GLP1R基因rs1042044多态性与2型糖尿病的相关性研究

房彬彬，罗俊一，李艳红，李晓梅，杨毅宁

（新疆医科大学第一附属医院1临床医学研究院，省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室，2心脏中心冠心病一科，3医学检验中心，乌鲁木齐830054）

糖尿病是目前威胁人们健康的重要慢性代谢性病之一[1]，其发病率呈逐年上升趋势[2]。2017 年中国糖尿病患病率为11.2%，患者数量约1.56 亿，位居世界第一，糖尿病分型以2 型糖尿病为主[3]。胰高血糖素样肽(glucagon-like peptide-1,GLP-1)是一种肠促胰岛素，通过与胰高血糖素受体（GLP1R）结合，参与体内胰岛细胞功能和血糖稳态的调节[4]。GLP1R 的编码基因位于染色体6p21.2，研究发现GLP1R 基因多态性与肥胖、心血管危险因素、脂肪因子水平[5]以及GLP-1 受体激动剂的疗效[6]等相关。rs1042044 位于GLP1R 基因7 号外显子，该位点的突变是由亮氨酸（A）等位基因突变为苯丙氨酸（C）等位基因[7]。研究发现，rs1042044 位点AC/CC 基因型的儿童清晨唾液皮质醇水平明显高于AA 基因型[8]，AC 基因型的人群脂肪组织（FM）比AA 基因型高11.4%[9]。目前尚无GLP1R 基因rs1042044 多态性与2 型糖尿病相关性研究的报道，本研究分析了GLP1R rs1042044 位点基因多态性与2 型糖尿病发病易感性之间的关系，为2 型糖尿病的发病机制探索、干预及靶向治疗提供理论依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象选取2015 年1 月—2018 年12 月在新疆医科大学第一附属医院就诊的2型糖尿病患者147例，健康对照组463例。纳入标准：2型糖尿病患者按照《中国2 型糖尿病防治指南（2017 版）》中的诊断标准纳入[3]，典型糖尿病症状加上随机血糖≥11.1mmol/L；或加上空腹血糖≥7.0mmol/L；或加上葡萄糖负荷后2h 血糖≥11.1mmol/L 者，需改日复查确认。健康对照组无糖尿病家族史，并且空腹血糖＜6.1mmol/L，糖负荷后2h 血糖＜7.8mmol/L。排除标准：排除肿瘤、肝肾功能严重损害者、1 型糖尿病、妊娠糖尿病。高血压诊断标准：在未使用降压药物的情况下，非同日3 次测量诊室血压，收缩压≥140mmHg 和（或）舒张压≥90mmHg[10]。肥胖诊断标准：BMI≥28kg/m2[11]。本研究通过新疆医科大学第一附属医院伦理委员会的批准，每例患者入组前都已签署知情同意书。

1.2 血液样本处理血液样本采集、生化指标检测及DNA 提取使用乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝管留存所有患者空腹12h 以上肘静脉血样，室温5 000 rpm/min离心5min，分离血浆和全血，使用天根血液基因组提取试剂盒提取血细胞DNA，通过Nanodrop ND-2000超微量核酸仪对DNA 纯度和浓度进行检测，并将浓度稀释至50 ng/μL，—80℃冰箱保存备用。生化指标由新疆医科大学第一附属医院医学检验中心检测。

1.3 GLP1R 基因分型运用SNPscanTM多重SNP 分型技术研究对象进行GLP1R基因分型。

1.4 统计学分析运用SPSS 22.0 软件进行统计分析，计数资料采用例数（百分比）表示，组间比较采用卡方检验，计量资料采用均值±标准差表示，组间比较采用独立样本t 检验；GLP1R 基因多态性与糖尿病的关系采用多因素非条件Logistic 回归分析，根据年龄、性别、高血压、BMI、载脂蛋白A 调整了优势比(OR)，计算95%置信区间(CI)。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般临床资料特征共纳入610 例研究对象，其中健康对照组463 例，平均年龄（56.66±11.68）岁，糖尿病组147例，平均年龄（59.435±11.62）岁，两组年龄差异有统计学意义（P=0.012）。糖尿病组体质指数（BMI）、高血压和肥胖患者的比例显著高于健康对照组（P均＜0.05），健康对照组的载脂蛋白A水平显著高于糖尿病患者（P=0.001），见表1。

