H-H2O-CH3]-、355.115 1[M+H-H2O-CH3-C2H4]-、312.170 1[M+H-H2O-CH2-C2H4-CH3-CO]-、283.010 3[M+H-H2O-CH2-C2H4-CH3-CO-OCH3]-、263.199 3[M+H-H2O-CH2-C2H4-CH3-CO-OCH3-H2O]-，结合相关文献，五味子中五味子醇乙的质核比m/z为415.175 7 ，根据裂解碎片信息判断该化合物可能为五味子醇乙.

2.5 麦冬中的特征性化学成分的分析

基于表2中甾体皂苷类化合物：化合物20，准分子离子峰为m/z899.465 3，有853.458 7[M-H]-、721.416 1[M-H-Xyl]-、575.358 8[M-H-Xyl-Rha]-碎片离子，麦冬皂苷D的质核比m/z为 899.464 0，根据裂解碎片信息判断该化合物可能为麦冬皂苷D.

3 结 语

本文对流动相进行筛选，考察了0.1%甲酸水溶液-乙腈、水-乙腈、0.2%甲酸水溶液-甲醇三种体系的洗脱系统.结果0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相的洗脱系统特征峰比较明显、分离效果最好.因此，选择0.1%甲酸水溶液-乙腈作为流动相进行梯度洗脱.

对于质谱条件，主要考察了待测成分在正、负离子两种模式的响应.结果显示，负离子模式能提供更多的化学成分种类信息，因此选择负离子模式进行检测.

今后将把 UPLC-Q-TOF/MS技术进一步用于对黄芪生脉饮的血清药物化学研究，为黄芪生脉饮药效物质研究奠定基础.