胃癌组织中S100A2的表达及其与临床病理特征的关系

田伟，高爱红

(陕西省核工业二一五医院 a.病理科，b.内科，陕西 咸阳 712000)

胃癌是具有较强异型性的消化道恶性肿瘤，其发生、发展过程复杂，是由多基因、多阶段、多因素共同介导的病理过程，疾病初期诊出率低，常得不到及时治疗，即使在进展期实施放、化疗，治疗结果也难达到预期[1-2]。随着生物学研究的不断深入，研究发现多种癌基因激活、凋亡抑制基因失活在胃癌的发生、进展过程中扮演重要角色，因此探寻并揭露胃癌病理过程中基因蛋白的表达情况，对指导临床靶基因治疗具有重要意义[3-4]。S100钙结合蛋白A2(S100 calcium binding protein A2，S100A2)是Lee等[5]于1991年发现的一种新型蛋白，属于抑癌基因，参与了肿瘤细胞的抑制。正常情况下，S100A2在机体正常细胞内低表达，是保障细胞正常增殖、分化的关键因素，但在机体某组织细胞发生癌变后，S100A2在组织内的表达显著减少[6]。研究显示，S100家族蛋白的表达在诸多癌变组织中呈减少甚至缺失状态[7]。故考虑S100A2在胃癌组织中可能也存在异常表达，但S100A2相对表达与胃癌患者临床病理特征是否具有直接联系尚不清楚，且临床相关研究也较少。本研究旨在分析胃癌组织中S100A2的表达及其与临床病理特征的关系，以期为胃癌的诊疗提供新思路。

1 资料与方法

1.1一般资料 回顾性分析2010年1月至2014年12月陕西省核工业二一五医院收治的105例胃癌患者的病历资料，其中男75例、女30例；年龄42～73岁，平均(57±3)岁；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期20例，Ⅲ～Ⅳ期85例；淋巴结转移63例，无淋巴结转移42例；病灶直径<5 cm 36例，≥5 cm 69例。纳入标准：①经临床病理组织确诊为胃癌；②患者均接受手术治疗，且手术均顺利进行；③预计生存时间≥6个月；④胃癌患者病历资料无缺失，且均有组织切片封存。排除标准：①合并其他部位恶病质的患者；②术前接受放、化疗的患者。本研究经陕西省核工业二一五医院医学伦理委员会批准，患者及家属均签署了知情同意书。

1.2标本采集 所有组织标本均来源于术中切除组织，其中胃癌标本均采自胃癌原发病灶处，癌旁组织来源于距离胃癌原发病灶5 cm的胃壁组织，正常胃组织来源于距离胃癌原发病灶5 cm外的胃壁组织，且经病理学检查为正常胃黏膜组织。所有组织来源均确保在术中离体30 min内完成取材，在此过程中应用的医疗器械、标本管均经去RNA酶水浸泡后使用。

1.3方法

1.3.1标本处理 所有标本均使用10%甲醛溶液固定、常规脱水、包埋(石蜡)、切片(厚度均为4 μm)、染色(苏木精-伊红、免疫组织化学染色液)，利用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶法对S100A2进行免疫组织化学染色。

1.3.2仪器及试剂 鼠抗人S100A2抗体(批号：20091225/20111223/20131218)由英国Lab Vision & NEOMARKERS公司生产，兔抗人reprimo抗体(批号：20091221/20111214/20131220)由武汉博士德生物技术公司生产，链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶试剂盒(批号：20091205/20111211/20131123)由福州迈新生物技术公司生产。包埋机(型号：HistoCore Arcadia H)、脱水机(型号：LP13-RZ6)、染色机(型号：HRS-18C)均由日本Olympus公司生产，光学显微镜(型号：SH11/YF-9)由日本Olympus公司生产。所有操作均严格遵循说明书进行，且在严格质量控制下完成。

1.3.3判定标准 参照Matsubara等[8]的免疫组织化学结果判定标准，选取阳性对照：已知的阳性玻片，阴性对照：磷酸盐缓冲液代替一抗。具体判定方法为：细胞核或细胞核与细胞质之间有棕黄色颗粒视为S100A2阳性表达。每个玻片随机选取10个高倍(×200)视野，可根据阳性表达的细胞占比分级，-：视野内未见着色细胞或胞质着色但视野中细胞核着色数量≤1；+：着色浅或阳性着色细胞占比<1/4；++：可见着色细胞深度适宜或阳性着色细胞占比1/4～1/2；+++：视野内着色深或着色细胞占比>1/2。本研究将+～+++均视为阳性，-为阴性。

1.4统计学方法 采用SPSS 23.0统计学软件进行数据处理，计数资料比较采用χ2检验，等级资料比较采用秩和检验，相关性采用Spearman等级相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1各组织中S100A2的表达情况 正常胃黏膜组织S100A2的阳性表达率为100%(105/105)，癌旁组织为92.38%(97/105)，癌组织为75.24%(79/105)，各组S100A2的阳性表达率比较差异有统计学意义(χ2=79.887，P<0.001)，其中癌组织S100A2的阳性表达率低于癌旁组织、正常胃黏膜组织(χ2=11.370，P<0.001；χ2=29.674，P<0.001)，癌旁组织S100A2的阳性表达率低于正常胃黏膜组织(χ2=6.368，P<0.001)。各组织中S100A2的表达分级比较差异有统计学意义(Z=63.009，P<0.001)，其中癌组织与癌旁组织、正常胃黏膜组织的S100A2表达分级比较差异有统计学意义(Z=6.380，P<0.001；Z=5.434，P<0.001)，癌旁组织与正常胃黏膜组织的S100A2表达分级比较差异有统计学意义(Z=2.877，P=0.004)。见表1、图1。

