含糖血液透析液中葡萄糖含量检测方法的探讨

柯军 叶晓燕 ＊ 张海悦 魏滢 何晓帆 黄麒谕

1 广东省医疗器械质量监督检验所，国家药品监督管理局体外循环器械重点实验室，广州市生物医用血液净化材料研究与开发重点实验室 (广东 广州 510663)

2 吉林省富生医疗器械有限公司 (吉林 长春 130607)

内容提要：目的：针对旋光仪检测透析液中葡萄糖含量时遇到的检测结果不稳定问题，探索建立一种更加可靠的检测方法。方法：采用碘量法检测透析液中葡萄糖含量，通过对该方法进行重复性、稳定性及回收率实验，考察了方法的可行性。结果：该方法检测透析液中葡萄糖含量，平均回收率分别为100.45%、100.13%、99.87%，RSD值为0.29%。结论：本方法具有重复性好、准确度高的优点，可用于含葡萄糖透析液的检测和质量控制。

在血液透析过程中，无论是糖尿病或非糖尿病的患者都可能发生低血糖的症状，此症状是潜在的、严重的并发症，所以应当进行严格的葡萄糖水平检测和适当的营养[1]。在美国、日本及大多数欧洲国家，使用的透析液中常含有葡萄糖成分，其浓度多为1g/L，而2g/L浓度的含糖透析液使用逐渐减少[2,3]。有研究表明，透析液中糖浓度为1～2g/L时可以对透析患者带来很大的益处，如Sangill等[4]对使用含糖透析液和无糖透析液时患者血压的比较研究发现，使用含糖透析液透析期间患者血压明显低于无糖透析组。丁雪梅等[5]研究发现，与人体生理浓度相接近的5mmol/L或5.5mmol/L的含糖透析液既可以增加透析期间糖尿病肾病患者的血糖，预防透析过程中低血糖的发生，还可以避免血糖过高。但是，如果透析液中葡萄糖的含量过高，则可能存在诱发炎症的风险[6]。因此，准确检测透析液中葡萄糖的含量具有重要意义。

YY 0598-2015《血液透析及相关治疗用浓缩物》[7]中规定，取A液、B液和透析用水按照比例进行混合后的透析液为供试液，按照《中国药典》中“葡萄糖氯化钠注射液”项的方法进行测试，以样品旋光度与2.0852相乘，即得供试液量中含水葡萄糖的重量（g）。通常透析液中含水葡萄糖的标示量为1g/L，其检测合格范围即是0.95～1.05g/L（标示量的95.0%～105.0%），对应的旋光度值非常低，对仪器的精密度及稳定性要求非常高，检测过程会存在较大误差。

本文采用了一种改良后的碘量法进行了透析液中葡萄糖含量的检测。碘量法是氧化还原滴定法中应用比较广泛的一种方法，是将待测样品精密加碘滴定液后，边振摇边滴加NaOH试液，在暗处放置一段时间，加稀硫酸，用硫代硫酸钠滴定液滴定，至近终点时，加淀粉指示液继续滴定至蓝色消失，根据滴定液使用量，计算葡萄糖的含量。该方法在检测右旋糖酐40葡萄糖注射液中葡萄糖的含量中被普遍采用[8]。本研究通过对此方法进行重复性、稳定性及回收率实验，考察了方法的可行性，为检测透析液中葡萄糖含量提供了更加可靠的方法。

表1.旋光仪检测透析液和浓缩液中葡萄糖含量(n=6)

1.材料与方法

1.1 试剂试液[9]

硫代硫酸钠滴定液（0.1mmol/L）：称取Na2S2O3·H2O 26g，加无水碳酸钠0.20g，用蒸馏水溶解成1000mL，摇匀。装于棕色玻璃瓶中，置暗处，30d后经过滤并标定其浓度。

碘滴定液（0.05mol/L）：取碘13.0g，加碘化钾36g与水50mL溶解后，加盐酸3滴与水适量使成1000mL，摇匀，用垂熔玻璃滤器滤过。

氢氧化钠试液：取氢氧化钠4.3g，加水溶解，定容至100mL。

表2.专属性实验结果(n=3,%)

表3.重复性实验结果表(n=6,%)

