CUEDC2在浆液性卵巢癌组织中的表达及其与临床指标的相关性分析

胡凌云，宁静，李爱玲，李亚里，游艳琴*

1解放军总医院第一医学中心妇产科，北京 100853；2解放军总医院海南医院妇产科，海南三亚 572013；3军事医学科学院仪器中心，北京 100850

卵巢癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，全球每年新诊断约23.9万例卵巢癌患者，且每年15.2万例患者死于卵巢癌[1]。卵巢恶性肿瘤种类较多，其中浆液性肿瘤约占1/4[2]，约70%的患者发现时已属晚期，尽管手术、放疗、化疗、靶向治疗等治疗方法不断改进，但患者的5年生存率仅从37%上升到46%。CUE结构域蛋白2(CUE domain containing 2，CUEDC2)在乳腺癌组织中高表达，在分子水平的研究发现CUEDC2基因是乳腺癌的耐药基因[3]，而卵巢癌和乳腺癌均为雌孕激素相关的恶性肿瘤，因此，本研究采用免疫组化的方法检测CUEDC2在浆液性卵巢癌中的表达情况，并初步探讨其是否与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)的表达具有相关性。

1 资料与方法

1.1 样本来源及主要试剂 收集2005年1月－2011年7月因原发性卵巢癌在解放军总医院第一医学中心妇产科行手术治疗的75例患者作为病例组，术后均经病理检查诊断为卵巢浆液性囊腺癌。纳入标准：①为原发性卵巢癌患者，且术后病理提示为卵巢浆液性囊腺癌；②术前均未行化疗、放疗及靶向治疗等；③术后均进行了规范的化疗、放疗、靶向治疗。排除标准：①转移性卵巢癌；②存在高血压、糖尿病等合并症。根据卵巢癌二元论，对照组为未受肿瘤累及的输卵管伞端组织切片，共20例。CUEDC2抗体由军事医学科学院仪器中心提供，二抗、封闭液、二抗增强剂、DAB显色剂均购自北京中杉金桥公司。

1.2 方法 回顾性分析75例卵巢癌患者的一般资料，并进行术后随访，统计患者的年龄、血清CA-125水平、国际妇产科协会(FIGO)分期、病理分级、ER表达、PR表达、无病生存期(disease-free survival，DFS)及总生存期(overall survival，OS)。将病理分级分为高分化、中分化及低分化。按FIGO分期分为Ⅰ-Ⅳ期，其中Ⅰ期与Ⅱ期为早期卵巢癌，Ⅲ期与Ⅳ期为晚期卵巢癌。采用免疫组化方法进行常规CUEDC2染色，于显微镜下阅片。评分方法：在40倍镜下阅片，评估全部癌组织及正常组织在整张切片下所占的面积，强度分为4级，3分显色为棕褐色，2分显色为棕黄色，1分显色为黄色，0分为无着色，总分=3分×相对应肿瘤面积的百分数+2分×相对应肿瘤面积的百分数+1分×相对应肿瘤面积的百分数。评分由两位病理科医师进行，以避免误差。

1.3 CUEDC2表达与浆液性卵巢癌临床病理特征的相关性分析 分析CUEDC2表达与卵巢癌患者年龄、病理分级、ER表达、PR表达、有无淋巴结转移的相关性，筛选出与CUEDC2阳性相关的临床特征。

1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0软件进行统计分析。计量资料以±s表示，计数资料以例(%)表示。病例组与对照组中CUEDC2的表达情况，以及CUEDC2在不同年龄、病理分级、淋巴结转移患者中的表达差异比较采用χ2检验；卵巢癌各个分期、各个病理分级间CUEDC2的表达情况比较采用秩和检验；CUEDC2表达与ER、PR的相关性采用Spearman等级相关分析；对CUEDC2阳性、阴性表达的患者进行生存分析，采用log-rank检验分析其DFS及OS是否具有差异。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 病例组患者的基本资料 75例卵巢癌患者年龄(52.7±11.1)岁，其中病理分级为低分化者61例，中分化者10例，高分化者4例。低分化者CA-125水平平均为814.4 U/ml，中分化者为1189.8 U/ml，高分化者为596.1 U/ml。75例患者中FIGO分期Ⅰ期15例，Ⅱ期11例，Ⅲ期42例，Ⅳ期7例，其中Ⅰ期患者血清CA-125水平平均为183.1 U/ml，Ⅱ期患者为407.9 U/ml， Ⅲ期患者为1160.9 U/ml，Ⅳ期患者为988.0 U/ml，晚期卵巢癌患者的CA-125水平明显高于早期患者。

2.2 病例组及对照组CUEDC2的表达情况 两组标本行免疫组化染色后，对CUEDC2表达情况进行评分，结果显示，病例组的评分(1.69±0.67)明显高于对照组(0.99±0.44，P<0.05)。此外，FIGO分期Ⅰ期患者评分为1.35±0.60，Ⅱ期评分为1.54±0.57，Ⅲ期评分为1.78±0.71，Ⅳ期评分为2.13±0.27，CUEDC2评分随卵巢癌分期的增加而升高，差异有统计学意义(P<0.05，图1)。早期卵巢癌组共26例，晚期卵巢癌组共49例。早期卵巢癌患者CUEDC2表达评分(1.43±0.58)明显低于晚期卵巢癌患者(1.83±0.68，P<0.05)。低分化组CUEDC2评分为1.66±0.66，中分化组为1.78±0.79，高分化组为1.87±0.78，3组间差异无统计学意义。

