无创DNA阳性结果的验证分析及临床意义

奉 淼

（辽宁省葫芦岛市中心医院，辽宁 葫芦岛 125001）

无创DNA检测是临床常用的产前诊断技术，其具备无创的优势，因而临床实际开展率较高[1-2]。随着新一代DNA测序技术的不断优化与改进，其诊断准确性不断提升。但与羊膜腔穿刺相比，准确性仍存在较大的差异，在临床实际检测过程中存在较高的假阳性率，因而其临床应用价值也存在较大的争议[3-4]。本研究旨在验证分析无创产前基因检测（无创DNA）的阳性结果，并分析其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2017年1月至2019年1月在本院建档产检且行无创DNA检测显示结果阳性的80例产妇作为研究对象。所有产妇均符合无创DNA检测指征，无创DNA检测结果提示高风险后，均行羊膜腔穿刺进行确认。80例产妇中，初次妊娠者31例，再次妊娠者49例；年龄30～42岁，平均（36.14±6.02）岁；无创DNA检测时间12～20周，平均（16.08±4.15）周；检测结果：42例21-三体阳性，14例18-三体阳性，6例13-三体阳性，18例性染色体异常。

1.2 纳入与排除标准 纳入标准：符合无创DNA检测指征，自愿进行无创DNA检测；无创DNA检测结果提示染色体异常高风险；自愿进行羊膜腔穿刺产前诊断；产妇和家属均自愿参与本次研究，并签署知情同意书。排除标准：不同意实施羊膜腔穿刺者；存在羊膜腔穿刺禁忌证者；终止妊娠后失访者等。

1.3 检测方法 针对80例无创DNA检测结果阳性产妇，通过产前诊断指导进行羊膜腔穿刺，后行染色体FISH和核型分析；经B超引导定位后，采用羊水专用穿刺针经腹部穿刺，抽取15 mL羊水，均分为2份，分别进行染色体FISH和核型分析；1份羊水经离心培养后，加入秋水仙碱收获细胞，固定后制片、烤片，G显带染色分析；1份羊水采用CSP18/X/Y探针和GLP13/21探针行系统案例荧光原位杂交（fluorescent in situ hybridization，FISH）分析。

1.4 观察指标 统计羊膜腔穿刺检测诊断结果，并与无创DNA诊断结果比较，计算无创DNA诊断的准确率和假阳性率，对比确诊者染色体核型分析与无创DNA诊断结果。追踪随访1年，观察产妇妊娠结局及婴儿生长发育情况。

1.5 统计学方法 采用SPSS 20.0统计学软件对数据进行分析。计量资料采用（）表示，组间比较行t检验；计数资料采用[n（%）]表示，组间比较行χ2检验；P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 羊膜腔穿刺与无创DNA诊断结果比较 80例无创DNA阳性结果产妇行羊膜腔穿刺确诊57例存在染色体异常，13例为假阳性（28.75%），总准确率为71.25%；其中42例无创DNA提示21-三体者诊断准确率（92.54%）最高，显著高于18-三体、13-三体、性染色体异常，差异具有统计学意义（P＜0.05）；6例无创DNA提示13-三体者（33.33%）诊断准确率最低，显著低于18-三体、性染色体异常者等，差异有统计学意义（P＜0.05），其次为18-三体（78.57%）和性染色体异常（77.78%）者。见表1。

表1 无创DNA阳性患者诊断结果与羊膜腔穿刺诊断结果比较

2.2 羊膜腔穿刺确诊者染色体核型分析和无创DNA结果比较 无创DNA结果显示染色体异常风险，羊膜腔穿刺后染色体核型分析可确认胎儿的染色体异常位置与具体突变。见表2。

表2 57例羊膜腔穿刺确诊者染色体核型分析和无创DNA结果比较

2.3 妊娠结局统计 80例无创DNA阳性结果孕妇中，57例羊膜腔穿刺确诊者均终止妊娠，进行引产处理；13例经羊膜腔穿刺确认无染色体异常的产妇均继续妊娠，其中足月分娩11例，2例早产者，分别于33周胎膜早破分娩，35周胎儿宫内窘迫终止妊娠；13例胎儿出生后，均无外观异常，随访1年显示，患儿无外观异常，生长发育均正常，与产前诊断（羊膜腔穿刺）结果一致。

3 讨 论

染色体异常是新生儿先天性疾病中的高发类型，其中21-三体综合征发生率最高，此外，18-三体和13-三体等疾病也较为常见，该类疾病属于染色体非整倍体疾病。羊膜腔穿刺是产前诊断的确诊依据，诊断准确率极高，但其属于有创检查，存在较多的禁忌证，导致母婴风险较高，因而在实际应用中需慎重使用[5-7]。

无创DNA检测可通过血浆中胎儿游离DNA进行基因测序，并对测序结果进行生物信息分析，然后发现其中的染色体非整倍体，提示是否存在染色体数目增加或减少的情况。与羊膜腔穿刺相比，无创DNA检测安全、快速，但其检测准确性相对不足[8-10]。相关文献报道显示，其假阳性者占比较高，准确率为60%～80%。本研究发现，80例产妇经羊膜腔穿刺检查确诊57例存在染色体异常，假阳性率为28.75%，总准确率仅为71.25%，可知其阳性结果的准确率不理想。本研究进一步分析发现，无创DNA提示21-三体者诊断准确率最高，其次为18-三体和性染色体异常者，13-三体者诊断准确率最低，可知无创DNA对21-三体者的诊断准确性较为理想，18-三体和性染色体异常诊断准确性均不足80%，13-三体诊断准确率过低，不具有诊断价值，可见无创DNA提示21-三体者高风险者诊断价值较高，其他类型染色体异常准确性不足。本研究还发现，无创DNA结果仅提示染色体异常风险，羊膜腔穿刺后染色体核型分析可确认胎儿的染色体异常位置与具体突变，提示无创DNA检测存在明显的局限性。此外，在实际产前诊断中，无创DNA检测受限于母体染色体异常、异体输血、移植治疗等因素，这类产妇不可进行无创DNA检测，建议行羊膜腔穿刺检查。随着孕周的增加，无创DNA检测也存在下降的问题，最佳检测时间为孕15～18周，应严格把控检测时机，避免出现假阳性结果打击产妇家属的情绪，减少不必要的无创DNA检测。

综上所述，无创DNA对21-三体诊断准确性相对较高，结果阳性者存在较高的染色体异常风险，但不能将其作为确诊依据，需进一步联合其他产前诊断方式确诊。