不同配比赤芍-桃仁乙醇提取物对急性血瘀模型大鼠血液流变学的影响*

勾楠，王星晨，高建义，李勇枝，井娟，刘雪英，王庆伟

(1.陕西中医药大学药学院，咸阳 712046；2.空军军医大学第二附属医院药剂科，西安 710038；3.中国航天员科研训练中心，北京 100094；4.空军军医大学药学系药物化学教研室，西安 710000)

血瘀证是中医临床常见的一种症候，是体内气血运行不通畅所导致的淤积凝滞，临床常表现为疼痛、瘀肿及妇女闭经[1]。赤芍是毛茛科植物芍药(PaeonialactifloraPall.)的干燥根，具有清热凉血、散瘀止痛的功能[2]。桃仁为蔷薇科植物桃[Prunuspersica(L.)Batsch]的干燥成熟种子，具有活血祛瘀、润肠通便的功效[3]。研究发现，血瘀证患者的血液流变学和凝血酶原出现异常，而药物可以改善血液流变学的相关指标[4]。现代药理研究已经证明，赤芍具有抑制血小板聚集的作用[5]，桃仁可以改善血流动力学[6]，赤芍-桃仁配伍是临床常用的活血化瘀药对，具有活血调经、活血止痛的功效，目前已有临床制剂赤芍桃仁颗粒[7]。虽然很多方剂里面存在这两味药材，但是对它们配伍后活血化瘀的功效笔者未见相关研究。笔者在本实验选取中医活血化瘀方中3种常用比例(1：1，1：2，2：1)[8-10]以及赤芍、桃仁单味药进行研究，考察急性血瘀模型大鼠血液流变学指标，为研究方剂的配伍规律提供实验依据，进一步验证不同比例配伍赤芍-桃仁乙醇提取物对急性血瘀模型大鼠血液流变学的影响。

1 材料与方法

1.1实验动物 清洁级健康雄性SD大鼠64只，雄性，体质量(200±20) g，空军军医大学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号：SCXK(军)2015-006，饲养于空军军医大学药化教研室，大鼠自由饮水，室温25 ℃，相对湿度75%。

1.2实验药材 赤芍、桃仁药材(产地陕西)，均购于西安天晟中药饮片公司，经陕西中医药大学白吉庆副教授鉴定，赤芍为毛茛科植物芍药(PaeonialactifloraPall.)的干燥根，桃仁为蔷薇科植物山桃[Prunusdavidiana(Carr.)Franch.]的干燥成熟种子。

1.3仪器 SA-9000自动血流变检测仪(北京赛科希德科技有限公司)；高速冷冻离心机(型号：KDC-160HR)；电子分析天平(德国Sartorius公司，感量：0.1 mg)。

1.4试剂 盐酸肾上腺素注射液(远大医药有限公司，批号：H42021700)；氯化钠注射液(天津大茂有限公司，批号：00141012)；二水合柠檬酸三钠(江苏康捷医疗器械有限公司，批号：20150049)；戊巴比妥钠(北京BioTeke公司，批号：PR6502)；复方丹参滴丸(天士力医药集团股份有限公司，批号：1807154，规格：每丸27 mg)。

1.5药材提取 分别按照一定质量比例(1：0，0：1，1：1，1：2，2：1)称取赤芍和桃仁药材共5份，每份200 g，用7倍量75%乙醇加热回流提取3次，每次1.5 h，自然冷却，分离提取液，合并3次醇提取液，45 ℃减压回收乙醇，浓缩至每克提取物相当于原药材1.862，1.074，1.023，1.044，1.210 g，置4 ℃冰箱冷藏备用。

1.6血瘀模型制备 SD雄性大鼠颈部皮下注射盐酸肾上腺素0.8 mg·kg-1，共2次，间隔时间为4 h。第1次颈部皮下注射盐酸肾上腺素0.8 mg·kg-1后2 h，将大鼠放置冰水浴中游泳5 min，制备急性血瘀模型大鼠。第2次颈部皮下注射盐酸肾上腺素后，禁食，自由饮水，12 h后腹主动脉取血测血流变各指标[11]。

1.7分组及给药 SD雄性大鼠64只，采用随机数字表法将大鼠分为8组，每组8只，分别为空白对照组、丹参滴丸组、模型对照组、赤芍-桃仁1：0，0：1，1：1，1：2，2：1组。根据《中华人民共和国药典》2015年版中药材用量[12]，赤芍6 ～12 g和桃仁4.5 ～9 g，选取临床3倍量15 g进行给药。所有给药组均统一配制成溶液，每次5 mL·kg-1，空白对照组和模型对照组每日给予等剂量0.9%氯化钠溶液，丹参滴丸组给予大鼠丹参滴丸0.073 g·kg-1[13]，灌胃给药，每日1次，连续14 d，第13天给药后除空白对照组外，各组大鼠按照相应的造模方法复制急性血瘀模型。大鼠给药剂量按体表面积换算系数计算[14]。

