非小细胞肺癌患者外周血单个核细胞中CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平及其对化疗疗效及预后影响

孙 璐， 刘晶晶, 贾敬好, 王 巍, 姚学敏, 么伟楠

唐山市人民医院1.肿瘤内科；2.肿瘤放化科，河北 唐山 063000

肺癌是临床常见的严重恶性肿瘤，是导致我国城市人口死亡的首位恶性肿瘤[1]。有研究报道，肺癌患者中约95%为非小细胞肺癌，一般情况下非小细胞肺癌患者无明显临床症状，随着患者病情进展可伴随出现血痰、胸腹胀痛、咳嗽、低热、体质量减轻、疲乏、呼吸困难、食欲减退、咯血等临床症状，在出现严重症状后已发展至中晚期，5年存活率较低[2]。现阶段临床治疗多采用化疗方案对非小细胞肺癌患者进行治疗，治疗后多选择影像学检查并依照实体瘤疗效评价标准评估临床疗效[3]。寻找可评估非小细胞肺癌患者预后质量和化疗方案治疗效果的生物标志物具有重要意义。有研究报道，免疫系统在肿瘤的发生和发展过程中起到重要作用，通过评估患者免疫细胞的变化可有效反映非小细胞肺癌患者治疗的临床疗效[4]。本研究分析非小细胞肺癌患者外周血单个核细胞中CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平，探讨其与化疗疗效和预后质量的相关性。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取自2017年1月至2018年4月唐山市人民医院收治的60例非小细胞肺癌患者为观察组，并根据患者治疗后临床疗效分为缓解组(n=33)与未缓解组(n=27)；选取同期进行体检的50例健康者为健康组。非小细胞肺癌患者纳入标准：(1)既往未接受其他抗肿瘤方案治疗；(2)经病理学检查确诊为非小细胞肺癌；(3)沟通和理解力正常，可配合本研究治疗；(4)无法或放弃接受手术治疗。非小细胞肺癌患者排除标准：(1)临床资料不全；(2)由于不良反应或其他因素退出本研究；(3)未遵医嘱用药；(4)病理诊断不明确；(5)入院时合并自身免疫性疾病或全身感染性疾病；(6)失访或主动申请退出本研究。观察组患者男性49例，女性11例；年龄49～75岁，平均年龄(63.19±5.38)岁；吸烟43例。健康组患者男性42例，女性8例；年龄45～76岁，平均年龄(64.87±7.12)岁；吸烟35例。健康组与观察组性别、年龄、吸烟情况比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。缓解组患者男性27例，女性6例；年龄49～74岁，平均年龄(63.22±5.35)岁；TNM分期Ⅰ期10例，Ⅱ期13例，Ⅲ期8例，Ⅳ期2例；局限期15例,广泛期18例。未缓解组患者男性22例，女性5例；年龄49～75岁，平均年龄(63.11±5.43)岁；TNM分期Ⅰ期8例，Ⅱ期11例，Ⅲ期7例，Ⅳ期1例；局限期13例,广泛期14例。缓解组与未缓解组患者性别、年龄、肿瘤分期等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准，研究对象均签署知情同意书。

1.2 治疗方法 非小细胞肺癌患者均采用紫杉醇+顺铂化疗方案进行干预治疗。化疗第1天给予紫杉醇135～175 mg/m2+500 ml葡萄糖静脉滴注；给予70～80 mg/m2顺铂+3 000 ml生理盐水静脉分3 d滴注。1个月为1疗程，持续性干预治疗2个疗程。

1.3 观察指标 观察组分别于治疗前、后采用流式细胞术法检测外周血单个核细胞中CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平；健康组体检当天采用流式细胞术法检测上述指标。抗体均购买自美国BD公司，严格遵照试剂盒说明书和流式细胞仪操作规程进行检测。治疗结束后，对观察组患者临床疗效进行评估。完全缓解：肿瘤病灶完全消失，且维持4周以上；部分缓解：肿瘤病灶区缩小50%以上，且维持4周以上；疾病稳定：肿瘤病灶为达到完全缓解或部分缓解标准，且非目标病灶无进展；疾病进展：肿瘤病灶增加或出现新的病灶。其中，完全缓解和部分缓解定义为缓解；疾病稳定和疾病进展定义为未缓解。测定观察组患者CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平，以CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞在CD4+T细胞中的百分比表示[5-6]，分析其对患者预后的影响。对患者随访并统计患者存活情况，以观察组患者CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平均值为截断值[7]，分析不同CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞表达水平与患者存活率的关系。

