人表皮生长因子受体在脑胶质瘤中的表达水平及与增殖潜能相关性分析

尚成生 刘济源

1.沈阳医学院附属第二医院神经外科，辽宁沈阳 110000；2.中国医科大学附属第一医院神经外科，辽宁沈阳 110000

表皮生长因子受体（EGFR）在恶性肿瘤患者体内多数呈现过度表达，被认为是恶性肿瘤患者预后、远处转移等的有效预测因素[1]。临床治疗中亦有多种药物选择性抑制EGFR，以阻断EGFR 信号转导通路进而达到抑制肿瘤细胞增殖的目的[2]。在针对恶性肿瘤实施靶向药物干预时，应先进行肿瘤组织内EGFR 基因型检测，进而优化恶性肿瘤患者的生物治疗效果[3]。降解细胞外基质在恶性肿瘤细胞的增殖以及远处转移过程中均发挥一定作用[4]，是治疗恶性肿瘤细胞侵袭性生长的重要指标。基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）为最主要的降解细胞外基质之一[5]，与脑胶质瘤之间的关系最为密切，其表达水平与胶质瘤细胞增殖与侵袭性均存在密切相关性[6]。为更好地提高脑胶质瘤患者的临床治疗效果，预测患者预后，本研究主要探讨EGFR 在人脑胶质瘤中的表达，并分析其与肿瘤细胞增殖潜能之间的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2018年2月～2020年1月沈阳医学院附属第二医院和中国医科大学附属第一医院收治的160例脑胶质瘤患者为研究对象，所有入组者均通过手术治疗及术后病理组织活检确诊与分期。本研究经医院医学伦理委员会审核批准。纳入标准：年龄18～50岁；初次手术；既往体检及精神状况正常。排除标准：其他部位恶性肿瘤；远处转移；精神疾患；严重感染；心、肺、肝、肾功能不全等。按照病理分期分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期，各40例。Ⅰ期中，男28例，女12例；年龄18～50岁，平均（38.6±2.5）岁；病程1个月～3年，平均（1.2±0.1）年。Ⅱ期中，男27例，女13例；年龄18～50岁，平均（38.5±2.6）岁；病程1个月～3年，平均（1.3±0.1）年。Ⅲ期中，男26例，女14例；年龄18～50岁，平均（38.7±2.4）岁；病程1个月～3年，平均（1.3±0.1）年。Ⅳ期中，男29例，女11例；年龄18～50岁，平均（38.7±2.5）岁；病程1个月～3年，平均（1.1±0.1）年。各期的性别、年龄及病程等一般资料比较，差异无统计学意义（P＜0.05）。

1.2 方法

通过采用Primer 5 软件进行EGFR 基因相关外显子性PCR 引物设计，为5′-TCCATAGCCGGGAACGTCGA-3′，下游引物为5′-ACAAGCTGTGCCAGACGTTG-3′，通过扩增、缓冲、预变性、变性及退热等免疫组化法进行测定，抗体为染色鼠抗人EGFR 多克隆抗体，试剂盒由北京中山生物公司提供；MMP-2和MMP-9则通过平均荧光强度进行表达。

1.3 观察指标

比较不同分期患者的EGFR表达阳性情况及MMP-2、MMP-9表达平均荧光强度，分析EGFR表达水平与MMP-2和MMP-9表达荧光强度的相关性。

1.4 评定标准

结果判断：EGFR 阳性染色以细胞膜与细胞质染色为标准，通过观察棕色或褐色颗粒状着色情况进行EGFR 染色阳性率的判断；MMP-2和MMP-9 检测均采用化学荧光法，表达水平通过平均荧光强度进行评估。

1.5 统计学方法

采用SPSS 20.0 统计学软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用t 检验，多组间均数比较使用方差分析，计数资料用频数或百分率表示，采用χ2检验，相关性分析采用Pearson法，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同分期患者EGFR表达阳性情况的比较

Ⅰ期患者的EGFR表达阳性率为10.0%（4/40），低于Ⅱ期的47.5%（19/40）、Ⅲ期的55.0%（22/40）及Ⅳ期的60.0%（24/40），差异有统计学意义（P＜0.05）；Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ期的EGFR表达阳性率比较，差异无统计学意义（χ2=1.277，P=0.528）。

