HPLC法对不同来源北苍术中苍术素的含量测定

孙辑凯，张梅娟，张宏莲，李宏铃，董 巍

（1齐齐哈尔医学院药学院，黑龙江齐齐哈尔161006；2齐齐哈尔大学生命科学院，黑龙江齐齐哈尔161000）

2015 年版《中国药典》规定，苍术的来源有2 种，分别是茅苍术（Atractylodes lancea(Thunb.) DC）和北苍术（Atractylodes chinensis(DC.)Koidz.）[1]。茅苍术主要产于江苏、湖北、河南等省[2-3]；北苍术主要产自内蒙古自治区、山西、黑龙江、吉林等省[4]。研究表明苍术的主要化学成分为聚乙烯炔和倍半萜类化合物，具有抗癌、抑菌、抗病毒等药理作用[5]，临床上常用于病毒性疾病的治疗[6-10]。北苍术的原植物分布区域广泛，各地生境不尽相同，影响苍术中药材的质量。本研究建立了HPLC 法，测定不同来源北苍术中苍术素的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器Waters 2695型液相色谱仪（沃特世科技有限公司），MDF-492 型超低温冰箱（日本三洋公司），DFT200C 型高速多功能粉碎机（永康市敏业工贸有限公司），CPX3800H-C型超声波清洗机（日本BRANSONIC 公司），DHG-9240A 型恒温鼓风干燥箱（常州市国旺仪器制造有限公司），PALL 水纯化系统（美国Pall Corporation 公司），ML203T/02型十万级电子天平（瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司），MDF-492 型超低温冰箱（日本三洋公司）。

1.2 试剂甲醇（色谱纯，德国默克公司，批号：603-001-00-x），95%乙醇（天津福晨化学试剂厂，批号：20171110），石油醚（沸程60～90℃，天津福晨化学试剂厂，批号：20171201），苍术素标准品（中国食品药品检定研究院，批号：111924-201806）。

1.3 药材市售饮片的产地分别源于内蒙古自治区阿荣旗、赤峰、莫力达瓦达斡尔族自治旗（简称“莫旗”）、扎兰屯；3 年生、4 年生、5 年生栽培北苍术根茎均采自于蒙古自治区莫力达瓦旗多热博热其勒村（简称“多热”），依次标记为1～7号。经齐齐哈尔医学院药学院王晓丽副教授鉴定为北苍术[Atractylodes chinensis(DC.)Koidz.]的根茎。

2 方法与结果

2.1 溶液制备方法

2.1.1 对照品溶液 称取苍术素标准品适量，甲醇溶解，超声10 min，制得20 μg/mL 的溶液，经0.45 μm 的微孔滤膜滤过，备用。

2.1.2 供试品溶液 取“1.3”项下不同来源的北苍术饮片，粉碎后过三号筛，分别称取0.2 g，置于具塞锥形瓶中，加入甲醇50 mL，用封口膜密封后，称定重量，超声提取（功率250 W，频率40 KHz）1 h，冷却至室温后，称定重量，用甲醇补足缺失的重量，用0.45 μm过滤膜过滤，取续滤液，备用。

2.2 色谱条件Diamonsil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μL），流动相甲醇-水（79∶21）等度洗脱，流速1.0 mL/min，检测波长340 nm，进样量20 μL。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察 精密称取对照品60 mg，甲醇定容至10 mL，混匀，移取1 mL 至10 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，标记为1号。从1号中吸取5 mL溶液，用甲醇定容至刻度，标记为2号。以此类推，得3、4、5、6 号溶液。按“2.1”项色谱条件下进行测定。以峰面积为纵坐标（Y），对照品浓度为横坐标（X）进行线性回归，得回归方程为Y= 271 5.1X-9.669 4（r=0.999 8），对照品浓度在0.0187 5～0.600 0 mg/mL 范围内线性关系良好。

2.3.2 精密度试验 吸取“2.1.2”项下供试品溶液20 μL，按“2.2”项色谱条件，连续进样6 次，测定峰面积，经计算RSD为0.49%，表明仪器精密度良好。

2.3.3 重复性试验 吸取“2.1.1”项下对照溶液20 μL，按“2.2”项下色谱条件，连续进样6 次，测定苍术素峰面积，经计算RSD为1.79%，表明方法重复性良好。

2.3.4 稳定性试验 吸取“2.1.1”项下供试品溶液20 μL，按“2.2”项下色谱条件，分别在0、2、4、6、8、10 h时进样，测定苍术素峰面积RSD 为1.74%，表明供试品溶液在10 h内稳定性良好。

2.3.5 加样回收率试验 称取4 号粉末0.100 0 g，共6份，分别加入“2.1.1”项下对照溶液5 mL，置于50 mL锥形瓶中，用甲醇定容至刻度，超声提取1 h 后过0.45 μm 微孔滤膜，取续滤液，按“2.2”项下色谱条件测定，计算回收率为95.4%，见表1。

表1 加样回收率试验结果

2.4 样品含量测定分别称取1～7 号苍术样品0.2 g，每份药材制备3 份平行样，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2”项色谱条件测定，结果不同产地的苍术中苍术素的含量为0.323 2%～0.595 9%,阿荣旗饮片中苍术素含量最高。3 年生、4 年生、5 年生苍术中苍术素的含量分别为：（0.350 0±0.004 8）%、（0.455 0±0.003 0）%、（0.335 0±0.011 8）%，见表2。

表2 苍术素含量测定结果（n=3）

3 讨论

含量测定结果显示，4 年生人工栽培北苍术的苍术素比3 年生和5 年生的含量高，以指标成分的含量为依据，本实验结果表明北苍术的最佳栽培时间为4年，与市售饮片相比，内蒙古莫旗的人工仿野生种植苍术中苍术素的含量符合标准。苍术中挥发性成分是主要活性成分，为特殊的次生代谢产物，其含量受遗传、个体发育和环境变化的影响[12-13]。内蒙古自治区为温带大陆性气候，阿荣旗、莫旗、扎兰屯及多热地处内蒙古东部，位于大兴安岭东麓中段，气候呈现出春温、夏升、秋降、冬寒的特点，剧烈的温差有利于区域内北苍术体内物质积累[14-15]。本方法简便、快速、准确，适用于北苍术中苍术素的含量测定。