NSCLC患者组织中SIRT2、ProGRP、CHCHD2表达情况与临床病理特征及预后的关系

马永峰，要莉莉，刘 利，张银文，蒋 浩，谢荣景，毛晓博

河北省沧州市人民医院：1.胸外科；2.重症医学科，河北沧州 061000

肺癌属于全球范围内最为常见的恶性肿瘤之一，其发病率和病死率均较高，其中约85%左右的肺癌患者肺癌类型属于非小细胞肺癌(NSCLC)，尽管手术治疗方案是目前对NSCLC进行治疗的最佳方案，但仍约有50%以上的NSCLC患者在确诊后病情已发展至癌症晚期，从而失去手术治愈机会[1]。此外，大部分NSCLC患者在手术后仍会出现复发和转移。因此，积极寻找有效地监测NSCLC患者病情进展的指标，有十分重要的意义[2]。沉默信息调节因子2(SIRT2)属沉默信息调节因子家族成员，可乙酰化修饰多种靶蛋白，还可通过叉头转录因子家族对抗氧化应激反应和调节能量代谢[3]。胃泌素释放肽前体(ProGRP)属胃肠激素，可通过细胞间或自分泌相互作用对肿瘤转移和生长进行调节[4]。CHCHD2为诊断NSCLC的生物学标志物，含有C端CHCH保守结构域和N端线粒体定位序列。有研究指出，CHCHD2具有促进成纤维细胞迁移等生理功能，在人类细胞中CHCHD2可起到促进翻译，改变细胞黏附和加速细胞迁移的作用[5]。但SIRT2、ProGRP、CHCHD2表达水平与NSCLC的关系报道较少，因此本研究拟选择本院收治的NSCLC患者为研究对象，分析SIRT2、ProGRP、CHCHD2在NSCLC患者组织中的表达情况与临床病理特征及预后的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料 经伦理委员会审议并批准，选取本院2016年1月至2017年6月收治的NSCLC患者为研究对象，纳入标准：(1)经术后病理学检查确诊为NSCLC；(2)术前未行化疗或放疗干预；(3)保存完整肿瘤病灶组织标本和癌旁组织标本；(4)临床和随访资料完整，无缺失。排除标准：(1)合并原发性器官功能障碍；(2)合并其他恶性肿瘤；(3)合并其他自身免疫性疾病。依照标准共入组97例，其中男53例，女44例；平均年龄(63.92±9.03)岁；低分化39例、中高分化58例；淋巴结转移34例、无淋巴结转移63例。

1.2方法 取癌旁组织和NSCLC肿瘤组织标本，采用免疫组织化学法对组织中SIRT2、ProGRP、CHCHD2的表达水平进行检测，使用4%甲醛溶液固定标本，使用石蜡常规包埋并做4 μm厚连续切片，并采用免疫组织化学试剂盒对切片进行染色，枸橼酸缓冲液煮沸进行修复，使用二氨基联苯胺和苏木素分别进行显色和复染。由经验丰富的病理科医师进行阅片和判定，在400倍高倍镜下随机选择5个视野阅片，染色强度评分：无着色为0分，着色呈淡黄色为1分，着色呈棕黄色记2分，着色呈棕褐色为3分。阳性细胞评分：<5%为0分，5%～<26%为1分，26%～50%为2分，>50%为3分。染色强度评分和阳性细胞评分之和≥3分记为阳性，<3分记为阴性。

1.3统计学处理 采用SPSS20.0统计软件进行数据处理分析，计数资料以例数和百分率表示，组间比较采用χ2检验；采用Spearman相关分析各指标与患者临床病理特征的关系；随访患者3年，记录患者生存及死亡情况，采用Cox风险比例回归模型分析影响预后的因素。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1肿瘤组织和癌旁组织中各指标阳性表达情况 结果显示，NSCLC患者肿瘤组织中SIRT2、ProGRP、CHCHD2阳性表达率均高于癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 肿瘤组织和癌旁组织中各指标阳性表达情况[n(%)]

2.2不同临床特征患者肿瘤组织中各指标阳性表达情况 结果显示，不同年龄和性别患者肿瘤组织中各指标表达比较，差异无统计学意义(P>0.05)，不同分化程度、淋巴结转移情况和肿瘤最大径患者肿瘤组织中SIRT2、ProGRP、CHCHD2阳性表达率比较，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 不同临床特征患者肿瘤组织中各指标阳性表达情况[n(%)]

2.3患者临床特征与肿瘤组织中各指标关系 结果显示，NSCLC患者肿瘤组织中SIRT2、ProGRP、CHCHD2阳性表达与患者肿瘤分化程度、淋巴结转移和肿瘤最大径均呈正相关(P<0.05)，见表3。