表4.中间重复性实验结果表(n=6,%)

表5.稳定性实验结果表(n=3,%)

稀硫酸：取浓硫酸5.7mL，加水稀释，定容至100mL。

淀粉指示剂：取可溶性淀粉0.5g，溶解至100mL，加热煮沸后冷却。

1.2 样品检测

精密量取透析液100mL，精密加入碘滴定液（0.05mol/L）20mL，滴加氢氧化钠试液3mL（边摇边滴加），暗处放置25min，加稀硫酸3mL，用硫代硫酸钠滴定液（0.1mmol/L）滴定，至淡黄色时，加淀粉指示剂2mL，继续滴至蓝色消失，将滴定结果用空白试验校正，即得。（每1mL碘滴定液（0.05mol/L）相当于9.909mg含水葡萄糖）

2.结果

2.1 旋光仪检测透析液和浓缩液中葡萄糖含量

采用读数精确到0.001°的旋光仪检测同一批样品的浓缩液和透析液中含水葡萄糖的含量，结果显示：在检测透析液时，由于葡萄糖含量太低，对仪器要求的精度及稳定性较高，使得检测的重复性不理想（RSD=4.81%）；而检测浓缩液中葡萄糖时，由于葡萄糖含量较高，检测结果的重复性较好（RSD=0.64%）。《中国药典》通则0621旋光度测定法中对检测葡萄糖含量时说明“使用读数至0.01°并经过检定的旋光计进行检测”，而以上数值是用读数至0.001°的仪器检测的，此仪器更加精密，但检测透析液时RSD值却依然很高，得不到很好的重复性，说明使用旋光仪检测透析液中葡萄糖的结果误差较大。

表6.回收率实验结果表

2.2 碘量法检测透析液中葡萄糖含量方法学试验[10]

2.2.1 专属性实验

配制1g/L的含水葡萄糖溶液和按照处方量加入含水葡萄糖和其他成分的浓缩液A，将上述浓缩液A与浓缩液B按照比例与透析用水混合后，分别使用本法检测葡萄糖液和透析液中的葡萄糖含量，比较检测结果的差异。

检测结果表明：采用此方法检测时，透析液中其他成分氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁、冰醋酸、碳酸氢钠对葡萄糖含量的检测没有影响。

2.2.2 重复性实验

按照上述方法平行6次测定透析液中葡萄糖含量，计算相对标准偏差RSD=0.13%，说明此方法的重复性很好。见表3所示。

不同操作者在不同实验条件下，用不同滴定管进行实验，计算相对标准偏差RSD=0.33%，说明此方法的中间重复性很好。见表4所示。

2.2.3 稳定性实验

连续3d进行检测，RSD=0.16%，说明此方法的稳定性较好[11]。

2.2.4 回收率实验

配制成3个浓度的标准葡萄糖溶液，分别为标示量的80%、100%、120%，用该方法进行检测，计算其回收率。

标示量的80%、100%、120%的平均回收率分别为：100.45%、100.13%、99.87%。结果表明，该方法测定含量回收率较好。

3.讨论

对碘量法检测透析液中葡萄糖含量进行了重复性、稳定性和回收率实验研究，结果表明该方法能够准确检测出透析液中葡萄糖的含量。

值得一提的是，通常所说的葡萄糖的相对分子质量是180，当透析液的葡萄糖浓度低于血浆浓度时，葡萄糖将从血液扩散到透析液中。这里的180指的是无水葡萄糖的分子量，而实际生产中，通常制造商投料的原料是含有一个结晶水的葡萄糖（相对分子质量是198），所以透析液中1g/L葡萄糖的含量指的是含水葡萄糖，应用此方法进行计算的时候需要考虑到这一点。

另外，制造商在生产含糖透析液时，葡萄糖是投加在浓缩液A液中，通过本研究结果可以看出：使用旋光仪进行浓缩液A液中葡萄糖含量的检测时，由于A浓缩液中葡萄糖含量一般在35g/L，比透析液高35倍，所以能够得到很好的重复性，可以使用旋光仪检测法对浓缩液A液中的葡萄糖进行内部质量控制，以确保最终透析液中葡萄糖的含量。