三七花药材质量控制方法的建立*

朱晓青，刘春花，龙庆德，王爱民，李勇军，王永林，陆苑**

(1.贵州医科大学 贵州省药物制剂重点实验室 & 省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室，贵州 贵阳 550004； 2.贵州医科大学 药学院，贵州 贵阳 550004； 3.贵州医科大学 民族药与中药开发应用教育部工程研究中心，贵州 贵阳 550004)

三七花为五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥花序，分布于云南、四川、广西、湖北、广东、江西及贵州等地，主产于云南、四川，野生者少见，多为栽培[1]。《中华本草》记载三七花又名田七花，三七花晒干后可直接入药，味甘、性凉，具有清热生津、平肝降压的功效，主治津伤口渴、咽痛喑哑、高血压病[1]。现代临床研究表明，三七花开水泡服，当茶饮，可治疗高血压[2]。现代药理学研究发现三七花对中枢系统具有抑制作用、镇痛作用、降压作用及抗炎作用等[3-5]。三七花中含有四环三萜皂苷，主要有人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd及F2等，苷元为人参二醇和达玛烷三醇、四醇[1, 5-6]。三七花具有良好的药用价值，虽然《贵州省中药材、民族药材质量标准》2003年版[7]、《广西省中药材标准》(1990年版)[8]、《广西壮药质量标准》[9]和《四川省中药材标准》(2010版)[10]均收载了三七花，但控制的项目都比较简单，目前关于三七花含量测定研究较多[11-13]。故本实验中主要对三七花的薄层色谱鉴别实验进行了系统考察，同时对三七花的性状和粉末进行显微鉴别，对其水分、总灰分、醇溶性浸出物进行测定，为进一步规范和提高三七花的质量方法提供实验依据，从而建立更可靠的质量控制标准。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药

1.1.1仪器 50i显微镜及DS-Fi2显微成像系统(日本尼康公司)，REPROSTAR3薄层数码成像系统(瑞士CAMAG)，WP-ΜP-II-20实验室超纯水机(四川沃特尔水处理设备有限公司)，EL204电子天平(瑞士METTLER)，DK-98-Ⅱ型水浴锅(天津泰斯特有限公司)。

1.1.2试药 硫酸、无水乙醇、甲醇、乙醇、正丁醇、乙醚、乙酸乙酯、石油醚、乙酸丁酯及三氯甲烷均购自国药集团化学试剂有限公司、均为分析纯，青岛海洋硅胶G板(青岛海洋化工厂分厂)，烟台黄海江友硅胶G板(烟台黄海江友化工厂)，青岛鼎康硅胶G板(青岛鼎康化工厂)。三七花样品5批(表1)，并以其中任一批为对照品，均经贵州医科大学中药标本馆龙庆德副教授鉴定为三七花。

表1 三七花样品信息Tab.1 The sample information of flower buds of panax notoginseng

1.2 方法

1.2.1性状鉴定 采用标尺对三七花的大小进行测量，用看、摸、闻、尝等直观的方法对样品形状、色泽、表面、质地和气味等进行鉴定。

1.2.2粉末显微鉴别 取三七花粉末(过4号筛)少许置载玻片上，滴加蒸馏水、水合氯醛试液或稀甘油试液等(必要时，加热透化)，盖上盖玻片，置显微镜下观察、测量和拍照。

1.2.3薄层色谱鉴别 取三七花粉末1 g，加石油醚(60～90 ℃)20 mL超声处理20 min、滤过，收集残渣、挥干溶剂，加入70%乙醇20 mL，超声处理30 min、滤过，滤液蒸干，残渣加水5 mL溶解，加水饱和正丁醇15 mL(萃取3次)收集正丁醇层(上层)、用氨试液洗涤至下层溶液无色收集正丁醇层(上层)，正丁醇饱和的水溶液洗涤至中性，收集正丁醇层，蒸干，残渣用甲醇定容至10 mL，混匀即可。按照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部 通则0502)实验，吸取上述溶液5 μL于硅胶G板上，使成条点状，以正丁醇-乙酸丁酯-水(4 ∶1 ∶5,上层)为展开剂、展开，取出晾干，喷以10%硫酸乙醇容液，在105 ℃下加热至斑点显色清晰。

