microRNA对子宫内膜癌诊断价值的Meta分析*

李新阳,王朝坤,陈 静,刘志伟,王新帅

河南科技大学第一附属医院肿瘤内科，河南洛阳 471003

子宫内膜癌是世界范围内常见的女性生殖道恶性肿瘤，多发生于绝经后女性，占我国妇科肿瘤的20%～30%，仅次于宫颈癌。近期发布的数据显示，2018年全球新发子宫内膜癌病例约38.2万例，新增死亡病例约9.0万例[1-3]。子宫内膜癌是一种异质性肿瘤，患者的预后与肿瘤分级、分期等病理特征关系密切，早期精确、有效的诊断有助于改善患者的预后[4]。目前，没有一种诊断子宫内膜癌的方法是完全令人满意的。探讨新的生物标志物用于早期诊断、预测预后、监测肿瘤复发必将使子宫内膜癌患者受益。微小核糖核酸(microRNA)在人体正常组织和癌组织中的表达有所差别，它和多种肿瘤的发生、发展及预后有关。

microRNA是一种小的非编码RNA(约含22个核苷酸)，通过降解信使RNA(mRNA)或抑制转录后的翻译过程来调控基因表达[5-6]。microRNA上的结合区域非常短，可以调节基因上多个位点的表达。一些microRNA能够影响某些疾病的发生、发展[7-8]。大量研究表明，microRNA通过靶向mRNA促进肿瘤生长、侵袭、血管生成和免疫逃逸等[9-12]。microRNA在血液和其他体液中稳定表达，提示它具有成为诊断临床疾病的生物标志物的潜力。近年的研究表明，microRNA可能是诊断肿瘤的生物标志物[13-15]。目前，已有多个研究报道了microRNA在食管癌、头颈癌、胃癌、卵巢癌等多种肿瘤中的潜在诊断价值[16-19]。然而，其诊断子宫内膜癌的价值尚不明确。由于研究设计、标本类型和microRNA的不同，结果并不一致，不同的研究结论尚不完全一致。因此，本研究进行了本次Meta分析，以系统地评估microRNA对子宫内膜癌的诊断价值。

1 材料与方法

1.1检索策略 计算机检索PubMed、Cochrane Library、Embase、万方、知网、维普等数据库，使用主题词和自由词搜索策略，收集2019年12月25日前发表的关于microRNA诊断子宫内膜癌的相关文献。中文检索词包括microRNA、子宫内膜癌、诊断、灵敏度、特异度等。英文检索词包括microRNA、endometrial cancer、diagnosis、sensitivity、specificity。以上检索词用逻辑连接词or或and连接。

1.2文献纳入与排除标准

1.2.1纳入标准 如果文献符合下列标准，则被认为是可纳入的：(1)研究是诊断性的，并使用了microRNA；(2)确诊为肿瘤的患者通过病理学诊断为子宫内膜癌；(3)文中描述了灵敏度、特异度或有足够的数据计算灵敏度、特异度。

1.2.2排除标准 (1)针对同一人群重复发表的文献；(2)不能直接或间接获取相应的数据；(3)文献为病例报告、综述、评论或信件。

1.3文献质量评价 由两名研究者采用诊断准确性研究的质量评价工具(QUADAS-2)对纳入文献的质量进行评价。该工具主要由4个部分组成:病例的选择、待评价试验、金标准、病例流程和进展情况[20]。如果参与评价的两名研究者意见不一致，需进行讨论或由第3名人员进行评价。

1.4资料提取 两名研究者独立进行数据提取，按照提前设计的数据提取样表提取相关数据，并交叉核对结果。如果意见不一致，需进行讨论或由第3名人员评价。提取内容主要包括：第一作者、发表时间、国家、种族、病例组及对照组标本数、microRNA种类、标本来源、检测方法、真阳性(TP)、假阳性(FP)、假阴性(FN)、真阴性(TN)、曲线下面积(AUC)等。

