比较分析ELISA法和实时荧光PCR法在麻疹检测上的应用

辽阳市卫生健康服务中心临床检验科 （辽宁 辽阳 111000）

内容提要：目的：分析ELISA法和实时荧光PCR检测麻疹的效果。方法：挑选2018年10月～2019年10月本院收治的161例疑似麻疹患者，采用ELISA法与实时荧光PCR（RT-PCR）法检测所有患者，分析两种检测方法检测结果。结果：ELISA法检测麻疹IgM抗体阳性66例，阴性95例，阳性检出率为40.99%，RT-PCR法检测麻疹病毒核酸阳性100例，阴性61例，阳性检出率为62.11%，RT-PCR法检测阳性率高于LISA法（P＜0.05）。出疹当日RTPCP法阳性率为44.00%，ELISA法阳性率为16.00%。伴随时间移动，ELISA法检测阳性率日益升高，RTPCR法在第4d阳性检出率就开始下降。对比出疹2d内两种检测法的阳性检出率，RT-PCP法阳性率高于ELISA法（P＜0.05）。结论：实时荧光PCR法可以有效诊断早期麻疹病毒，提高麻疹阳性检出率，减少漏诊率。

麻疹的病原体就是麻疹病毒，病毒入侵人体后会引发急性病毒性呼吸道传染病，麻疹极具传染性，且发病率极高。麻疹病毒的感染速度极快，有效精准的诊断早期疑似麻疹患者，意义重大，疾病确诊后就一定要马上采取针对性的预防治疗手段，控制麻疹暴发概率。本文分析ELISA法和实时荧光PCR检测麻疹的效果，现作如下报告。

1.资料与方法

1.1 临床资料

选取2018年10月～2019年10月本院收治的161例疑似麻疹患者，男92例，女69例，年龄1～12岁，平均（6.5±2.1）岁，患者知情，本研究经医学伦理委员会批准。患者出疹5d内采集血液样本与咽拭子标本，实施检测。

仪器与试剂：选择安图-2010酶标仪、ABI7300荧光定量PCR仪作为检测仪器，选择珠海经济特区海泰生物制药有限公司的麻疹病毒IgM抗体检测试剂盒。确定QIAGEN公司的RNeasy Mini Kit试剂盒作为RNA提取试剂盒。荧光RT-PCR试剂盒则选择广州达安基因公司的流感病毒核酸检测试剂盒。

1.2 方法

1.2.1 收集样本。①收集咽拭子：运用专门的病毒采样管拭子头擦拭患者咽喉部，收集上皮细胞，尽可能错开口腔中的黏膜、唾液、舌头等组织及液体，然后，放置完成收集的拭子头到样本保存液内，放到2～8˚C的条件下进行冷藏以备用。②采集患者2～3mL静脉血，设定转速2000r/min，在4˚C条件下实施离心，离心10min后提取上层血清，放到2～8˚C条件下冷藏以备用。

1.2.2 血清中麻疹IgM运用ELISA法检测。依据试剂盒使用说明书，运用试剂盒检测患者血液标本中麻疹病毒IgM抗体，同时设定专用空白对照孔，添加任意液体至孔内；接着设定阳性、阴性2个对照孔，以100μL/孔的比例分别注射对应的对照液至两孔内；遵循100μL/孔比例，依次加入10μL待测血清、标本稀释液到样品孔内。在检测过程中，运用麻疹病毒IgM抗体检测试剂盒检测所有血清标本病毒IgM，从而减少检测受到麻疹病毒的影响。

1.2.3 运用RT-PCR法检测病毒核酸。将采集的标本放到3～5mL的病毒标本保存液加以存储，运用柱式病毒RNAout试剂盒将RNA提取出来，后续实施扩增。接着运用RT-PCR法检测样本，检测人员遵循麻疹病毒RNA检测试剂盒说明书，按流程开展检测，顺利实施反应体系后，运用PCR仪开展扩增，开展反应应当具备下列条件：逆转录温度为50˚C，时间15min，1次循环；预变性温度在95˚C，时间15min，1次循环退火、变性、延伸温度在94˚C，时间15s，循环40次。等温度达到55˚C，收集所有荧光信号。

1.3 统计学分析

运用SPSS19.0分析数据。用（%）呈现计数资料，行χ2检验，P＜0.05说明有显著差异。

2.结果

2.1 两种检测方法的阳性检出情况

ELISA法检测麻疹IgM抗体阳性66例，阴性95例，阳性检出率为40.99%（66/161），RT-PCR法检测麻疹病毒核酸阳性100例，阴性61例，阳性检出率为62.11%（100/161），RT-PCR法检测阳性率高于LISA法（χ2=14.3741，P=0.0001），见表1。

2.2 不同出疹时间检测结果

出疹当日RT-PCP法阳性率为44.00%，ELISA法阳性率为16.00%。伴随时间移动，ELISA法检测阳性率日益升高，RT-PCR法在第4d阳性检出率就开始下降。对比出疹2d内两种检测法的阳性检出率，RT-PCP法阳性率高于ELISA法（P＜0.05）。比较出疹2d、以及2d以后的阳性检出率，无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表1.两种检测方法的阳性检出情况(n)

3.讨论

麻疹属于出疹性疾病，现在疾病缺少更为突出的症状，主要原因是运用疫苗，病毒毒性转变，成年麻疹患者不断增加，如此以来，增加临床鉴别麻疹与其他发热出疹性疾病的难度[1]。出疹前后5d有着极强的传染性，鉴于比较少见麻疹病毒阴性感染者与病毒携带者，所以，尽早诊断并实施针对性措施有着极为重要的意义。

临床主要运用RT-PCR与ELISA法检测麻疹病毒。ELISA法操作便捷，有着较高的敏感性与特异性，然而，人体不同就会有不同的生特异性IgM抗体的免疫反应，采集血液样本的时段差异也会对血清学诊断精准度带去影响，太早收集样本会很大程度上出现假阴性，太晚采集样本则会耽误治疗时机，采血难度也随之加大，更会影响早期诊断与防护措施的实施。

RT-PCR法的优势是高敏感性与精准性，操作流程简单，可以迅速对麻疹病毒核酸进行检测，无须实施PCR处置，可以直观地呈现检测结果，防止人为因素影响到检测结果，只要大约3h就可以完成提取核酸，以及实施检测[2,3]。运用RTPCR法处置麻疹疫情时，仅仅几个小时内就可以获得实验室确诊。

本研究显示，RT-PCR法检测阳性率高于LISA法（P＜0.05）。对比出疹2d内两种检测法的阳性检出率，RT-PCP法阳性率高于ELISA法（P＜0.05）。

总之，RT-PCR法检测麻疹效果更佳，安全可靠。

表2.不同出疹时间检测结果