1.2.4水分测定 取本品粉末(过二号筛)2 g，精密称定，按照《中国药典》2015年版通则0832水分测定法(第二法 烘干法)测定。

1.2.5总灰分测定 取本品粉末2 g，置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量(准确0.01 g)，按照《中国药典》2015年版通则2302灰分测定法测定。

1.2.6醇溶性浸出物 取本品粉末(过二号筛)2 g，精密称定，置100 mL的锥形瓶中，精密加乙醇50 mL，按照《中国药典》2015年版四部通则2201浸出物测定法中醇溶性浸出物测定法热浸法测定。

2 结果

2.1 三七花外观性状特征

通过对5批三七花的性状进行鉴别，该药材的性状鉴别特征：呈不规则的球形或半球形，直径1～2 cm，一端具直伸或弯曲的总花梗、一端密集众多花蕾；表面灰绿色，花梗短、纤细，基部具鳞片状苞片，花萼5齿裂，花瓣5，气清香，味微苦、甘。如图1所示。

图1 三七花(批号20160908)性状Fig.1 Medicinal herbs of flower buds of Panax notoginseng (lot number 20160908)

2.2 显微鉴别

5批样品共有特征如图2所示，三七花粉末黄绿色，气孔在表皮细胞中呈不定式；导管有多为螺纹、少见梯纹，直径5～20 μm；花粉粒呈圆球形，直径13～30 μm，外壁有疣状雕纹，3个萌发孔；非腺毛甚多，单细胞或多细胞，长29～138 μm；表皮细胞呈类圆形，排列紧密；树脂道呈黄色；花冠顶端表皮细胞呈乳头状短绒毛突起。

注：1为气孔，2为导管，3为花粉粒，4为非腺毛，5为表皮细胞，6为树脂道，7为花冠顶端碎片。图2 三七花粉末显微特征Fig.2 Microscopic characteristics for powder of flower buds of panax notoginseng

2.3 薄层鉴别

2.3.1色谱条件和系统适用性实验 分别考察了样品的不同提取方法和不同展开条件，根据实验结果，最终确定了1.3.3的薄层色谱鉴别方法。利用该方法对3批三七花样品进行分析，结果如图3所示。在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且各斑点分离度好。

注：1～3为3批三七花药材，4为对照药材。图3 三七花薄层色谱鉴别系统适用性实验Fig.3 Applicability test of TLC system of flower buds of panax notoginseng

2.3.2硅胶板对三七花TLC鉴别图的影响 按照拟定的薄层色谱鉴别方法，分别考察了3个厂家硅胶G板的展开效果。结果见图4。从3个品牌的硅胶G板实验可知，青岛海洋与青岛鼎康品牌的硅胶G板斑点更清晰，建议用青岛海洋与青岛鼎康品牌的硅胶G板鉴定三七花。

注：1～3为3批三七花药材，4为对照药材；A为青岛海洋硅胶G板，B为烟台江友黄海硅胶G板，C为青岛鼎康硅胶G板。图4 不同厂家硅胶板的三七花TLC鉴别图Fig.4 TLC of different manufacturers' silicone plates of flower buds of panax notoginseng

2.3.3展开湿度对三七花TLC鉴别图的影响 为了考察相对湿度对该方法的影响，利用不同浓度硫酸调整湿度为30%、50%、70%，考察不同湿度条件下的展开效果。结果如图5所示，不同湿度下色谱图的条带清晰，均能较好的鉴别三七花，说明该方法受湿度的影响不明显。

注：1～3为三七花样品，4为对照药材；A为70%，B为50%，C为30%。图5 不同展开湿度下三七花TLC鉴别图Fig.5 TLC of different unfolding humidity of flower buds of panax notoginseng