1.5统计学处理 使用Stata14.0软件(Stata Corporation，College Station，TX，USA)和RevMan5.3软件 (Cochrane Collaboration,Oxford,UK)对提取的数据进行Meta分析,并计算灵敏度、特异度、阳性似然比(PLR)、阴性似然比(NLR)、诊断比值比(DOR)及其95%CI，以评估总体的诊断准确性。采用综合受试者工作曲线(SROC曲线)和AUC分析诊断效能。采用χ2检验分析各研究(22种microRNA)间是否存在异质性。若各研究间无异质性(P>0.05，I2<50%)，采用固定效应模型进行分析；若各研究间有异质性(P<0.05，I2>50%)，则采用随机效应模型进行分析。对于异质性较高的文献，进行Meta回归分析以明确异质性的主要来源，对纳入的文献进行亚组分析，尽量减少异质性对结果的影响。采用Deeks′漏斗图评价纳入的文献是否存在发表偏倚。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1文献筛选流程及结果 最初的文献检索筛选出了256篇文献，其中通过软件剔除重复文献后得到227篇文献。阅读文献题目和摘要进行初步筛检，共检索出33篇文献，其中综述8篇，7篇诊断标志物与microRNA无关，因此排除，得到18篇文献。阅读全文后12篇文献因无法获取相关数据被排除，最终得到6篇文献[21-26]。

2.2纳入文献的基本情况及质量评价 本研究纳入的文献发表在2012 —2016年。这6篇文献中包括子宫内膜癌患者215例，对照者171例；3篇文献的研究人群为中国人，1篇为韩国人，其余2篇为波兰人。microRNA表达水平的高低采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)或定量PCR(qPCR)进行检测。这6篇文献共检测了22种microRNA。纳入文献的基本特征见表1。应用QUADAS-2对纳入文献质量进行评价，结果显示，所纳入文献的质量相对较高。见表1。

表1 纳入文献的主要特征

续表1 纳入文献的主要特征

2.3microRNA在子宫内膜癌中的诊断准确性 异质性检验结果显示，各研究结果间的灵敏度(I2=55.67%,P<0.01)、特异度(I2=58.78%,P<0.01)异质性较大，所以使用随机效应模型进行分析。分析结果显示，microRNA诊断子宫内膜癌的灵敏度为0.78(95%CI：0.74～0.82)，特异度为0.77(95%CI：0.71～0.82)，见图1。PLR为3.4(95%CI：2.7～4.2)，NLR为0.29(95%CI：0.24～0.34)；DOR为12.0(95%CI：9.0～16.0)。SROC曲线见图2，AUC为0.84(95%CI：0.81～0.87)。以上研究结果表明，microRNA在子宫内膜癌的诊断中具有较高的准确性。Fagan列线图结果显示，临床通过检测microRNA诊断子宫内膜癌，当检测结果为阳性时，受检者被诊断为子宫内膜癌的概率由20%(验前概率)上升至46%(验后概率)，然而当检测结果为阴性时，受检者被诊断为子宫内膜癌的概率由20%(验前概率)下降至7%(验后概率)，进一步表明microRNA可以提高子宫内膜癌的诊断率。

2.4异质性检验和亚组分析 2.3中异质性检验结果显示，各项研究间的灵敏度和特异度有异质性，Spearman相关系数为0.194(P=0.387)，说明本研究无阈值效应。为进一步分析异质性的来源，通过Meta回归分析及亚组分析查找。按照种族、检测方法、标本来源、样本量大小、检测的microRNA个数进行分析。Meta回归分析结果见表2，检测的microRNA个数可能是本研究异质性的来源(P=0.014)，而种族、检测方法、标本来源、样本量大小与研究的异质性无关(P>0.05)。各亚组分析结果显示，检测多个microRNA对诊断子宫内膜癌有更高的准确性，在灵敏度、特异度、PLR和DOR方面均优于检测单个microRNA。而种族、检测方法、标本来源、样本量大小对诊断子宫内膜癌的准确性均差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

