高效液相色谱-串联质谱法测定动物源性食品中3种β-受体激动剂的残留
2021-02-27刘婧
刘 婧
1.苏州世标检测技术有限公司 江苏苏州 215168 2.苏州海关综合技术中心 江苏苏州 215168
β-Agonists是一种苯乙胺类药物，更是一种生长促进剂，常用于治疗支气管哮喘，Clenbuterol是最开始被添加于饲料中的β-受体激动剂，渐渐的Ractopamine、Salbutamol也被添加[1～3]，用该饲料喂养动物时，可以提高瘦肉产率，但是这类肉制品摄入人体后会造成严重影响，危害生命健康[4,5]。因此，为了消费者的安全，规定β-受体激动剂不得使用。
本文改进了实验方法和质谱条件，更为快速高效的检测β-Agonists残留量。
1 试验部分
1.1 仪器与试剂
1.1.1 仪器和耗材
电子天平ML204/02，梅特勒公司；
恒温水浴锅，上海博讯公司；
超纯水仪Milli-Q，美国公司;
涡旋仪，IKA公司；
离心机，湖南湘仪集团；
氮吹仪N-EVAP,美国Organomation公司;
液质联用仪6470，美国安捷伦公司。
色谱柱：Waters C18柱，100mm×2.1mm，5μm。
固相萃取柱：60mg/3mL Waters Oasis HLB、60mg/3mL Waters Oasis MCX、60mg/3mL AgelaPCX。
1.1.2 试剂
沃凯：乙酸铵、正己烷(色谱纯)。
国药：高氯酸、盐酸(优级纯)。
阿拉丁：甲酸(色谱纯)。
Fisher chemical：甲醇、乙酸乙酯(色谱纯)。
Sigma alorich：氨水(色谱纯)、β-葡萄糖醛甙霉。
1.1.3 标准物质
标准物质相关信息见表1。
表1 标准物质相关信息
1.2 标准溶液配制
标准储备溶液：准确称取上述标准物质，用甲醇溶解定容配成1 000mg/L的标准溶液，并于-20℃保存。临用时稀释成0.1mg/L的标准混合溶液。
内标储备溶液：准确称取上述同位素标准物质，用甲醇溶解定容配成1 000mg/L的标准溶液，并于-20℃保存。临用时稀释成0.1mg/L的标准混合溶液。
1.3 实验方法
酶解：称取试样5.0g→加入0.8mL乙酸铵溶液(2.0mol/L)→7.2mL超纯水→40μL β-葡萄糖醛甙霉→涡旋混匀→置于37℃恒温水浴锅中酶解16h。
提取：取出酶解样品后→冷却至室温→加入0.1mg/L内标储备混合溶液100μL 0.1mg/L标准储备混合溶液25μL→再加入5mL高氯酸溶液(1mol/L)→涡旋混匀→9 500r/min离心10min→取上清液经装有脱脂棉的漏斗过滤，滤液备用。
净化：将上述滤液采用固相萃取柱过滤洗脱，过程见表2；洗脱液氮吹干，用2mL水溶解残渣，过膜，用于液相色谱-串联质谱分析。
表2 固相萃取净化方法
1.4 高效液相色谱及质谱条件
1.4.1 色谱条件
流动相：0.1%甲酸水、0.1%甲酸乙腈。
进样量：20.0μL。
柱温：25℃。
梯度洗脱程序见表3。
表3 梯度洗脱表
1.4.2 质谱条件
电离源：ESI电喷雾方式。
扫描方式：MRM多反应监测。
电喷雾电压：3 500V。
鞘气温度：300℃。
鞘气流速：30L/min。
干燥气流速：10L/min。
干燥气温度：350℃。
监测离子：被测物质的质谱分析参数见表4。
表4 被测物质的质谱分析参数
2 结果分析讨论
2.1 前处理及检测条件的选择
2.1.1 流动相的选择
根据现有的相关标准，采用了几种不同流动相进行实验。流动相分别选用了0.1%甲酸水+0.1%甲酸乙腈、0.1甲酸水+乙腈，经过实验发现0.1%甲酸水+0.1%甲酸乙腈峰形较好。
2.1.2 固相萃取柱的选择
采用相同的步骤，分别使用3种固相萃取柱，发现MCX分离效果最好，浓度响应值较高，PCX次之，HLB不适用。
2.1.3 淋洗液的选择
采用MCX柱，进行不同的净化过程见表5。方法4试剂少、简单、分离效果较好且样品损失较少，峰响应值较高。加标0.5g/kg的样品提取色谱图见图1，各组分的MRM图见图2。
表5 MCX柱的不同净化方法
图1 加标0.5g/kg的样品提取色谱图
图2 样品各组分的MRM图
2.2 方法的线性范围
将3种β-受体激动剂，按检出限用水稀释成相应的浓度见表6；以化合物峰面积定量，绘制标准曲线，3种化合物的线性回归方程见表7。
表6 标准曲线配制表
表7 3种化合物的线性回归方程
2.3 方法回收率和精密度
向阴性样品中添加检出限的1倍、2倍、10倍3种浓度的标准混合溶液，分别测定3次，计算各个化合物的回收率和RSD，结果见表8。
表8 回收率和精密度的试验结果
3 结论
本实验建立了动物源性食品中3种β-受体激动剂的残留量的LC-MS分析方法，该方法前处理简单，重复性好，回收率高，满足检测要求。