2.2 GLP1R rs1042044基因型及其分布

2.2.1 基因分型 经SNPscanTM 分型技术对GLP1R基因rs1042044 位点进行基因型鉴定，该位点有3 种基因型，分别为AA、AC、CC。

2.2.2 基因型分布 rs1042044位点3种基因型在糖尿病组的分布频率分别为：AA 型占20.4%，AC 型占55.1%，CC 型占24.5%，健康对照组的分布频率分别为：AA 型占26.6%，AC 型占43.0%，CC 型占30.5%，分布差异有统计学意义（P=0.036）。

表1 研究对象一般临床资料特征

2.3 多因素非条件Logistic回归分析结果rs1042044 位点AC 或CC 基因型是2 型糖尿病的发病的独立危险因素，携带AC 或CC 基因型的患者患糖尿病的风险是AA 携带者的1.634 倍（OR 值=1.634，95%CI：1.011～2.640，P =0.045）。年龄、BMI、载脂蛋白A是糖尿病的危险因素，见表2。

表2 多因素非条件Logistics回归分析结果

3 讨论

本研究采用病例-对照研究策略，通过SNPscanTM分型技术对147 例糖尿病患者和463 例健康对照者进行对GLP1R 基因rs1042044 位点基因分型，发现rs1042044 位点AA、AC 和CC 3 种基因型在两组中的分布差异具有统计学意义。排除糖尿病发病的传统危险因素的影响后，GLP1R 基因rs1042044 位点基因多态性仍然和糖尿病的发病风险相关，与携带AA 基因型者相比，携带AC 或CC 基因型者患糖尿病的风险增加了0.634 倍，提示GLP1R 基因rs1042044 位点多态性与糖尿病的发生具有相关性。

GLP1R 是一种参与代谢的B类G 蛋白偶联受体，广泛分布于胰岛、肌肉、胃肠道、肺、脑、肾脏、脂肪、肝脏、胰腺、心血管系统、下丘脑等组织和器官。GLP-1 与胰岛B 细胞表面GLP1R 结合后，发挥葡萄糖浓度依赖性降糖作用。GLP1R 敲除小鼠则表现出循环胰岛素水平降低、葡萄糖不耐受，提示GLP1R 是糖尿病发生发展中重要的因子。GLP1R 目前作为糖尿病治疗的重要靶点的研究最为广泛，而遗传因素与糖尿病发病的研究报道较少。已有研究发现在超重的2 型糖尿病患者中，GLP1R rs10305420 位点变异等位基因T 在治疗6 个月后体重减轻和糖化血红蛋白均降低[12]。有研究发现2 型糖尿病患者中GLP1R rs3765467 位点GA/AA 基因型患者对DPP-4 抑制剂的应答比例更高，糖化血红蛋白下降幅度也更大[13]。本研究中发现，GLP1R rs1042044 位点AC/CC 基因型患2 型糖尿病风险比AA 基因型更高，并且年龄、BMI、载脂蛋白A是2型糖尿病的危险因素。

已有研究发现GLP1R 基因rs1042044 位点多态性与快感缺乏表型[14]、胃排空[15]等相关，而GLP1R rsl042044 位点AC/CC 基因型与2 型糖尿病易感性的研究却未见报道，本研究发现了GLP1R rs1042044 位点AC/CC 基因型与2 型糖尿病易感性相关，rs1042044 CC/AC 基因型的患者比AA 基因型的患者更容易患2型糖尿病，GLP1R 基因多态性分析能够帮助识别具有潜在糖尿病风险的个体，为2型糖尿病的发病机制、早期临床干预及基因靶向治疗提供理论依据。