图1 灵敏度和特异度的森林图

图2 microRNA在子宫内膜癌诊断中的SROC曲线

表2 Meta回归分析结果

2.5发表偏倚 应用Deeks′漏斗图评估纳入文献是否存在发表偏倚，结果显示，各项研究基本对称地散落在回归直线两侧，表明不存在发表偏倚(P=0.053)。见图3。

表3 各亚组分析结果

图3 Deeks′漏斗图

3 讨 论

子宫内膜癌是最常见的女性生殖道实体肿瘤之一，由于女性生活方式、饮食习惯的改变，以及晚婚和避孕药物的使用等，导致子宫内膜癌的发病率逐年升高，使其成为妇科恶性肿瘤的主要致死因素之一[27-28]。针对子宫内膜癌的侵入性诊断虽然准确性高，但可能会对身体造成一定伤害，影响受孕。而非侵入性诊断，如MRI、彩超、血清肿瘤标志物等早期诊断子宫内膜癌的灵敏度和特异度不够理想。血清糖类抗原(CA)125是临床上常用的非侵入性肿瘤生物标志物，但是其诊断子宫内膜癌的灵敏度和阳性预测值相对较低(灵敏度为52.63%，cut off值为17.8 U/mL)[29]。近些年来，越来越多的研究者发现microRNA在肿瘤发生、发展中有重要作用。大量的microRNA被证实存在于血液循环中，而且血液中的microRNA非常稳定，不易被外源性和内源性酶降解，反复冻融甚至室温放置24 h，血液中的microRNA水平没有明显变化。它们在不同疾病包括急性心肌梗死、异位妊娠、风湿性疾病、肝硬化和各种类型的恶性肿瘤[30-35]患者中表现出不同的特点。JIANG等[36]研究发现，microRNA诊断原发性肝细胞癌的AUC为0.92(95%CI：0.90～0.94)，灵敏度和特异度分别为0.84和0.87；LIU等[37]的Meta分析结果显示，microRNA可作为亚洲人群胃癌的诊断指标。以上研究都提示microRNA是可用于疾病诊断的、可靠的非侵入性生物标志物。基于以上发现，本研究进行了这项Meta分析，以评估microRNA在子宫内膜癌中的诊断价值。

通过筛选，本研究对纳入的6篇文献进行Meta分析，结果显示，microRNA诊断子宫内膜癌的灵敏度为0.78，特异度为0.77，灵敏度比CA125高，说明microRNA在子宫内膜癌的诊断中具有较高的诊断价值。PLR为3.4，提示子宫内膜癌患者microRNA检测阳性的概率比健康人群高3.4倍。NLR为0.29，提示检测结果为阴性的人群中，29%的受检者有可能患子宫内膜癌。DOR值为12.0，进一步表明microRNA具有较高的诊断子宫内膜癌的能力。AUC为0.84，表明其诊断效能较高。

异质性检验是Meta分析的重要内容之一，本研究异质性检验提示纳入的各研究间有异质性。阈值效应是异质性的重要来源，而本研究Spearman相关系数为0.194(P=0.387)，提示研究的异质性不是由阈值效应产生的。为寻找异质性的潜在原因，进行Meta回归分析，结果显示检测的microRNA个数可能是本研究异质性的来源(P=0.014)。亚组分析结果显示，检测多个microRNA对诊断子宫内膜癌具有更高的准确性，在灵敏度、特异性、PLR和DOR方面均优于检测单个microRNA。最后，发表偏倚结果显示P为0.053，说明本研究结果是可靠的。

然而，本研究也有一定的局限性：(1)只检索了在中文或英文数据库中发表的文献，其他语言的文献未进行检索，这可能会导致语言发表偏倚。(2)本研究纳入分析的文献有限，有些研究样本量较少，可能一定程度影响了研究结果的可靠性。(3)纳入分析的各个研究间有一定的异质性，可能在一定程度上影响Meta分析的结果。

综上所述，microRNA可作为诊断子宫内膜癌的新型生物标志物，但仍需要进行更多的研究来评估其在诊断子宫内膜癌中的价值。