基于正交试验优选脉安颗粒天然澄清剂精制工艺

尚海宾，王杰，张文标

（1.白云山汤阴东泰药业有限责任公司，河南安阳 456150；2.河南信心药业有限公司，郑州 450000；3.河南天浩机械设备有限公司，郑州 450100）

中药制剂脉安颗粒主治功能为：治疗高脂蛋白血症。用于降低血清胆固醇，防止动脉粥样硬化，对降低甘油三酯，β-脂蛋白也有一定作用[1]。 脉安颗粒的山楂、麦芽水提液主要含黄酮类，尚含齐墩果酸等有机酸、亚油酸等脂肪酸、果胶、鞣质、糖类、蛋白质及维生素C 等，近年来研究发现这些大分子物质中，有机酸、多糖、多肽等具有一定治疗价值；山楂果胶作为一种天然的水溶性膳食纤维，应用于保健食品和药品中起到润肠通便、清除体内重金属等作用[2-5]；研究发现，山楂果胶具有显著的体内外抗氧化活性[6]，能够有效清除自由基，此外还具有抗肿瘤抗炎作用[7]。

ZTC1+1 天然澄清剂为一种以天然多糖等为原料制成的天然高分子物质，安全无毒的新型食品添加剂，不引入异味，具有一定的矫味作用。由 A 组分、B 组分组成，一组分起主絮凝作用 ，另一组分起辅助絮凝作用，除杂质、澄清效果好。ZTC1+1 天然澄清剂在溶液中不残留，可降低药液黏度，较好保留有效成分[8-9]，为减少中药提取液有效成分在精制醇沉法制备过程中的损失，充分利用其药物疗效，基于正交试验，优选提取液加入ZTC1+1 Ⅱ型天然澄清剂的料液比例、提取液温度、天然澄清剂用量，为脉安颗粒及相关中药制剂的研发，提供必要的参考数据。

1 实验材料

1.1 设备

ESJ-300 实验室搅拌分散机、TD-100 多功能微型提取浓缩机组、HH-S 型数显水浴锅、电加热套；N-3000N-3010-10L 旋转蒸发仪、SHB-III 型循环水式多用真空泵、CH-10 槽型混合机、YK-60 摇摆制粒机、CT-C 热风循环烘箱。

1.2 物料

山楂、麦芽、药用乙醇、玉米淀粉、糊精、蔗糖等原料、辅料，经检验符合中国药典2020 版质量标准。ZTC1+1 Ⅱ型天然澄清剂中草药澄清剂为天津振天成科技有限公司生产。

2 方法与结果

2.1 ZTC1+1 Ⅱ型天然澄清剂溶液制备

2.1.1 A 组分溶液制备方法

量取纯化水900 mL 置不锈钢桶，再称取ZTC1+1 天然澄清剂A 组分300 g，使用搅拌分散机慢速搅拌，边搅拌边加入A 组分至糊状，再加纯化水至30 kg，慢速搅拌均匀，溶胀时间不低于24 h，即得1% A 组分胶状溶液。

2.1.2 B 组分溶液制备方法

量取纯化水450 mL 置不锈钢桶，加醋酸4.5 mL搅匀配制成1%醋酸溶液，再称取ZTC1+1 天然澄清剂B 组分150 g，使用搅拌分散机慢速搅拌，边搅拌边加入B 组分至糊状，再配制1%醋酸溶液加至15 kg，慢速搅拌均匀，溶胀时间不低于24 h，搅匀，即得1% B 组分胶状溶液。

2.1.3 ZTC1+1 Ⅱ型天然澄清剂加入方法

取脉安颗粒水提浓缩药液，按ZTC1+1 Ⅱ型天然澄清剂使用说明，先加入B 组分，后加入A 组分（澄清剂用量配比即B∶A=2∶1，加A 时不需考虑温度的因素），加料60 min 后再搅拌一次，静置6 h 虹吸上清液（剩下的混悬液用300 目筛网过滤）用高速离心机进行液固分离。

2.2 精制工艺的因素水平确定

称取药材山楂3.5 kg、麦芽3.5 kg（脉安颗粒500 袋/每袋20 g 量），经挑选、山楂粗碎、置多功能微型提取浓缩机组浸泡30 min，第一次加入8 倍量的水、提取60 min，第二次加入6 倍量的水、提取30 min，第三次加入4 倍量的水、提取30 min，提取液真空减压浓缩，浓缩液置不锈钢桶，先加入B组分溶液，后加入A 组分溶液（B∶A=2∶1），选择提取液料液比（A）、药液温度（B）、澄清剂加入量（C）3 个影响因素，每个因素设3 个水平。脉安颗粒精制工艺的正交试验因素水平如表1所示。

