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比较分析ELISA法和实时荧光PCR法在麻疹检测上的应用

2021-01-19辽阳市卫生健康服务中心临床检验科辽宁辽阳111000

中国医疗器械信息 2020年23期
关键词:麻疹阳性率试剂盒

辽阳市卫生健康服务中心临床检验科 (辽宁 辽阳 111000)

内容提要:目的:分析ELISA法和实时荧光PCR检测麻疹的效果。方法:挑选2018年10月~2019年10月本院收治的161例疑似麻疹患者,采用ELISA法与实时荧光PCR(RT-PCR)法检测所有患者,分析两种检测方法检测结果。结果:ELISA法检测麻疹IgM抗体阳性66例,阴性95例,阳性检出率为40.99%,RT-PCR法检测麻疹病毒核酸阳性100例,阴性61例,阳性检出率为62.11%,RT-PCR法检测阳性率高于LISA法(P<0.05)。出疹当日RTPCP法阳性率为44.00%,ELISA法阳性率为16.00%。伴随时间移动,ELISA法检测阳性率日益升高,RTPCR法在第4d阳性检出率就开始下降。对比出疹2d内两种检测法的阳性检出率,RT-PCP法阳性率高于ELISA法(P<0.05)。结论:实时荧光PCR法可以有效诊断早期麻疹病毒,提高麻疹阳性检出率,减少漏诊率。

麻疹的病原体就是麻疹病毒,病毒入侵人体后会引发急性病毒性呼吸道传染病,麻疹极具传染性,且发病率极高。麻疹病毒的感染速度极快,有效精准的诊断早期疑似麻疹患者,意义重大,疾病确诊后就一定要马上采取针对性的预防治疗手段,控制麻疹暴发概率。本文分析ELISA法和实时荧光PCR检测麻疹的效果,现作如下报告。

1.资料与方法

1.1 临床资料

选取2018年10月~2019年10月本院收治的161例疑似麻疹患者,男92例,女69例,年龄1~12岁,平均(6.5±2.1)岁,患者知情,本研究经医学伦理委员会批准。患者出疹5d内采集血液样本与咽拭子标本,实施检测。

仪器与试剂:选择安图-2010酶标仪、ABI7300荧光定量PCR仪作为检测仪器,选择珠海经济特区海泰生物制药有限公司的麻疹病毒IgM抗体检测试剂盒。确定QIAGEN公司的RNeasy Mini Kit试剂盒作为RNA提取试剂盒。荧光RT-PCR试剂盒则选择广州达安基因公司的流感病毒核酸检测试剂盒。

1.2 方法

1.2.1 收集样本。①收集咽拭子:运用专门的病毒采样管拭子头擦拭患者咽喉部,收集上皮细胞,尽可能错开口腔中的黏膜、唾液、舌头等组织及液体,然后,放置完成收集的拭子头到样本保存液内,放到2~8˚C的条件下进行冷藏以备用。②采集患者2~3mL静脉血,设定转速2000r/min,在4˚C条件下实施离心,离心10min后提取上层血清,放到2~8˚C条件下冷藏以备用。

1.2.2 血清中麻疹IgM运用ELISA法检测。依据试剂盒使用说明书,运用试剂盒检测患者血液标本中麻疹病毒IgM抗体,同时设定专用空白对照孔,添加任意液体至孔内;接着设定阳性、阴性2个对照孔,以100μL/孔的比例分别注射对应的对照液至两孔内;遵循100μL/孔比例,依次加入10μL待测血清、标本稀释液到样品孔内。在检测过程中,运用麻疹病毒IgM抗体检测试剂盒检测所有血清标本病毒IgM,从而减少检测受到麻疹病毒的影响。

1.2.3 运用RT-PCR法检测病毒核酸。将采集的标本放到3~5mL的病毒标本保存液加以存储,运用柱式病毒RNAout试剂盒将RNA提取出来,后续实施扩增。接着运用RT-PCR法检测样本,检测人员遵循麻疹病毒RNA检测试剂盒说明书,按流程开展检测,顺利实施反应体系后,运用PCR仪开展扩增,开展反应应当具备下列条件:逆转录温度为50˚C,时间15min,1次循环;预变性温度在95˚C,时间15min,1次循环退火、变性、延伸温度在94˚C,时间15s,循环40次。等温度达到55˚C,收集所有荧光信号。

1.3 统计学分析

运用SPSS19.0分析数据。用(%)呈现计数资料,行χ2检验,P<0.05说明有显著差异。

2.结果

2.1 两种检测方法的阳性检出情况

ELISA法检测麻疹IgM抗体阳性66例,阴性95例,阳性检出率为40.99%(66/161),RT-PCR法检测麻疹病毒核酸阳性100例,阴性61例,阳性检出率为62.11%(100/161),RT-PCR法检测阳性率高于LISA法(χ2=14.3741,P=0.0001),见表1。

2.2 不同出疹时间检测结果

出疹当日RT-PCP法阳性率为44.00%,ELISA法阳性率为16.00%。伴随时间移动,ELISA法检测阳性率日益升高,RT-PCR法在第4d阳性检出率就开始下降。对比出疹2d内两种检测法的阳性检出率,RT-PCP法阳性率高于ELISA法(P<0.05)。比较出疹2d、以及2d以后的阳性检出率,无统计学意义(P>0.05),见表2。

表1.两种检测方法的阳性检出情况(n)

3.讨论

麻疹属于出疹性疾病,现在疾病缺少更为突出的症状,主要原因是运用疫苗,病毒毒性转变,成年麻疹患者不断增加,如此以来,增加临床鉴别麻疹与其他发热出疹性疾病的难度[1]。出疹前后5d有着极强的传染性,鉴于比较少见麻疹病毒阴性感染者与病毒携带者,所以,尽早诊断并实施针对性措施有着极为重要的意义。

临床主要运用RT-PCR与ELISA法检测麻疹病毒。ELISA法操作便捷,有着较高的敏感性与特异性,然而,人体不同就会有不同的生特异性IgM抗体的免疫反应,采集血液样本的时段差异也会对血清学诊断精准度带去影响,太早收集样本会很大程度上出现假阴性,太晚采集样本则会耽误治疗时机,采血难度也随之加大,更会影响早期诊断与防护措施的实施。

RT-PCR法的优势是高敏感性与精准性,操作流程简单,可以迅速对麻疹病毒核酸进行检测,无须实施PCR处置,可以直观地呈现检测结果,防止人为因素影响到检测结果,只要大约3h就可以完成提取核酸,以及实施检测[2,3]。运用RTPCR法处置麻疹疫情时,仅仅几个小时内就可以获得实验室确诊。

本研究显示,RT-PCR法检测阳性率高于LISA法(P<0.05)。对比出疹2d内两种检测法的阳性检出率,RT-PCP法阳性率高于ELISA法(P<0.05)。

总之,RT-PCR法检测麻疹效果更佳,安全可靠。

表2.不同出疹时间检测结果

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