1.8血液流变学指标检测 各组大鼠于第14天给药后30 min，腹腔注射戊巴比妥钠( 40 mg·kg-1)麻醉，腹主动脉取血5 mL，置于肝素钠采血管中；另取3 mL血液于柠檬酸三钠采血管中，采用全自动血液流变分析仪、全自动血凝仪分别检测血液流变学[全血黏度(WBV)(1，5，50，100，200 s-1切变率)、血浆黏度(PV)、红细胞压积(HCT)、红细胞沉降率(ESR)]及凝血功能指标[凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)]。

2 结果

2.1体征观察 空白对照组大鼠毛发浓密顺滑，行动敏捷，眼睛瞳孔正常，呈鲜红色，嘴唇及鼻子红润。模型对照组大鼠造模成功后，行动较迟缓，毛发膨胀稀疏，目光呆滞，鼻唇发绀，轻微震颤，心跳加快，与文献报道一致[15]。赤芍-桃仁各药对组与模型对照组比较，行动比较敏捷，心跳较为缓慢。

2.2赤芍-桃仁不同配伍比例对模型大鼠血液流变学影响 与空白对照组比较，模型对照组大鼠WBV、PV均明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)，证明造模成功。与模型对照组比较，丹参滴丸组WBV(1，5，50，100，200 s-1)均有显著降低。与模型对照组比较，赤芍-桃仁(1：1)组WBV升高(1，5，50，100，200 s-1)，PV均显著降低，而其余组对PV无影响。与模型对照组比较，赤芍-桃仁(1：0)、赤芍-桃仁(0：1)、赤芍-桃仁(1：1)、赤芍-桃仁(1：2)、赤芍-桃仁(2：1)对于升高的WBV(1 s-1)均有明显降低作用。桃仁、赤芍-桃仁(2：1)组对于50 s-1切变率下的WBV有显著降低作用。赤芍-桃仁(1：1)、赤芍-桃仁(1：2)组对于升高的WBV(100 ，200 s-1)有明显降低作用。结果见表1。

与空白对照组比较，模型对照组HCT、ESR显著升高，表明造模成功。与模型对照组比较，丹参滴丸组只可显著降低HCT，赤芍-桃仁(1：1)组对两个指标均有明显降低作用；赤芍-桃仁(1：0)、赤芍-桃仁(0：1)对两个指标没有明显影响。赤芍-桃仁(1：1)较赤芍-桃仁(1：2)、赤芍-桃仁(2：1)组能显著降低ESR。见表2。

2.3不同配比赤芍-桃仁对急性血瘀大鼠凝血指标的影响 与空白对照组比较，模型对照组大鼠PT、TT均明显降低，FIB值显著升高，表明造模成功。与模型对照组比较，丹参滴丸组PT、TT、FIB均发生显著变化。赤芍-桃仁(1：0)、赤芍-桃仁(0：1)、赤芍-桃仁(1：1)、赤芍-桃仁(1：2)、赤芍-桃仁(2：1)组仅能显著提高TT值，赤芍-桃仁(1：1)能显著延长急性血瘀大鼠的PT值，其余组对PT无明显延长作用。赤芍-桃仁(1：1)、赤芍-桃仁(1：2)能降低模型FIB值，其余组无显著降低作用。结果见表3。

3 讨论

赤芍具有散瘀镇痛的功效，桃仁有较强的活血作用，有“破淤行血之峻药”的称谓[16]。赤芍-桃仁是中药复方中常见配伍[7，17-19]，通过计算机辅助统计王清任《医林改错》，发现在原著活血化瘀33首方剂中，赤芍-桃仁配伍为9首[20]；对活血化瘀方进行组方规律分析，发现赤芍-桃仁仅次于桃仁-红花，是应用较多的药对[21]。临床常用方剂如血府逐瘀汤、补阳还五汤、桂枝茯苓丸，通窍活络汤中均含有赤芍-桃仁配伍药对。桃芍醒脑胶囊方药研究结果显示具有活血通络的疗效[22]。通过分析临床处方，发现赤芍-桃仁配伍也可以治疗干燥综合征[23]。笔者以现代医学血液流变学指标，对赤芍-桃仁配伍的活血化瘀作用进行研究，考察两者之间是否存在协同增效作用。

血液流变学是对血液物理指标的相关检测，研究血液中相关成分的流动性特性[24]。血液流变特性的变化与心、脑血管疾病有直接相关性[25]。中医认为“久病血瘀”“ 久病入络为血瘀”。血瘀证发生时常表现为血脉不畅，血瘀气滞。血液流变学的改变与中医血瘀证理论“脉不通则血不流”的理念相似，血瘀后血流变学会发生异常，常表现为血液“黏”“聚”等特点[26]。