表1 各组织中S100A2的表达情况 (例,n=105)

2.2S100A2表达情况与胃癌患者临床病理特征的关系 不同性别、年龄、病灶直径、浸润深度胃癌患者的S100A2表达比较差异无统计学意义(P>0.05)，TNM分期Ⅰ～Ⅱ期与Ⅲ～Ⅳ期，病灶组织中高分化与低分化、未分化，侵犯脉管与未侵犯脉管，未发生淋巴结转移与淋巴结转移的S100A2表达分级比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。见表2。

2.3S100A2表达与胃癌患者临床病理特征的相关性分析 Spearman等级相关分析结果显示，S100A2表达与胃癌患者的TNM分期、侵犯脉管及淋巴结转移均呈负相关(r=-0.246，P=0.011；r=-0.424,P<0.001;r=-0.210，P=0.032)，与分化程度呈正相关(r=0.518，P<0.001)。

表2 S100A2表达情况与胃癌患者临床病理特征的关系 (例)

3 讨 论

胃癌的发生与进展是由多基因、多因素共同作用造成的细胞增殖失控与分化受阻等异常积累的过程[9]。在胃黏膜上皮发生癌变的通路中，抑癌基因与癌基因占主要地位，同时也是介导细胞生长、分化过程的关键[10]。其中，抑癌基因在介导细胞增殖、分化过程中主要发挥负性调节作用，能抑制组织内癌变细胞的生长；当抑癌基因发生突变、缺失、失活时，正常组织细胞不断向恶性转变，抑癌基因活性的丢失现已被证实是诱发恶性肿瘤疾病发生、发展的重要原因之一[11-12]。推测这种抑癌基因的失活也可能与胃癌的发生发展有关，因此及时探寻胃癌抑癌相关基因的表达情况，明确胃癌抑癌基因与临床特征之间的关系，对开发胃癌特异性诊断技术、开辟胃癌新疗法具有重要意义。

S100A2属于S100家族，S100家族中各成员蛋白均属于钙结合蛋白，各蛋白均由两个EF-手型结构构成，EF-手型结构是由氨基酸组成的环状结构，与钙离子的亲和力相对较好[13]。而钙离子已被证实可调控机体肌肉收缩、细胞增殖、分化与转录等细胞生物学过程，同时还与某些恶病质的发生、进展密不可分，这也是钙离子作为抑制剂的重要体现，钙离子抑制剂在癌变组织细胞的生长、转移中具有显著的抑制作用[14-15]。本研究结果显示，癌组织S100A2的阳性表达率低于癌旁组织、正常胃黏膜组织，胃癌组织中的S100A2低表达可能提示S100A2的抑癌作用显著，蛋白的失活有可能参与肿瘤细胞的生长、运动、凋亡。其原因可能为：①S100A2阳性表达率较高时，S100A2与钙离子结合率高，血清中游离的钙离子浓度随之降低，游离的钙离子显著抑制了癌变细胞的增殖、分化，最终延缓或抑制组织癌变过程[16-17]。②S100A2阳性表达率降低时，抑制细胞增殖的作用削弱，促凋亡作用也随之削弱，为肿瘤细胞大量增殖、分化创造条件，加速胃癌进展，导致胃癌患者预后难达理想效果[18-19]。

已知S100A2的表达情况与胃癌疾病进展过程密不可分，但其表达是否与胃癌的临床特征也存在某种必然联系尚不清楚。本研究结果显示，S100A2表达情况与胃癌患者的TNM分期、侵犯脉管及淋巴结转移均呈负相关，与分化程度呈正相关，进一步证实了S100A2在胃癌中的检测价值。分析原因可能为：①癌变细胞运动能力增强是促进癌变组织发生转移的重要因素，也是必要前提。S100A2与非骨骼肌球蛋白相互作用，增强肌动蛋白细丝流动能力，改变癌变细胞结构，促进其运动，继而增强肿瘤的远处转移能力[17]。②癌变细胞在分化、转移过程中会造成诸多蛋白酶的改变，基质金属蛋白酶在癌变细胞转移、侵袭过程中发挥重要作用，能够有效降解癌变细胞外基质，并帮助其重塑；而S100A2通过介导基质金属蛋白酶合成、分泌，间接促进肿瘤细胞的转移、侵袭[20]。③S100A2具有显著的抑癌作用，当S100A2阳性表达下调时，抑癌作用也随之减弱。因此，临床可考虑将S100A2表达情况作为评估临床胃癌患者病情进展的生物学指标。但本研究纳入样本数量较少，缺乏临床论据，仍需更多试验加以验证。

综上所述，胃癌组织中S100A2呈低表达可能提示胃癌TNM分期高、分化程度低、淋巴结转移等不良临床特征，由此考虑早期检测胃癌患者的S100A2表达来作为患者病理特征评估的辅助手段，并指导临床相关治疗方案的制订。