肺炎克雷伯菌高毒力荚膜血清型的构成及毒力和耐药性研究

黄海峰

（盐城市射阳县妇幼保健院，江苏 盐城）

0 引言

荚膜属于肺炎克雷伯菌的主要构成的毒力因子之一[1]。传统的观念，认为高毒力荚膜血清型肺炎克雷伯菌的耐药率较低，但是通过本次探讨以及近期我们的研究发现，其耐药性正在逐渐上升。筛选出的110株高毒力荚膜血清型肺炎克雷伯菌进行探究分析，对其的毒力以及耐药性等情况做了进一步的探究。

1 信息及方法

1.1 常规资料

抽取2108年2月至2019年2月在盐城市第一人民医院进行治疗的100例肺炎克雷伯菌病人给予研究，包括41株非重复肺炎克雷伯菌。按照病史分成肝胆疾病组（79例）与无肝胆疾病组（31例）。入院要求：皆确诊肺炎克雷伯菌感染，经过血、尿，化验均检出；穿刺培养证实肺炎克雷伯菌；排除要求：精神疾病；家族遗传史；慢性肝炎与传染病。

1.2 方法

1.2.1 微生物学特点

a黏液丝试验，在37 ℃下对肺炎克雷伯菌培养16～18 h，将菌落挑起，若黏液长度大于5 mm，则证明实验的结果为阳性，如果没有挑起超过5 mm的长度是阴性；b毒力基因检测和荚膜种类，选择PCR扩增法检查毒力基因，将已培养好肺炎克雷伯菌放在400 μL去离子水里加热100 ℃后保持5 min的离心，然后DNA模板，最后选择特定引物序列生成气杆菌素（底物：wcaGF，wcaGR）以及rmpA（底物：rmpAF、rmpAR）和 K1、K2、K5、K54、K57引物，并且相同反应条件中实施基因的扩增，再于100 V电压和1%琼脂糖凝胶电泳反应产物，对产物成像。

1.2.2 药敏试验

应用MH琼脂粉与单药药敏纸片；使用经过升级Hodge试验法对碳青霉烯酶的情况进行判断；选择双纸片法（克拉维酸药敏纸片/克拉维酸和头孢他啶/北京天坛药物生物技术开发公司生产的含酶抑制剂的头孢噻肟）对超广谱β内酰胺酶的生成情况进行确认；质控菌株ATCC25922抑菌环直径作为药敏作用的评价准则，直径内为有效。

1.3 数据分析

选择SPSS 23.0进行数据分析，采用χ2检验，若P<0.05则表示存在明显差异，具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组肺炎克雷伯菌微生物学特征对比

86.36% 高黏液表型（95/110），81.82%（90/110）菌株存在rmpA基因，88.18%（97/110）菌株存在气杆菌素。对比发现无其他肝胆疾病组显著大于有肝胆疾病组，具有较大差异（P<0.05），见表 1。

表1 两组肺炎克雷伯菌微生物学特征比较[n(%)]

2.2 肺炎克雷伯菌耐药情况

非重复肺炎克雷伯菌存在敏感性，对12种常见抗菌药物的敏感性超过85%，包括4株中介耐药；2株产碳青霉烯酶，属于非高黏液，未分型菌株；1株产超广谱β内酰胺酶，属于非高黏液，未分型菌株；1株产超广谱β内酰胺酶，属于高黏液K2型菌株，见表2。

表2 肺炎克雷伯菌的耐药情况[n(%)]

3 讨论

革兰阴性菌属于主要的致病菌，2/3的大肠埃希杆菌[2]，然后是粪链球菌与变形杆菌；目前，肺炎克雷伯菌患病率约66%[3]，研究表明：肺炎克雷伯菌已逐渐成为细菌性最主要的病原菌[4-5]。约80.00%的肺炎克雷伯菌发生于肝右叶，且多为单发，大部分患者白细胞和中性粒细胞百分比明显升高。与本次探讨结果大致相同[6-7]。在本次探究中，50%肺炎克雷伯菌病人存在糖尿病。主要是由于糖尿病病人身体免疫水平较低，极易感染其他疾病[8]。近几年，B超与CT是检查肺炎克雷伯菌的常用方法，能够评价脓肿的大小、位置、性状等情况，为临床治疗提供诊断价值。Law等[9]报道若判定细菌性患者的脓肿内具有一定的气体，既可初步判断其致病菌属于肺炎克雷伯菌。在本次报告中，110例病人经过抗菌药治疗与穿刺后，106例疾病获得显著的减轻。发热表现基本消退，白细胞计数慢慢恢复正常，脓肿变小，4例败血症死亡。说明治疗效果理想，然而败血症必须临床高度重视预防。高毒力肺炎克雷伯菌存在高黏液、携带毒力基因rmpA和气杆菌素的特征，而荚膜多糖属于这种类型的最关键决定因子。徐丽等[10]发现79个荚膜分型，K1和K2血清型毒力最强，最常见荚膜分型。有资料显示，83%分离自患者的肺炎克雷伯菌的荚膜分型为K1和K2血清型。该报道结果说明86.36%的肺炎克雷伯菌表型为K1和K2血清型，提示高毒力肺炎克雷伯菌是细菌性主要病原菌。研究表明肺炎克雷伯菌对常见抗菌药物的耐药性不断的增强，特别碳青霉烯类抗菌药物。研究称气杆菌素与菌落的黏液性相关，可增强肺炎克雷伯菌的毒性，所以携带rmpA与气杆菌素的肺炎克雷伯菌存在高毒力。该报告结果中，无肝胆疾病患者rmpA与气杆菌素检出率远远大于有肝胆疾病患者，主要是因为高毒力肺炎克雷伯菌毒性造成原发感染，然而常规菌株毒力较小，胆囊炎或肝胆手术后诱发感染。高毒力肺炎克雷伯菌对抗菌药物的耐药率较低，然而1株高黏液K2血清型菌株对超广谱β内酰胺类药物耐药，说明预防高毒力高耐药的肺炎克雷伯菌株。

综上所述，肺炎克雷伯菌主要高发中老年男性，携带毒力基因rmpA以及气杆菌素的高毒属于其主要病原菌，对常见抗菌药物的耐药率较低。