穿心莲有效成分的提取工艺研究

郭佳佳，曹智威，杜鸿章，冯亚莉

（郑州工业应用技术学院 药学与化学工程学院，河南新郑 451100）

穿心莲一般指爵床科植物穿心莲[Andrographis paniculate（Birm. f.）Ness]的干燥地上部分[1]，药用叶或全草，秋初茎叶茂盛时采割，晒干。穿心莲性寒、味苦，归心、肺、大肠、膀胱经，具有清热解毒、凉血、消肿之功效，被广泛用于治疗多种感染性疾病及毒蛇咬伤[2-3]。现代药理研究表明，穿心莲还具有抗癌、抗病毒、抗肿瘤及治疗糖尿病等作用[4-6]。穿心莲的主要生物活性成分是二萜内酯类和黄酮类，其中以穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的药理作用最为广泛。因此，穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯的含量是评价穿心莲药材质量的重要指标[7]。由于穿心莲内酯在水溶液中易水解、开环，异构化为脱水穿心莲内酯[8]。为更好地开发和利用穿心莲药材，对该药材中脱水穿心莲内酯进行薄层色谱鉴别、紫外分析及含量测定的研究，以期为中药材穿心莲的质量控制提供技术参考。

1 材料与方法

1.1 主要仪器与试剂

穿心莲购于河北一禾药业有限公司，经郑州工业应用技术学院谢新年教授鉴定为爵床科植物穿心莲的干燥地上部分，粉碎后备用。

对照品脱水穿心莲内酯（批号0854-200204，纯度≥98%），购自中国食品药品检定研究院；蒸馏水、超纯水，自制；甲醇、乙醇，色谱级，天津市科密欧化学试剂有限公司；其他所用试剂和溶剂均为分析纯。

UV-2550型紫外-可见分光光度计，日本岛津公司；HPLC-1260高效液相色谱仪，美国安捷伦科技有限公司；DAD检测器：安捷伦色谱工作站；色谱柱：SB-C18柱；SQP电子天平，赛多利斯科学仪器公司；超声波清洗机，济南巴克超声波科技有限公司；RE-52AA型旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；SHSL调温电热套，常州翔天实验仪器厂；HH-2数显恒温水浴锅，常州普天仪器制造有限公司；SHZ-D（Ⅲ）循环水式多用真空泵，天津华鑫仪器厂；LG10-2.4A离心机，深圳永业昌机电有限公司；FW177中药粉碎机，天津市泰斯特仪器有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 提取方法

（1）水提法。取干燥穿心莲粗粉10.00 g，以蒸馏水为溶剂，电热套煎煮提取2次，溶剂用量为10倍量，时间为2.0 h，合并煎煮液，静置30 min，抽滤，将滤液在水浴锅上（96 ℃）浓缩成流浸膏，于70 ℃条件下干燥成干浸膏，称重。

（2）水提醇沉法。取干燥穿心莲粗粉10.00 g，以蒸馏水为溶剂，回流提取2次，溶剂用量为10倍量，时间为2.0 h，合并煎煮液，静置30 min，抽滤，浓缩，加入乙醇使醇含量为60%，静置24 h，抽滤，滤液浓缩成流浸膏，再干燥成干浸膏，称重。

（3）醇提法。取干燥穿心莲粗粉10.00 g，以85%乙醇为溶剂，回流提取2次，溶剂用量为10倍量，时间为2.0 h，合并煎煮液，抽滤，滤液浓缩成流浸膏，再干燥成干浸膏，称重。

（3）碱提酸沉法。取干燥穿心莲粗粉10.00 g，分别用0.5%、0.04%、0.01%的碳酸钠碱水煎煮提取3次。溶剂用量分别为10、6、4倍量，时间分别为2.0 h、2.0 h、1.5 h，合并提取液，用盐酸调pH至中性，再浓缩干燥成干浸膏，称重。

（4）超声提取法。取干燥穿心莲粗粉10.00 g，加85%的乙醇200 mL，浸泡30 min，超声处理30 min，过滤，残渣用适量85%乙醇洗涤3次，洗液并入滤液中，浓缩干燥成干浸膏，称重。

1.2.2 紫外分光光度法鉴别

标准品溶液的制备[1]：精密称定脱水穿心莲内酯标准品1.00 mg，加甲醇制成浓度为1 mg/mL的溶液，作为脱水穿心莲内酯标准品溶液。

不同提取物样品供试液的制备[8]：精密称定不同提取物的干浸膏100 mg，用甲醇溶解并定容至100 mL量瓶中，取上清液，过滤，滤液备用。

1.2.3 高效液相法定量分析

（1）色谱条件。色谱柱：ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；甲醇-水（体积比52∶48）为流动相，流速为1 mL/min；柱温为25 ℃；检测波长为254 nm；采集时间40 min。理论塔板数按脱水穿心莲内酯计算应不低于2 000，在该条件下可使基线分离良好。

（2）线性关系的测定。用甲醇分别将对照品溶液依次稀释成 1 000 μg/mL、500 μg/mL、250 μg/mL、125 μg/mL和62.5 μg/mL的系列溶液进行分析，以脱水穿心莲内酯的浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，得回归方程为Y=0.646 2X+2 599.6，R2=0.997 3，脱水穿心莲内酯标准曲线见图1，脱水穿心莲内酯在浓度为62.5～1 000 μg/mL时线性关系良好。

（3）方法学验证。对液相色谱定量分析方法进行稳定性、精密度以及重现性考察。

图1 脱水穿心莲内酯标准曲线

2 结果与分析

2.1 紫外分析鉴别结果

由图2可以看出，不同提取方法的穿心莲提取物与脱水穿心莲内酯标准品图谱的最大吸收波长有重叠，说明不同提取方法的干浸膏中均存在脱水穿心莲内酯。

图2 与脱水穿心莲内酯标准品对比的紫外光谱图

2.2 穿心莲内酯含量测定结果

由表2可看出超声法所得脱水穿心莲内酯含量最高。

表1 不同提取方法中脱水穿心莲内酯含量

2.3 含量测定方法学验证

2.2.1 稳定性测定

取各提取物干浸膏，按样品溶液制备方法制备样品供试液，在12 h内，每隔1 h进样测定1次，结果见表2。

表2 各提取物稳定性实验数据

2.2.2 精密度考察

精密称取脱水穿心莲内酯标准品1 mg，置于1 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度线，超声溶解，摇匀。按照“1.2.3”色谱条件进行测定，重复进样8次，结果见表3。

表3 各提取物精密度考察数据

2.2.3 重现性考察

选择同一批次的样品，精密称量样品0.1 mg，用甲醇定容于容量瓶中，配制成0.1 mg/mL的样品溶液。按照“1.2.3”色谱条件，对样品测定5次，结果见表4。

表4 各提取物重现性考察数据

3 结论

采用水提、醇提、水提醇沉、超声、碱提酸沉法提取穿心莲中脱水穿心莲内酯，结果表明超声法所得脱水穿心莲内酯含量最高为0.853%；碱提酸沉法中，0.01%碱水提取出来的内酯含量较高为0.213%；水提法虽成本低，但提取量少，内酯成分几乎损失殆尽，建议不采用。因此，穿心莲采用以超声法和0.01%碳酸钠碱水回流提取工艺较为合理科学。