表1 脉安颗粒精制工艺的正交试验因素水平Tab.1 Orthogonal experimental factors of Maian granule refining process

2.3 实验方法与结果

精制工艺采用L9（3）4 正交表安排试验，以精制后提取液外观、浸膏的枸橼酸含量（g/mg）、浸膏的金丝桃苷含量（g/mg）为考察指标。外观质量以提取液澄清度、色泽进行评分，设澄清度系数为 1，色泽系数为 1。各项分为3 个档次，每个档次为 1 个号，满分为6[10]。澄清度按浑浊、澄清、非常澄清；色泽按褐色、棕褐色、棕色，取 2 项平均值相加作为外观评价分值。正交试验安排及结果如表2所示，药液外观方差分析结果如表3所示，浸膏枸橼酸含量方差分析结果如表4所示，浸膏金丝桃苷含量方差分析结果如表5所示。

方差分析：

从正交试验结果和方差分析得知：各因素、水平之间无显著差异，影响最大的因素为C，即澄清剂加入量，其次为提取液浓缩后的料液比，再次为加入澄清剂时的药液温度。影响因素的主次顺序为C ＞A ＞B。最佳精制工艺为A2B2C3，即提取液料浓缩至药材∶药液=1∶3，药液温度70 ℃和80 ℃药液外观检查无明显差异，加入澄清剂的用量为15%，即B组分∶A 组分=2∶1，B 组分用量为10%、A 组分用量为5%，提取液为棕色澄清液体。

方差分析：

从正交试验结果和方差分析得知：各因素、水平之间无显著差异，影响最大的因素为A，即提取液浓缩后的料液比，其次为澄清剂加入量，再次为加入澄清剂时的药液温度。影响因素的主次顺序为A ＞C ＞B。最佳精制工艺为A3B3C3，即提取液料浓缩至药材∶药液=1∶5，药液温度80 ℃，加入澄清剂的用量为15%，即B 组分∶A 组分=2∶1，B 组分用量为10%、A 组分用量为5%，提取液为棕色澄清液体。药液浓缩后浸膏的枸橼酸含量高。

方差分析：

从正交试验结果和方差分析得知：各因素、水平之间无显著差异，影响最大的因素为A，即提取液浓缩后的料液比，其次为加入澄清剂时的药液温度，再次为澄清剂加入量。影响因素的主次顺序为A ＞B ＞C。最佳精制工艺为A2B2C1，即提取液料浓缩至药材∶药液=1∶3，药液温度70 ℃，加入澄清剂的用量为9%，即B 组分∶A 组分=2∶1，B 组分用量为6%、A 组分用量为3%，提取液为棕色澄清液体。药液浓缩后浸膏的金丝桃苷含量高。

2.4 结果分析

基于精制后药液的外观检查、浓缩后浸膏的枸橼酸含量检查、金丝桃苷含量检查等综合因素，综合考虑脉安颗粒提取液精制效果，调整精制工艺为：提取液料液比（g∶g）1∶3、提取液温度：70 ℃、澄清剂加入量15%，然后再进行中试验证实验。

2.5 脉安颗粒精制工艺中试验证

2.5.1 精制工艺中试验证

按以上拟定的精制工艺进行3 次中试实验验证，每次按脉安颗粒每袋装量20 g，制备1 000 袋，称取药材山楂7 kg、麦芽7 kg，经挑选、山楂粗碎、置多功能微型提取浓缩机组浸泡30 min，第一次加入10 倍量的水、提取60 min，第二次加入6 倍量的水、提取60 min，提取液真空减压浓缩至料液比（g∶g）1∶3，浓缩液置不锈钢桶，提取液温度：70 ℃、澄清剂加入量15%（先加入B 组分溶液10%，后加入A 组份溶液5%，澄清剂用量配比B∶A=2∶1）边搅拌边缓缓加入，加料60 min 后再搅拌一次，静置6 h虹吸上清液（剩下的混悬液用300 目筛网过滤）用高速离心机进行液固分离，浓缩至稠膏。

表2 脉安颗粒精制工艺的正交试验安排及结果Tab.2 Orthogonal experimental arrangement and results of Maian granule refining process