2 结果

2.1 健康组与观察组治疗前CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平比较 观察组治疗前CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平均高于健康组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 健康组与观察组治疗前CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平比较

2.2 不同临床疗效非小细胞肺癌患者CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平比较 未缓解组患者CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平明显高于缓解组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 不同临床疗效患者CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平

2.3 CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平对临床疗效影响 CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平是影响非小细胞肺癌患者临床疗效的独立危险因素(P<0.05)。见表3。

表3 CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平对临床疗效影响

2.4 不同CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平患者预后情况 绘制对数生存曲线显示，CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞高表达患者存活率低于低表达患者，差异有统计学意义(P<0.05)。见图1。

图1 非小细胞肺癌患者存活曲线

3 讨论

恶性肿瘤患者体内免疫系统多处于异常状态，导致肿瘤出现浸润、生长和转移[8]。有研究报道，我国非小细胞肺癌患者发病率较高，严重威胁患者生命安全[9]。采用化疗药物治疗干预后可有效清除和杀伤肿瘤细胞，但因化疗药物缺乏特异性，常导致正常细胞也受到损伤[10]。肿瘤的发生、发展是肿瘤细胞逃避免疫系统监控的结果，免疫系统、肿瘤抗原是影响肿瘤逃避的重要机制[11]。有研究报道，肿瘤患者体内免疫功能多处于抑制状态，检测患者体内免疫状态是评估患者预后质量和病情的重要指标和方案[12]。

细胞性免疫监视功能和免疫应答在肿瘤相关的监控和消灭过程中占重要主导地位[13]。T细胞功能与特异性细胞免疫密切相关，自然杀伤细胞、非特异性细胞免疫、巨噬细胞、单核细胞等均起到重要作用[14]。有研究报道，自然杀伤细胞和T细胞亚群是评估体内非特异性和特异性细胞免疫的关键免疫指标，临床中已广泛应用于肿瘤的预后判断和疗效评价[15]。肿瘤免疫过程中，细胞免疫起到重要主导地位，CD8+T细胞属于负向调节的抑制性T淋巴细胞，可介导靶细胞凋亡和细胞裂解，特异性杀伤肿瘤细胞[16]。有研究报道，肿瘤患者外周血中CD8+T细胞比例异常升高，在外周血中CD4+T细胞、CD3+T细胞、CD4+T细胞/CD8+T细胞及自然杀伤细胞比例均呈一定程度下降[17]。肿瘤细胞可大量合成并分泌免疫抑制因子，降低CD4抗原量，抑制淋巴细胞增殖分化，CD8+细胞反应性增高，并进一步降低CD4+T细胞数量，导致CD4+/CD8+T细胞比例下降。此外，随着肿瘤患者病情进展，其体内合成和分泌的抑制性因子量显著增加，诱导CD8+T细胞水平增高并阻断CD4+T细胞产生。调节性T细胞是体内重要的高异质性细胞，可合成并分泌不同可溶性因子，起到介导免疫抑制作用。一般情况下，肿瘤患者肿瘤局部病灶和外周血中调节性T细胞水平多呈现明显的异常升高状态。研究发现，肿瘤患者不良预后和肿瘤高负荷与调节性T细胞异常升高密切相关，相较于早期浸润性乳腺癌，晚期患者体内调节性T细胞水平明显升高，并可能导致患者出现不良预后[18]。

本研究结果显示，观察组治疗前CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平均高于健康组；未缓解组患者CD84+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平明显高于缓解组，差异有统计学意义(P<0.05)。进一步分析发现，CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平是影响非小细胞肺癌患者临床疗效的独立危险因素。这说明随着患者CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平增高，体内免疫状态可能呈现显著的受抑制状态，患者体内免疫抗肿瘤效果明显减弱，导致临床疗效和预后较差。本研究也存在一定不足，临床样本量较少，且并未对患者进行长期随访追踪，有待后续深入研究探讨。

综上所述，非小细胞肺癌患者CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平较健康者明显增高，CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平是影响患者临床疗效的独立危险因素。