阴道微生态评价在女性下生殖道感染的临床应用指导

沙丽华，刘华兰，周小龙

（惠阳三和医院，广东 惠州）

0 引言

育龄期女性的阴道内存有各种微生物，例如：双歧杆菌、肠球菌、链球菌、乳杆菌、大肠杆菌、支原体、白假丝酵母菌、原虫等，均寄生于阴道内与宿主、周围环境之间互相制衡，使阴道内微生态体系维持在动态平衡的状态。大量研究也证实[1]，在临床上无论是病因明确的阴道炎还是原因不明的阴道炎均存有不同程度阴道微生态失衡问题。因此，阴道微生态评价体系在阴道感染性疾病诊治中的应用越来越广泛。现为进一步明确阴道微生态评价在女性下生殖道感染诊断中的临床应用价值，特作如下研究。

1 资料和方法

1.1 临床资料

选择2018 年1 月至2020 年1 月在我院就诊的200 例下生殖道感染女性患者为研究对象，均为女性，年龄在20～35 岁之间，平均（25.5±3.6）岁，病程1～13 个月，平均（6.09±4.66）个月，所有患者均伴不同程度白带增多、外阴瘙痒、异味等症状，且在纳入研究前2 周内未曾使用抗菌药物，排除妊娠、哺乳期使用阴道药物，或伴有子宫器质性病变，或检测前3d 有性生活，处于月经期的患者。

1.2 诊断方法

1.2.1 仪器和试剂

PREVITMColor Gram 全自动革兰氏染色仪（购自法国生物梅里埃公司）；Conmet-400 多功能高倍镜检分析系统（购自山东仕达思生物公司）；阴道微生态检测试剂盒（购自青岛市三凯医学科技有限公司），其包括β-葡萄糖醛酸苷酶、唾液酸苷酶、白细胞酯酶、过氧化氢、酸碱度（PH 值）、凝固酶。

1.2.2 样本采集

妇科医师在患者的阴道侧穹隆取适量阴道分泌物置于无菌试管，以0.9%氯化钠溶液稀释，2h 内完成检验。对于无性生活史的患者，用棉签在阴道侧壁1/3 取样本即可。

1.2.3 样本检测

将试剂盒从（2～8）℃ 取出，平衡到常温（10～30）℃开始使用。撕掉铝箔包装，取出反应装置并轻轻揭掉铝箔条，将反应装置避光放置。用棉签采集样品，放入软试管中，加400μL 稀释液，反复挤压棉签，使样品溢出。在反应装置的五个孔中每孔滴加一滴稀释后的样品，每滴约35μL，之后在“唾液酸苷酶”反应孔中滴加一滴显色液A。在37℃环境中反应7 分钟后在“凝固酶”反应孔中滴加一滴显色液B，让其继续反应3 分钟，然后在10 分钟内判读结果。过氧化氢（反应装置第一个反应孔）：显红色、紫色或蓝紫色为阴性，显蓝色阳性。唾液酸苷酶（反应装置第二个反应孔）：不显色为阴性，显紫色为阳性，强阳性时显蓝色。白细胞酯酶（反应装置第三个反应孔）：不显色为阴性，显蓝色或绿色为阳性。β-葡萄糖醛酸苷酶（反应装置第四个反应孔）不显色为阴性，显蓝色或绿色为阳性。凝固酶（反应装置第五个反应孔）：不显色或黄色为阴性，紫色为阳性。同时应用pH 试纸测到阴道样本pH值。此外，对样本制作涂片在显微镜检测阴道微生态情况。

1.2.4 镜检操作

①菌群多样性：Ⅰ级：在油镜下每视野可见1-3 种细菌菌群，Ⅱ级：在油镜下每视野可见4-6 种细菌菌群，Ⅲ级：在油镜下每视野可见7-9 种细菌菌群，Ⅳ级：在油镜下每视野可见10 种或以上细菌菌群。②菌群密度：Ⅰ级：在油镜下每视野可见1-10 个细菌数，Ⅱ级：在油镜下每视野可见10-100 个细菌数，Ⅲ级：在油镜下每视野可见100-1000 个细菌数，Ⅳ级：在油镜下每视野可见1000 个或以上细菌数。

1.3 阴道微生态判断标准

①正常阴道微生态：菌群多样性在Ⅱ～Ⅲ级之间，菌群密度在Ⅱ～Ⅲ级之间，阴道清洁度在Ⅰ～Ⅱ度之间，优势菌种是乳酸杆菌，过氧化氢、唾液酸苷酶、白细胞酯酶均为阴性，且阴道pH 值少于4.5。②阴道清洁度，见表1。

表1 阴道清洁度评定标准

1.4 统计学方法

采用统计学SPSS 23.0 软件，计数资料以率描述，经卡方检验；计量资料以（±s）表示，予以样本t检验，以P＜0.05 为差异存在统计学意义。

2 结果

200 例患者中混合感染122 例（61.0%），单一感染78例（39.0%）。而且，混合感染与单一感染在阴道清洁度、菌群密集Ⅳ级、菌群多样性Ⅱ/ Ⅲ级、优势菌、pH 值、过氧化氢（+）、白细胞酯酶（+）、唾液酸苷酶活性（+）的比例对比有显著的差异（P＜0.05），见表2。

表2 单一感染与混合感染阴道微生态检测结果对比

续表2

3 讨论

下生殖道感染为妇科最常见的疾病，发病率高，病因复杂，可引起阴道内微生态菌群失衡，使阴道分泌物增加，进而对给妇女的身心健康、生活质量造成严重影响。因此，快速、准确诊断本病对早期治疗，促进患者早日康复意义重大。目前在临床上，女性下生殖道感染的诊断通常采用常规镜检阴道分泌物进行检查，再根据病原体的类型予以针对性治疗，尽管常规镜检查操作简单，但受检验医师水平及外界影响较大，造成漏诊率较高，难以为临床提供准确的参考。

现代医学报道[2]，下生殖道感染发生的主要原因是阴道菌群失调，致使阴道内环境pH 值、清洁度出现异常改变，诱发内源性致病菌、外源性有害微生物侵入阴道内寄生，进而出现炎症反应。而阴道微生态评价则是通过对阴道分泌液的菌群多样性、密集度、有无优势菌进行客观定性分析，进而便于临床了解受检者阴道内菌群分布状态，同时通过检测阴道酸碱度、过氧化氢、白细胞酯酶、唾液酸苷酶等阴道乳酸杆菌主要成分活性来判断受检者阴道内乳杆菌的产酸功能是否正常。当前有研究证实[3]，阴道微生态评价灵敏度，特异度高，可以准确诊断单一阴道感染，而且可及时发现各种混合性阴道感染，对评价杀灭病原体后阴道微生态恢复也有重大的意义。本研究结果也显示。200 例患者中混合感染122 例（61.0%），单一感染78 例（39.0%），而且混合感染与单一感染在阴道清洁度、菌群密集Ⅳ级、菌群多样性Ⅱ/Ⅲ级、优势菌、pH 值、过氧化氢（+）、白细胞酯酶（+）、唾液酸苷酶活性（+）方面有显著的差异，表明了女性下生殖道感染以混合感染为主，且阴道微生态失衡较为严重，而采用阴道微生态评价可快速、准确评估下生殖道感染患者阴道微生态状况，为临床准确诊治疾病提供可靠的实验室依据。