表3 患者临床特征与肿瘤组织中各指标关系

2.4不同预后患者各指标检测结果 结果显示，随访3年死亡患者SIRT2、ProGRP、CHCHD2阳性表达率明显高于存活患者，差异有统计学意义(P<0.05)，见表4。

表4 不同预后患者各指标检测结果[n(%)]

2.5各指标与患者预后的关系 结果显示，SIRT2、ProGRP、CHCHD2阳性表达是影响NSCLC患者预后的独立危险因素(P<0.05)，见表5。

表5 各指标与患者预后质量的关系

3 讨 论

有学者指出，NSCLC的发生、发展是一系列复杂的病理变化过程，多种因素均参与该过程[6]。目前临床中尚缺乏有效、特异度高的指标对患者的预后和病理特征进行分析，因此NSCLC的发生、发展机制仍有待进一步研究[7]。SIRT2是人类Ⅲ类组蛋白脱乙酰酶，位于19号染色体上，可通过去乙酰化对肿瘤相关基因进行调控，影响肿瘤相关基因的生物活性，进而调控其生物学功能[8]。有研究指出，组蛋白去甲基化酶基因启动子区域与SIRT2结合后可有效抑制肿瘤生长和细胞增殖[9]。SIRT2还可抑制抗氧化蛋白活性，增加活性氧诱导乳腺癌细胞DNA损伤的敏感性，有效起到加速乳腺癌细胞凋亡的作用[10]。在多种肿瘤的发生、发展过程中SIRT2均起到重要调控作用。

胃泌素释放肽(GRP)最初分离自猪非窦部胃上皮细胞，属铃蟾素类似物，后在人胃肠神经纤维、脑、胎儿肺神经内均检测到GRP的表达[11]。有研究指出，多种肿瘤组织所分泌的GRP是储存在细胞质高尔基体内，并在相关刺激的作用下向细胞外分泌和释放，并可与细胞膜上GRP受体有效结合，具有促进肿瘤细胞增殖的作用[12]。但GRP半衰期短，检测难度大，ProGRP是GRP的前体结构，可反映GRP的水平，具有较高的临床应用价值[13]。CHCHD2是保守蛋白，人鼠CHCHD2蛋白有87%的保守序列，有研究指出，CHCHD2的C端CHCH结构域定位于线粒体膜间隙或内膜，但其生物学功能尚未完全揭示[14]。在肺鳞癌和肺腺癌病灶组织中CHCHD2阳性表达率异常升高，且在多种癌组织中CHCHD2基因阳性表达率均异常升高[15]。

本研究结果显示，NSCLC患者肿瘤组织中SIRT2、ProGRP、CHCHD2阳性表达率高于癌旁组织，SIRT2、ProGRP、CHCHD2可作为肿瘤组织和癌旁组织鉴别的差异蛋白。本研究进一步分析SIRT2、ProGRP、CHCHD2与患者病理特征的关系，结果显示，不同分化程度、淋巴结转移情况和肿瘤最大径患者肿瘤组织中SIRT2、ProGRP、CHCHD2阳性表达率比较，差异均有统计学意义(P<0.05)，进一步采用Spearman相关性分析结果显示，NSCLC患者肿瘤组织中SIRT2、ProGRP、CHCHD2阳性表达与患者肿瘤分化程度、淋巴结转移和肿瘤最大径均呈正相关。结果提示，随着SIRT2、ProGRP、CHCHD2阳性表达率升高，NSCLC患者病理特征可能出现恶化倾向，因而其可作为潜在的评估患者预后的重要指标。本研究进一步分析发现，随访3年死亡患者SIRT2、ProGRP、CHCHD2阳性表达率明显高于存活患者，而Cox风险比例回归模型分析结果显示，SIRT2、ProGRP、CHCHD2阳性表达是影响NSCLC患者预后的独立危险因素。分析认为，SIRT2、ProGRP、CHCHD2可通过加速患者病理特征恶化而引起NSCLC患者预后差，SIRT2、ProGRP、CHCHD2可作为评估患者预后质量的独立性因素。但本研究临床样本量较少，且所有患者均来自同一地区，可能存在一定的地域偏差，有待继续追踪分析。

综上所述，NSCLC患者术后容易复发和转移，积极监测对于患者的病情进展意义重大，本研究发现，SIRT2、ProGRP、CHCHD2阳性表达与NSCLC肿瘤分化程度、淋巴结转移和肿瘤最大径呈正相关，因此，临床上通过检测上述指标对患者及时进行干预，从而降低NSCLC患者术后复发和转移的可能性。