图1 CUEDC2在各病理分期浆液性卵巢癌组织中的表达Fig.1 The expression of CUEDC2 in primary serous ovarian cancer

2.3 浆液性卵巢癌中CUEDC2的表达与ER、PR的相关性 在75例浆液性卵巢癌患者标本中，有67例进行了PR、ER免疫组化染色。CUEDC2阳性表达的53份组织标本中，PR阴性表达24份，阳性表达29份；ER阴性表达22份，阳性表达31份。相关分析显示，CUEDC2的表达与ER、PR的表达均无相关性(r=-0.0785、r=0.0111，表1)。

表1 浆液性卵巢癌组织中CUEDC2表达与ER、PR的关系Tab.1 Relationship of the expression of CUEDC2 to ER and PR in serous ovarian carcinoma

2.4 CUEDC2表达与浆液性卵巢癌临床病理特征的相关性 相关分析显示，CUEDC2表达仅与FIGO分期有关(P=0.01)，与患者年龄、病理分级、有无淋巴结转移无相关性(表2)。

2.5 CUEDC2表达与浆液性卵巢癌患者生存期的关系 统计病例组患者的DFS及OS，其中有3例失访，失访率为4.05%。CUEDC2阳性患者的中位DFS为32.6个月，中位OS为54.3个月，而CUEDC2阴性患者的中位DFS为51.9个月，中位OS为63.5个月。CUEDC2阳性组及阴性组的OS差异无统计学意义(P>0.05)，而CUEDC2阳性组的DFS短于CUEDC2阴性组(P<0.05，图2、3)。

表2 CUEDC2表达与临床病理特征的关系分析Tab.2 Relationship between expression of CUEDC2 and clinical index

图2 CUEDC2表达与总生存期的关系Fig.2 Relationship of CUEDC2 expression and the overall survival

图3 CUEDC2表达与无病生存期的关系Fig.3 Relationship of CUEDC2 expression and the diseasefree survival

3 讨 论

卵巢癌是一种多基因参与的妇科恶性肿瘤，病死率高，除早期症状隐匿及肿瘤家族史外[4-7]，患者对化疗药物的反应是否敏感也是一个重要因素。国内外研究报道，在乳腺癌、肝癌、胆囊癌等组织中CUEDC2呈高表达[8-10]。因乳腺癌是ER阳性的恶性肿瘤，而浆液性卵巢癌的ER阳性率也明显高于良性浆液性卵巢肿瘤[11]，因此，本研究采用免疫组化的方法检测了75例浆液性卵巢癌患者标本中的CUEDC2表达情况，结果显示，浆液性卵巢癌组织的CUEDC2表达(1.69±0.67)明显高于对照组(0.99±0.44)，考虑CUEDC2的编码基因在卵巢癌发生发展过程中可能被异常激活，从而导致CUEDC2在浆液性卵巢癌组织中大量堆积。本研究发现，浆液性卵巢癌组织中的CUEDC2蛋白表达明显增多，其表达量随肿瘤分期的增加而升高，且晚期表达量明显高于早期。此外，CUEDC2阳性患者DFS明显短于阴性组，说明CUEDC2可能是浆液性卵巢癌的早期指标，其表达量越高，则复发的风险越大，预后也较差。但是，CUEDC2能否成为诊断卵巢癌的早期指标仍需更多临床数据进一步验证。

流行病学调查发现，卵巢癌的病因、发病机制及进展在很大程度上依赖于雌激素的活性[12-13]。但本研究结果显示，CUEDC2的表达与ER、PR并无相关性。既往研究显示，CUEDC2可通过泛素-蛋白酶体途径促进孕激素诱导的PR降解[14]，还可下调ER-α的表达[3]。但本研究结果与CUEDC2蛋白堆积导致ER或PR泛素化降解的相关理论并不相符，考虑原因有两个：一是样本量较小，仍需更多临床数据支持来明确CUEDC2与ER、PR表达有无相关性；二是浆液性卵巢癌与乳腺癌的CUEDC2蛋白堆积理论并不一致，应在多个层面对其发病机制进行探讨。

虽然文献[15-16]报道CUEDC2在多种恶性肿瘤中的表达差异较大，且参与了Warburg效应，本研究也证实CUEDC2在卵巢癌中呈高表达，但其在肿瘤发生中的作用仍有待进一步探讨。CUEDC2存在多种信号通路的作用机制，如通过核因子-κB信号通路调控炎症[17]、通过JAK1/STAT3信号通路调控免疫逃逸[18]、通过miR324-5p-CUEDC2轴调控炎 症[19]，以及参与细胞周期调控[20]等。本研究仅检测了CUEDC2在浆液性卵巢癌中的表达情况，并初步探讨了其是否与ER、PR表达相关，下一步仍需在细胞水平及动物水平方面进行继续扩大样本量深入研究，以进一步明确CUEDC2与卵巢癌发生、发展的关系。