联合检测人乳头病毒与单纯疱疹病毒在宫颈病变筛查中的价值

霍中华，李明成

(1.北华大学附属医院，吉林 吉林 132011；2.北华大学医学技术学院，吉林 吉林 132013)

宫颈病变主要包括宫颈炎、宫颈肥大、宫颈囊肿以及宫颈柱状上皮异位.调查[1]表明：在已婚妇女或有性生活的女性中，宫颈柱状上皮异位的发病率在50%以上.若不及时发现、治疗，可能进展为宫颈癌，因此，发现病因与病机，寻找科学有效的治疗方法，对防治宫颈癌具有重要意义.宫颈柱状上皮异位发病有多种因素参与，除物理和化学因素、机械创伤刺激、病原体感染(如沙眼衣原体、解脲脲原体等)有关以外，越来越多的文献报道[2]证实，病毒感染是慢性宫颈炎及宫颈柱状上皮异位的重要原因，常见的病毒包括人乳头瘤病毒(HPV)、单纯疱疹病毒(HSV-Ⅱ)和人巨细胞病毒(HCMV)等[3].现对就诊的1 269例宫颈病变患者进行HPV和HSV-Ⅱ联合检测，并探讨联合检测HPV与HSV-Ⅱ在宫颈病变筛查中的价值.

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年2月—2019年6月于北华大学附属医院就诊的1 269例已婚女性，患者因阴道分泌物异常或小腹疼痛就诊，依据宫颈病变修订标准[4]对患者进行诊断，排除既往已有宫颈病变或子宫切除患者.根据液基波层细胞学检测结果将其分为轻微炎症组、低级别病变组(宫颈上皮内瘤变(cervicalintraepi-thelialneoplasia，CIN)Ⅰ)、高级别病变组(CINⅡ～Ⅲ)及癌变组(浸润性宫颈癌(invasivecervicalcancers，ICC)).患者年龄21～50岁，平均(32.33±9.98)岁.正常对照组为同期健康体检中心妇科体检女性128例，年龄21～51岁，平均(33.23±9.87)岁，排除宫颈及阴道炎症.两组入选对象年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，所有研究对象均为吉林地区常住人口，对此检测项目知情同意并且自愿无偿提供标本用于研究.

1.2 仪器与材料

Thermo Fisher 荧光定量PCR仪(赛默飞世尔科技公司，美国)；人乳头瘤病毒核酸检测及基因分型试剂盒、单纯疱疹病毒Ⅱ型核酸测定试剂盒(深圳达安基因股份有限公司)；病毒DNA基因组提取试剂盒(PureLink®Pro 96 Viral RNA/DNA Purification Kit)(赛默飞世尔科技公司，美国).

1.3 标本采集与处理

患者取截石位，常规消毒外阴，用阴道窥器暴露宫颈，用无菌棉拭子(生理盐水浸润)插入宫颈，旋转2～3圈，停留30 s，之后将棉拭子置于2 mL病毒保存管中，置-70 ℃冰柜保存.

1.4 标本HPV-DNA及HSV-Ⅱ-DNA提取

应用Thermo Fisher 病毒基因组试剂盒提取标本中的病毒DNA，参照试剂盒说明书进行操作.

1.5 标本中HPV-DNA及HSV-DNA 检测

应用PCR-反向斑点杂交法进行HPV核酸检测及基因分型，应用HSV-DNA PCR-荧光探针法进行HSV Ⅱ型核酸检测，反应体系及条件参考试剂盒说明书进行操作.

1.6 统计学分析

应用SPSS 17.0对数据进行处理与统计学分析，计数资料以百分率(%)和例数表示，行χ2检验，相关性分析采用Spearman 等级相关检验，以P<0.05为差异具有统计学意义.

2 结 果

2.1 宫颈标本HPV分型及HSV-Ⅱ检测

1 269例宫颈病变患者中HPV总检出率为63.1%(807/1269)，包括高危型(16种)和低危型(3种)，均高于正常对照组(12.5%，16/128，P<0.05).HSV-Ⅱ检出率为28.9%(367/1269)，高于正常对照组(6.3%，8/128，P<0.05).见表1.