表3 药液外观方差分析Tab.3 Analysis of appearance variance

表4 枸橼酸含量方差分析Tab.4 Analysis of variance of citrate content

表5 金丝桃苷含量方差分析Tab.5 Analysis of variance of hypericin content

2.5.2 合格标准

提取液外观检查：应为棕色澄清液体。

浸膏相对密度：（热测）1.3±0.1。

浸膏收率：脉安颗粒浸膏收率不低于30%。

浸膏含量测定：浸膏含总酸以枸橼酸（C6H8O7）计，不得少于50 mg/g。浸膏含总黄酮以金丝桃苷（C21H20O12）计，不得少于15 mg/g。

2.5.3 精制工艺中试检测结果对比

中试实验3 次，对提取液外观检查、浸膏密度、浸膏收率以及浸膏的枸橼酸含量、金丝桃苷含量进行检测，其检测结果如表6所示。

表6 精制工艺中试检测结果Tab.6 Test results of refining process

结论：通过精制工艺中试检测结果的对比得出：提取液浓缩的料液比（g∶g）1∶3，提取液温度：70 ℃、澄清剂加入量15%等关键工艺参数CPP 重现性好。提取液外观检查、浸膏密度、浸膏收率、浸膏的枸橼酸含量、金丝桃苷含量等各关键质量属性CQA 稳定性好。

2.6 脉安颗粒制粒中试验证

2.6.1 制粒工艺中试验证

取脉安颗粒浸膏加淀粉200 g：糊精100 g：糖粉1 500 g 置槽型混合机混匀，先加乙醇润湿，再加70%乙醇制软材，摇摆颗粒机14 目制粒，热风循环烘箱60 ℃以下低温干燥[11]6 h，14 目整粒。每次制备200 袋（2 000 g）按每袋装10 g，连续3 次进行制粒中试工艺验证。

2.6.2 合格标准

颗粒性状：应为棕黄色至棕色的颗粒；味甜、微酸。

颗粒外观：颗粒均匀，色泽一致。

颗粒水分：＜5.0%。

溶化性：应全部溶化，不得有异物，焦屑。

鉴别：（1）应检出麦芽药材。（2）供试品色谱应具有与对照品保留时间相同的色谱峰。

含量检查：本品每袋含总酸以枸橼酸（C6H8O7）计，不得少于160 mg。本品每袋含总黄酮以金丝桃苷（C21H20O12）计，不得少于40 mg。

2.6.3 制粒工艺中试检测结果对比

中试实验3 次，对颗粒性状、颗粒外观、颗粒水分、溶化性、鉴别、枸橼酸含量、金丝桃苷含量进行检测，其检测结果如表7所示。

表7 制粒工艺中试检测结果Tab.7 Test results of granulation process

结论：结果表明，通过对脉安颗粒制粒工艺中试结果的对比得出：70%乙醇制软材，14 目制粒，60 ℃以下低温干燥6 h，14 目整粒等关键工艺参数CPP 重现性好。颗粒性状、颗粒外观、颗粒水分、溶化性、鉴别、颗粒的枸橼酸含量、金丝桃苷含量等各关键质量属性CQA 稳定性好。

3 结束语

实验过程发现：使用搅拌分散机慢速搅拌，边搅拌边加入天然澄清剂有助于天然澄清剂溶液的配制。料液比1∶1 加入澄清剂，药液澄清效果不好，料液比1∶3 与料液比1∶5 加入澄清剂，药液澄清效果差异均良好，本着节约资源、节约成本考虑，可采用料液比1∶3。药液70 ℃加入B 组分静置60 min，边搅拌边加入A 组分，不用继续保温即可获得预期的澄清效果。

本次工艺研究优选的脉安颗粒提取液精制工艺为：提取液浓缩后料液比（g∶g）1∶3、提取液温度：70 ℃、澄清剂加入量15%（先加入B 组分溶液10%，后加入A 组分溶液5%，边搅拌边缓缓加入），加料60 min 后再搅拌一次，静置6 h 虹吸上清液（剩下的混悬液用300 目筛网过滤）用高速离心机进行液固分离，浓缩至稠膏，脉安颗粒提取液精制工艺参数重现性好，中试工艺稳定，为ZTC1+1 天然澄清剂在中药颗粒剂、口服液、糖浆剂、合剂等相关中药制剂精制工艺步骤的应用，提供了参考数据。

对于中药制剂使用ZTC1+1 天然澄清剂在节约能源消耗、降低生产成本、提高生产效率等方面进行精制工艺对比是否具有优势，还有待做进一步相应的工艺研究。