2.3.4展开温度对三七花TLC鉴别图的影响 为了考察不同温度分别在10 ℃、25 ℃、35 ℃下展开，考察不同温度对展开的影响。结果如图6所示，不同温度下色谱图的条带清晰，均能较好的鉴别三七花，说明该方法受温度的影响不明显。

注：1～3为三七花样品，4为对照药材；A为10 ℃，B为25 ℃，C为35 ℃。图6 不同展开温度下三七花TLC鉴别图Fig.6 TLC of different unfolding temperature of flower buds of panax notoginseng

2.3.5稳定性考察 将同一批次的本品粉末于放置当日、放置1、2和3 d时，按拟定的方法制备供试品溶液，分别点于同一硅胶G板上，展开、显色，结果如图7所示。各条带无明显差异，说明样品的稳定性良好。

注：1为当天，2为放置1 d，3为放置2 d，4为放置3 d；5为对照药材。图7 供试品溶液稳定性考察TLC图Fig.7 TLC diagram of the stability of the test sample

2.3.6不同批次三七花样品薄层色谱鉴别 按照拟定的薄层色谱鉴别方法，对5批样品进行测定，结果如图8所示。5批样品中各条带无明显差异，进一步说明本方法专属性强，可有效鉴别三七花。

注：1～5为批号顺序如表1所示，6为对照药材。图8 不同批次三七花TLC鉴别图Fig.8 TLC of different batches of flower buds of panax notoginseng

2.4 不同批次三七花样品水分、总灰分和醇溶性浸出物的差别

根据1.3.4项、1.3.5项和1.3.6项下方法，对5批三七花进行水分、总灰分和醇溶性浸出物测定。结果如表2所示，水分含量范围是8.41%～10.8%，平均含量为9.63%；总灰分含量范围是6.96%～7.95%，其平均含量是7.41%；醇溶性浸出物范围是25.38%～34.12%，平均值含量为30.93%。

表2 不同批次三七花的水分、总灰分、醇溶性提取物测定结果/%Tab.2 Results of moisture, total ash, and alcohol soluble extracts flower buds of panax notoginseng in different batches/%

3 讨论

三七花是一种具有广泛药理活性和应用价值的名贵中药，不仅可入药, 还可用作食品、保健品加工原料, 其对治病和养生都有一定益处。魏莉等[14]使用高效液相色谱法和比色法证明了三七花中某些有效成分受产地、生长年限等因素的影响，使得它的质量不一；同时三七花资源有限，价格相对较贵，市场上存在掺假现象导致三七花的质量参差不齐，这不仅会造成临床用药疗效不稳定，更给临床用药安全带来潜在危害。目前对于三七花的质量控制国家没有统一的标准，只有少数省份收纳并制定了各自的标准，但它们的检测项目及其控制的限度各有不同。

本实验中增加三七花的显微鉴别，通过对多批三七花样品进行显微鉴别实验，选择了它们的共有特征作为显微鉴别的指标；同时使用TLC对样品进行了鉴别实验，通过对三七花样品多种提取处理方法和TLC展开条件的考察，在最终确定实验条件下发现TLC得到的斑点明显、分离度好、色谱带清晰，并且在TLC耐用实验中对薄层色谱板厂家、展开湿度、展开温度、样品稳定性进行了考察，发现在考察的薄层色谱板厂家中用青岛海洋与青岛鼎康品牌的硅胶G板鉴定三七花展开效果好，在确定的方法中样品稳定性好，展开效果受温度、湿度影响小，说明该方法具有较好耐用性和稳定性。但目前缺少权威的三七花对照药材，所以如何使TLC进行三七花鉴别更科学、可靠、合理仍然有待深入研究。 虽然三七花的真伪鉴别很重要，但是其品质的优劣对于药效的发挥也至关重要，三七花的水分，总灰分及醇溶性浸提物的多少是影响品质的主要指标，所以控制好这些指标对于三七花的质量控制至关重要。本实验中对5批经鉴定为三七花的样品进行了水分，总灰分及醇溶性浸提物的测定，它们为提高三七花的质量控制方法提供了实验依据，可用于建立三七花的质量评价标准，对于保证其质量具有重要意义。