35%三环唑·戊唑醇悬浮剂分析方法研究

宋怀挺， 侯 影， 余德勉， 王陈杰， 张常庆

(上海悦联生物科技有限公司，上海 201215)

关键字：三环唑；戊唑醇；高效液相色谱；分析

三环唑是防治稻瘟病专用杀菌剂属于噻唑类。杀菌作用机理主要是抑制附着孢黑色素的形成，从而抑制孢子萌发和附着孢形成，阻止病菌侵人和减少稻瘟病菌孢子的产生。具有较强的内吸性的保护性杀菌剂，能迅速被水稻各部位吸收，持效期长，药效稳定，用量低并且抗雨水冲刷。

戊唑醇属于三唑类杀菌剂，是硫醇脱甲基抑制剂，是用于重要经济作物的种子处理或叶面喷洒的高效内吸性杀菌剂。可有效的防治禾谷类作物的多种锈病、白粉病、网斑病、根腐病、赤霉病、黑穗病及种传轮斑病、茶树茶饼病，香蕉叶斑病等。

三环唑和戊唑醇的单剂或其他复配制剂的分析方法已有国标和其他报道[1-8]，但35%三环唑·戊唑醇悬浮剂复配制剂的分析方法还未见报道。本文采用反相高效液相色谱法，采用C18不锈钢柱和紫外可变波长检测器，对35%三环唑·戊唑醇悬浮剂(17.5%+17.5%)中有效成分三环唑和戊唑醇同柱分析和定量，此方法快速、简便、准确、灵敏度高、重现性好的特点，适用于产品质量的检测和分析。

1 材料仪器

1.1 样品和试剂 甲醇：色谱纯；水：二次重蒸；三环唑标样：已知含量≥98.0%；戊唑醇标样：已知含量≥98.0%；流动相：甲醇+水=80+20(V/V)，流动相经0.45um孔径的滤膜，并在超声波浴槽中脱气10min。

1.2 仪器 高效液相色谱仪：具紫外可变波长检测器；色谱数据处理机；色谱柱：Φ4.6mm×150mm不锈钢柱，内装CAPCELL PAK C18/5μm为填充料的不锈钢柱。

1.3 高效液相色谱操作条件 流量：1.0ml/min；柱温：室温(温差变化≤2℃)；检测波长：220nm；进样体积：10μL；保留时间：三环唑约4.0min，戊唑醇约9.6min。

上述操作参数是典型的，可根据仪器的特点，对给定的操作参数做适当调整，以期获得最佳效果，典型的三环唑(戊唑醇)高效液相色谱图(图1)。

图1 35%三环唑·戊唑醇悬浮剂高效液相色谱图

2 实验方法

2.1 标样溶液的配置 称取三环唑和戊唑醇标样各0.05g(精确到0.000 2g)，置于50mL容量瓶中，用甲醇溶解，超声冷却后，用甲醇定容，摇匀；再用移液管准确移取5mL至100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。

2.2 试样溶液的配置 称取含有三环唑或戊唑醇0.05g(精确到0.000 2g)试样，置于50mL容量瓶中，用甲醇溶解，超声冷却后，加甲醇定容，摇匀，再用移液管准确移取5～100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，备用。

2.3 试样的测定 在上述操作条件下，待仪器稳定后，连续注入数针标样溶液，计算各针相对响应值的重复性，待相邻2针的响应值变化<1.0%后，按照标样溶液，试样溶液，试样溶液，标样溶液的顺序进行测定。

2.4 试样中有效含量的计算 将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中的峰面积分别进行平均，试样中三环唑(戊唑醇)的质量分数X1(%)按式(1)计算：

(1)

式中：

A1—标样溶液中三环唑(戊唑醇)峰面积的平均值；

A2—试样溶液中三环唑(戊唑醇)峰面积的平均值；

m1—三环唑(戊唑醇)标样的质量，g;

m2—三环唑(戊唑醇)试样的质量，g；

P—三环唑(戊唑醇)标样的质量百分数，%。

3 结果与讨论

3.1 流动相和波长选择 首先对35%三环唑·戊唑醇悬浮剂中的有效成分三环唑、戊唑醇在DAD条件下做紫外吸收扫描(图2～3)，由(图2～3)并结合分析中助剂杂质干扰因素(图4)，选定检测波长为220nm，在甲醇、水中调节比例，将三环唑和戊唑醇进行有效分离，同事避免助剂和杂质干扰，最后确定为甲醇：水=80：20作为流动相，在此条件下对35%三环唑·戊唑醇悬浮剂中三环唑和戊唑醇纯度扫描。三环唑、戊唑醇的峰纯度均为1，且有效成分出峰位置无明显物质干扰，符合定量分析要求。

图2 35%三环唑·戊唑醇悬浮剂中三环唑HPLC-DAD特异性扫描图

图3 35%三环唑戊唑醇中戊唑醇HPLC-DAD特异性扫描

图4 35%三环唑·戊唑醇悬浮剂制剂空白图

3.2 分析方法的线性相关性实验 准确配制一系列不同浓度的三环唑和戊唑醇标样溶液，然后分别按2.3测定步骤进行分析检测，分别以三环唑和戊唑醇的质量浓度为横坐标，三环唑和戊唑醇峰面积为纵坐标，计算一元线性回归方程和作线性相关图。线性相关性测定试验数据(表1)。

表1 三环唑和戊唑醇线性相关数据表

三环唑一元线性回归方程：Y=165X-0.059，相关系数：R2=0.9998。戊唑醇一元线性回归方程：Y=50.041X+0.0089，相关系数：R2=0.9999。

3.3 分析方法的精密度实验 任取一批35%三环唑·戊唑醇悬浮剂，按本标准中2.3测定步骤连续测定三环唑、戊唑醇含量10次，分别计算其标准偏差、变异系数。精密度测定试验数据(表2)。

表2 三环唑、戊唑醇精密度测定试验数据表

从三环唑、戊唑醇精密度测定数据表中可以看出，三环唑的标准偏差0.027，变异系数为0.15%。戊唑醇的标准偏差为0.035，变异系数为0.20%。

3.4 分析方法的准确度实验 选取已知含量的35%三环唑·戊唑醇悬浮剂样品，准确称取5份，并分别加入定量的三环唑、戊唑醇标样，然后按本标准中2.3测定步骤测定三环唑、戊唑醇标样的加入量，同理论值进行比较，计算回收率。回收率测定试验数据(表3)。

表3 回收率测定试验数据表

按照本标准规定的方法进行检测试验三环唑、戊唑醇的回收率分别为：99.07%～100.79%、98.57%～100.57%之间，三环唑和戊唑醇的平均回收率分别为100.11%和99.53%。

4 结论

结果表明，本文中建立的同柱分析35%三环唑·戊唑醇悬浮剂中三环唑和戊唑醇的方法在测定该制剂中的三环唑和戊唑醇含量的准确度和精密度较高，线性关系良好。由于一次即可测定三环唑和戊唑醇的含量，使得该方法快速、简便，适合于产品的质量检测和控制。