WBV的高切变率对红细胞影响最大，高切变率越高，聚集速度越快，使血流速度减缓，导致血液黏度升高[27]。PV的增高会直接造成血液的凝固性增加，两者同时增高会导致血栓的形成[28]。本研究表明，赤芍-桃仁不同比例配伍能够有效降低急性血瘀大鼠WBV及PV，从而降低红细胞聚集。与赤芍-桃仁(1：0)、赤芍-桃仁(0：1)组比较，赤芍-桃仁(1：1)组对WBV和PV的降低效果更显著。HCT是红细胞占血液的容积比，HCT增加时WBV和PV都可能增加。实验结果显示，赤芍-桃仁(1：1)对HCT的降低效果尤为显著，但是其余组差异无统计学意义，说明对容积比占有值几乎无影响。赤芍-桃仁(1：2)组，对高、中切变率下的WBV降低效果好，但对HCT影响不大。ESR代表红细胞的沉淀快慢，本实验中，赤芍-桃仁(1：0)、(0：1)组对大鼠的ESR影响不大，其余不同比例配伍组对ESR有降低作用，说明配伍组能够改变红细胞的沉淀率。PT、TT、FIB是评价凝血功能的指标[29]。PT反映外源性凝血系统状况，PT缩短见于血液高凝状态和血栓性疾病；TT是反映纤维蛋白原转化为纤维蛋白的时间，是内外凝血系统共同调节的途径。本实验模型对照组与空白对照组比较，血浆PT、TT明显缩短，FIB明显升高，说明模型对照组大鼠凝血出现障碍。赤芍-桃仁(1：0)、赤芍-桃仁(0：1)组对PT都没有显著影响，其余配伍组对TT升高作用显著，对FIB降低较为明显，说明可以通过内、外源凝血途径共同调节凝血系统。

表1 不同配比赤芍-桃仁对急性血瘀大鼠全血黏度的影响

Tab.1 Effects of different ratios of Radix Paeoniae Rubra and Peach Kernel on whole blood viscosity in rats with acute blood stasis

表1 不同配比赤芍-桃仁对急性血瘀大鼠全血黏度的影响

组别剂量/(g·kg-1)WBV1 s-15 s-150 s-1100 s-1200 s-1PV空白对照组—38.07±2.1014.67±0.106.49±0.305.63±0.205.07±0.111.19±0.01模型对照组—50.43±4.21①17.80±2.43②8.27±0.82①7.13±0.69①6.32±0.57①1.32±0.1②丹参滴丸组0.07342.10±2.03③15.58±1.05④6.92±0.53④5.62±0.13④5.34±0.36④1.25±0.02赤芍-桃仁 10组0.8442.28±1.15③15.75±0.516.96±0.616.21±0.115.55±0.40③1.25±0.08 01组1.4543.83±1.01④16.12±0.136.86±0.27④5.58±0.20③5.48±0.171.24±0.04 11组1.5238.11±1.12③14.69±0.89①6.44±0.55③5.26±0.23③4.95±0.31③1.22±0.02④ 12组1.4941.39±0.63②15.77±1.017.07±0.216.11±0.18④5.53±0.25④1.27±0.02 21组1.2945.41±2.11④16.79±1.217.42±0.13④6.49±0.24①5.86±0.281.29±0.03

①与空白对照组比较，P<0.01；②与空白对照组比较，P<0.05；③与模型对照组比较，P<0.01；④与模型对照组比较，P<0.05。

①Compared with blank control group，P<0.01；②Compared with blank control group，P<0.05；③ Compared with model control group，P<0.01；④Compared with model control group，P<0.05.

表2 不同配比赤芍-桃仁对急性血瘀大鼠血流变指标影响

表3 不同配比赤芍-桃仁对急性血瘀大鼠凝血指标的影响

本研究发现，赤芍-桃仁不同比例配伍能够降低急性血瘀模型大鼠的WBV、PV、HCT、ESR和FIB，能够延长TT。说明赤芍-桃仁配伍可以有效改善血流变学的异常，与单味赤芍、桃仁组比较，赤芍-桃仁1：1配伍显著性改变血液流变学参数，两者可能产生协同增效作用，血瘀证患者血液均有“浓、黏、凝、聚”的改变，因此临床将凝血指标、血液流变学指标作为血瘀证实验室诊断标准[30]。本实验发现，赤芍-桃仁配伍比例为1∶1时对急性血瘀大鼠活血效果较好，通过赤芍-桃仁的协同作用改善了“浓、黏、凝、聚”的血瘀状态。

研究结果从药效学的角度初步揭示二者相须配伍的意义，后续有必要从药动学和效应物质基础的角度，进行更深入和广泛的探讨和研究。