2.2 不同分期患者MMP-2和MMP-9表达平均荧光强度的比较

Ⅳ期患者的MMP-2和MMP-9表达平均荧光强度高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期（P＜0.05），Ⅲ期患者的MMP-2和MMP-9表达平均荧光强度高于Ⅰ、Ⅱ期（P＜0.05），Ⅱ期患者的MMP-2和MMP-9表达平均荧光强度高于Ⅰ期（P＜0.05）（表1）。

表1 不同分期患者MMP-2和MMP-9表达平均荧光强度的比较（U，±s）

表1 不同分期患者MMP-2和MMP-9表达平均荧光强度的比较（U，±s）

与Ⅰ期比较，*P＜0.05；与Ⅱ期比较，#P＜0.05；与Ⅲ期比较，&P＜0.05

分期例数 MMP-2 MMP-9Ⅰ期Ⅱ期Ⅲ期Ⅳ期F值P值40 40 40 40 15.6±1.5 18.9±1.8*23.8±2.3*#28.9±2.6*#&15.928 0.000 28.9±2.6 30.5±3.3*33.8±3.8*#41.5±4.2*#&26.362 0.000

2.3 EGFR表达水平与MMP-2和MMP-9表达平均荧光强度的相关性分析

EGFR表达水平与MMP-2 表达平均荧光强度成正相关（r=0.6398，P=0.000），与MMP-9表达平均荧光强度亦成正相关（r=0.7105，P=0.000）。

3 讨论

恶性无序增殖及侵袭性生长为脑胶质瘤的主要表现，被认为是导致脑胶质瘤患者治疗失败及发生严重并发症的主要原因[7]，故针对脑胶质瘤患者需将其显著的分子遗传学特征进行总结分析，明确其与患者预后的相关性，从而更有效地指导临床治疗[8]。胶质瘤患者体内EGFR 的扩增及过表达与其恶性程度及临床分期存在密切相关性[9]。另外，恶性肿瘤细胞的侵袭性亦与基质金属蛋白酶（MMP）之间存在一定相关性[10]。

本研究对不同分期患者的EGFR表达阳性情况进行比较，结果显示，Ⅰ期患者的EGFR表达阳性者比例低于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期（P＜0.05），提示脑胶质瘤患者分期越低，其EGFR表达阳性率越低，甚至可出现阴性表达。另外，Ⅲ期患者的MMP-2和MMP-9表达平均荧光强度高于Ⅰ、Ⅱ期患者（P＜0.05），Ⅱ期患者的MMP-2和MMP-9表达平均荧光强度高于Ⅰ期患者（P＜0.05），提示脑胶质瘤患者分期越高，体内MMP-2和MMP-9表达的平均荧光强度越大。最后分析发现，EGFR表达水平与MMP-2 及MMP-9表达平均荧光强度成正相关（P＜0.05）。

针对脑胶质瘤患者实施生物治疗前EGFR 基因检测是必做项目，其对拟定靶向药物治疗方案，预测靶向药物治疗效果具有较理想的指导价值[11-12]。EGFR在体内能产生同源二聚体，进而导致酪氨酸激酶磷酸化，并通过信号传导，影响肿瘤细胞内、细胞核内相关基因表达及功能，导致细胞的生长失控，出现恶性增殖表现，被认为是脑胶质瘤病变增殖能力的相关指标[13-15]，尤其是对于脑胶质瘤患者，提高结合细胞黏附分子从而促进恶性胶质细胞向周围正常脑组织扩散，进而导致恶性程度增高、远处侵袭等表现[16]。同时神经细胞在MMP-2 及MMP-9 等作用下，将脑胶质细胞的基底膜裂解为孔隙状结构，改变细胞结构完整性，导致细胞无序生长，并向正常脑组织侵犯，其表达水平随脑胶质瘤恶性程度的升高而增加，已被认为是脑胶质瘤病变侵袭性的重要指标[17-18]。

综上所述，脑胶质瘤患者随着病变分期的增高，EGFR表达阳性率明显增高，MMP-2 及MMP-9 平均荧光强度显著增高，且EGFR表达水平与MMP-2和MMP-9表达平均荧光强度均成正相关，两者均与脑胶质瘤疾病增殖潜能存在密切相关性。