基于高效液相色谱法的德伦-19 丸蒙药制剂中栀子苷含量测定

张婷，杨桂娥 ，苏瑞萍，张冬梅，那松巴乙拉，斯琴塔娜

（1 包头市食品药品检验检测中心，内蒙古 包头；2 内蒙古国际蒙医医院，内蒙古 呼和浩特）

0 引言

德伦-19 丸为内蒙古国际蒙医医院自制制剂，处方主要由草果仁（生）、天竺黄、瞿麦、红花、红石膏（热制）、栀子、扁蕾、木棉花、诃子、水柏枝、紫草茸、波棱瓜子、莲子、紫草、木香、豆蔻、麦冬、菥冥子、缬草十九味药组成，具有理中健脾之功效，临床上常用于治疗脾寒，脾热诸症。药方中的栀子，具有泻火除烦，清热利湿，凉血解毒的作用[1]。栀子化学成分复杂，包括以栀子苷为主的环烯醚萜苷类、二萜类、黄酮类及有机酸酯类等[2]。研究发现，栀子苷可调节炎症疾病相关免疫细胞的功能和活化，恢复促炎/抗炎细胞因子间的动态平衡，改善异常信号通路及信号通路之间的相互干扰[3,4]。栀子苷是栀子的主要指标性成分之一[5，6]。故建立合理、有效的测定方法对其质量进行控制，具有一定的现实意义。本研究中采用高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）法 测定德伦-19 丸栀子中栀子苷的含量。

1 仪器与试药

1.1 主要仪器

U3000 高效液 相色谱 仪（美 国Thermo 公 司）；色谱 柱:Alltima C18：250mm×4.6mm,5μm；Apollo C18：250mm×4.6mm，5μm；Sartorius BP 211D 十万分之一电子分析天平（德国赛多利斯公司）；Sartorius AL 204-IC 万分之一电子分析天平（德国赛多利斯公司）；KQ-500DE 数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试剂与试药

栀子苷对照品（110749-201919），纯度：97.1 %，购自中国食品药品检定研究院。乙腈、甲醇为色谱纯（Fisher Scientific），水为超纯水，其他试剂均为分析纯。德伦-19丸为内蒙古国际蒙医医院制剂室生产，批号分别为20190920、20190921、20190922，规格：2g/10 丸。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性实验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（15 ∶85）为流动相；流速1ml/min，检测波长238nm，柱温30℃。理论板数按栀子苷峰计算应不低于1500。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备

取栀子苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含30µg 的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备

取本品粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kHz）30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，制得供试品溶液。

2.3 测定法

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.4 专属性考察

分别取阴性样品供试溶液(除不加栀子外其余药材按原方配比)、栀子苷对照品溶液、德伦-19 丸供试溶液，按上述色谱条件进行实验，结果显示，阴性样品对栀子苷的测定无干扰。

2.5 线性范围

取栀子苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成约每0.03mg/ml 的溶液（实际配制浓度为0.03mg/ml），作为对照品溶液；精密吸取上述溶液1µl、3µl、5µl、7µl、10µl、12µl、15µl、20µl 分别进样，按上述色谱条件测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得线性回归方程：Y=0.53387X+0.06085,（R2=0.9997）。结果表明，栀子苷在进样体积为1-20µl 范围内呈良好的线性关系[7]。

2.6 精密度

取同一份供试品（20190920），连续进样6 次。其RSD为0.49%(n=6)，表明仪器的精密度良好。

2.7 重复性

取同一供试品（批号20190920）6 份，按供试品制备方法制备样品，照高效液相色谱法（《中国药典》2015 年版四部通则0512），在238nm 波长处测定峰面积，按外标峰面积计算。测定每份样品的含量。RSD 为1.9%，表明该方法重复性良好。

2.8 稳定性

精密吸取供试品溶液（批号20190920）10µl，按上述色谱条件，分别于制备0h、2h、4h、6h、8h、12h 时进行色谱测定，记录峰面积。6h 内的RSD 为1.2%，8h 内的RSD为1.4%，12h 的RSD 为1.3%(n=6)。说明供试品溶液在12h 内稳定性良好。

2.9 准确度

加样回收率实验：取已知栀子苷含量的样品（批号20190920）粉末6 份，9 份,每份约0.25g,精密称定,分别每份加入一定量的栀子苷对照品溶液，制成供试品溶液，注入10µl，记录色谱图，计算回收率，平均回收率为102.7%，其RSD 为1.33 %，表明该方法准确可靠。

2.10 耐用性试验

用不同厂家、不同型号色谱柱，取样品（20190920），精密称定，按供试品制备方法制备样品，在238nm 波长处测定峰面积，按外标峰面积计算，测定含量，结果见表1。

2.11 样品测定

依据建立的栀子苷含量测定方法，对3 批次德伦-19丸中的栀子苷含量进行考察，其栀子苷含量分别为1.20mg/g、1.19mg/g、1.17mg/g。

3 讨论

3.1 提取方法

本实验考察了提取时间对栀子苷得率的影响，分别以超声20min、30min、40min 作为条件，结果表明，在提取时间为30min 时达到最大提取效率。因此选择超声30min为最优提取条件。

3.2 转移率及含量范围

按处方按比例,自制样品（20190919）中栀子苷的含量为1.20mg/g,自制样品所用栀子药材中栀子苷的含量为29.1912mg/g,根据本品处方量折算,理论上成品每1g 含栀子苷应为1.21mg,因此转移率为1.20（mg/g）/1.21（mg/g）×100%=99.17%,考虑不同产地栀子药材和生产过程的粉碎时造成损失量不同，含量下浮20%，参考《中国药典》2015 年版一部“栀子”项下有关规定,每1g含栀子苷(C17H24O10)不得少于18mg。因此含量限度=20/484×1000×1.8%×99.17%×80%=0.59（mg/g）。拟定本品每1g 含栀子以栀子苷(C17H24O10)计，不得少于0.60mg。

综上所述，本文建立了蒙药德伦-19 丸栀子中栀子苷的含量测定方法，该方法科学、简便、专属性较强，为促进蒙药标准化，提高蒙药发展水平具有一定的积极意义[8]。