人乳头状瘤病毒高危亚型的表达特征及其对疫苗接种的指导意义

孙莉莉

(临沂市河东区人民医院，山东 临沂 276000)

人乳头状瘤病毒(Human papilloma virus，HPV)是一种嗜上皮性病毒，在人和动物中分布广泛，有高度的特异性，多数HPV可引起人类良性的肿瘤和疣，也可引起细胞增殖失控。目前，在已经发现的HPV中，14种类型具有高度危险性。近年来已陆续研发出了二价、四价、九价HPV疫苗，为HPV的有效预防提供了有力的支持。本研究采用实时荧光定量PCR技术(RT-PCR)开展14型高危HPV检测，了解门诊病例HPV带毒表达，为有效防治HPV提供依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 2017年1月—2019年12月共采集来本院就诊的临床病例标本2 505份，均为女性，年龄16～72岁，平均(38.16±7.54)岁。

1.2方法 高危HPV核酸检测试剂盒(广东省潮州凯普生物化学有限公司)，LineGene 9660 RT-PCR仪等，标本的处理与提取、PCR 扩增及质量控制按照试剂说明书进行。采集就诊者宫颈脱落细胞样本，利用RT-PCR对14种高危型HPV DNA定性检测，对其中16、18分型鉴定，另外12种高危型HPV(31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68)用FAM荧光检测通道进行定性检测。

1.3指标评价 利用RT-PCR仪配套软件进行自动分析，得到各样本在FAM、HEX、ROX荧光检测通道和内对照β-globin在Cy5荧光检测通道的Ct值。Ct值40时，其它荧光检测通道Ct值显示为Undet，结果判断为阴性；其它荧光检测通道Ct值≤40时判断为阳性；40

2 结果

2.1HPV检出情况 2505份标本中检出HPV阳性人428例，阳性率为17.09%。其中，三检测通道共HPV16型121株，18型39株，其他12型326株，总表达数486，存在多型株复合感染。根据人群年龄特征，将人群分为5组，各年龄组检出型株组合情况见表1。

表1 2505例宫颈脱落细胞14种高危HPV检测结果表达分布(n)

2.2各年龄组病例阳性表达率比较 各年龄组HPV总阳性率比较有统计学意义(χ2=10.83，P=0.029)，以≤25岁年龄组阳性率最高，但与≥56岁组比较尚无显著性(χ2=1.97，P=0.161)。

2.3各型间阳性率比较 因其它12型未分型，只做 HPV16、HPV18型间统计学比较，HPV16阳性率为4.83%(121/2505)，HPV18阳性率为1.56%(39/2505)。二者比较有统计学意义(χ2=42.36，P<0.01)。

2.4单、多重感染情况推断 根据表中数据，在不考虑其他12型高危亚型的感染组合情况下，单种亚型感染的确定性概率为4.03%(101/2505)，感染两种亚型以上的确定性概率为2.24%(56/2505)。二者比较有统计学意义(χ2=12.73，P<0.01)。

3 讨论

临床上开展妇科宫颈脱落细胞高危HPV检测对宫颈细胞异常及宫颈癌的病理学诊断具有辅助作用，同时通过对高危HPV在人群表达特征的分析，对指导接种疫苗也具有积极的指导意义。临床上通过RT-PCR技术可对HPV及不同亚型进行有效的定性检测，该技术是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法，该法在HPV的检测上有着广泛的应用。

本实验室对14种HPV高危亚型进行定性检测，并对其中HPV16、HPV18两种亚型进行分类，在FAM通道中，将其余12种高危亚型定性检测。2505份标本中，阳性标本428例，14种HPV亚型人群总表达率为17.09%；在不同年龄组中，25岁以下年龄组感染率明显高于其他年龄组，且存在一定比例的多重感染。本资料出现了16、18型与其他12种亚型组合多重感染，但受检测方法的限制无法进行多重感染比例的判定。

来自世界各国宫颈癌组织标本的研究发现，HPV16和18型感染率最高，也是主要致病亚型[1]。针对高危型HPV的研究已充分证实感染与宫颈癌前病变及宫颈癌发病率正相关性，其中HPV16感染类型检出率最高，可作为临床诊断、预后效果评估的指标[1]，该型是最重要的导致高级别宫颈上皮病变的危险因素[2]。近年来，多种HPV疫苗在国内外陆续上市，在全球推广使用并取得显著效果，但仍存在一些不足，而且并无治疗性HPV疫苗上市[3]。目前已上市的HPV预防性疫苗按照亚型成分包括二价疫苗(16，18)、四价疫苗(16，18，6，11)、九价疫苗(16，18，6，11，31，33，45，52，58),其中HPV6、11因临床上的低度危险性因而未列入高危亚型。

目前，在中国HPV疫苗接种覆盖率仍极低，主要原因可能与民众对疫苗种类的选择、接种的最佳年龄及疫苗接种程序与价格等多种因素存在困惑相关。但实践证明,通过HPV疫苗接种和筛查可以大幅度降低宫颈癌的发病率和死亡率。与筛查相比，HPV疫苗不仅可以提供更长期的保护作用，而且最具有成本效益[4]。有调查表明，高中生HPV感染相关知信行总得分处于中等偏下水平，可以知信行理论为指导的健康教育干预方法能有效提高高中生的HPV感染知信行。有报道HPV知晓率及HPV疫苗知晓率较高，但对HPV疫苗相关知识了解并不深入；HPV疫苗接种意愿高，但接种率低，主要原因为疫苗费用昂贵[5]。因此，需加强对相关知识的健康教育，同时可倡导政府制定相关优惠政策，使低龄女孩及其家长了解宫颈癌及HPV疫苗相关知识。在疫苗选择上，可以综合考虑价格、规避重点致病风险的原则，使低龄女孩尽早接种HPV疫苗。