表1 HPV与HSV-Ⅱ在病例组与对照组中的检出率Tab.1 Detection rates of HPV and HSV-Ⅱ between cases and control groups

2.2 宫颈标本HPV与HSV-Ⅱ在不同年龄段中的检出分布

宫颈病变患者中HPV高危型在25岁(包括25岁)以下和46～55年龄组中的感染率高；而HPV低危型只是46～55年龄组的感染率高，与其他各年龄段比较差异具有统计学意义(P<0.05).HSV-Ⅱ感染率与HPV高危型年龄段相似，在25岁(包括25岁)以下和46～55年龄组中的感染率高，与其他各年龄段比较差异具有统计学意义(P<0.05).HPV与HSV-Ⅱ混合在46～55年龄组中的感染率高，HPV与HSV-Ⅱ混合感染检出率为14.9%(190/1 269)，与其他各年龄段比较差异具有统计学意义(P<0.05).见表2.

表2 HPV与HSV-Ⅱ感染在不同年龄段中的分布Tab.2 Distribution of infections of HPV and HSV-Ⅱ in different ages

2.3 宫颈病变HPV与HSV-Ⅱ感染的相关性

Spearman相关性分析结果表明：宫颈病变严重程度与患者HVP及HSV-Ⅱ感染呈正相关(r=0.536，P<0.05)，而且随着宫颈病变程度的加重，HPV、HSV-Ⅱ及 HPV与HSV-Ⅱ混合感染率都明显增加，各组间HPV、HSV-Ⅱ的感染率比较差异具有统计学意义(P<0.05).见表3.

表3 HPV与HSV-Ⅱ感染在宫颈不同病变中的分布Tab.3 Distribution of HPV and HSV-Ⅱ infections in different patients with cervical erosion

3 讨 论

宫颈病变可由多种因素诱发，一般认为是由于分娩、流产、阴道手术导致宫颈损伤，或者在月经期、产褥期性生活不洁致病原体侵入宫颈，导致宫颈表面鳞状上皮细胞脱落，常为柱状上皮细胞所替代，并且上皮下血管显露而呈红色病损[5].宫颈与阴道连接部分的组织为鳞状上皮细胞层，对病原体及炎症有较强的抵抗力，而宫颈管柱状上皮细胞层薄，对病原体及炎症抵抗力弱.因此，病原体常常侵入由柱状上皮细胞覆盖的宫颈黏膜部分.此外，宫颈黏膜皱襞多，病原体定植潜藏宫颈黏膜皱襞处，不易被彻底清除出去，从而导致宫颈病变反复发作，迁延不愈.

本研究的1 269例宫颈病变患者中HPV检出率为63.1%，高于正常对照组(12.5%)；HSV-Ⅱ检出率为28.9%，高于正常对照组(6.3%).HPV有多种亚型，感染人类生殖系统引起不同程度的病理改变.HPV-6、HPV-11、HPV-42、HPV-43和HPV-44型为低危型，主要引起尖锐湿疣病变；HPV-16、HPV-18、HPV-31、HPV-35、HPV-39、HPV-45、HPV-5l、HPV-52和HPV-56等与宫颈良性肿瘤、不典型增生及宫颈癌的发生密切相关，为高危型.宫颈湿疣发生在宫颈局部或宫颈移行区，单发或多发，局部呈现丘疹性或斑疹性改变，多为扁平状，或呈乳头状上皮增生[6].近年来，各地报道尖锐湿疣发病率有增加的趋势，以年轻妇女发病率最高.宫颈炎的临床表现与早期宫颈癌极其相似，不易鉴别，要注意定期做妇科检查，早期发现，及时治疗.HSV-Ⅱ型宫颈感染发作时可持续1～2周.在慢性宫颈炎患者中，随着宫颈病变程度的增加，HSV感染率呈上升趋势，提示HSV-Ⅱ感染与慢性宫颈炎的发生和发展相关.有研究[7]报道，当HPV合并HSV-Ⅱ或与人类巨细胞病毒(HCMV)感染时，患宫颈癌相对危险性增高，提示HSV-Ⅱ及HCMV可能和HPV有协同致癌的作用.提示在诊断和治疗宫颈上皮内瘤变及宫颈癌时，不应忽视其他类型的病毒感染，早发现、早治疗是阻断其癌变的关键[8].

本研究中，应用PCR-反向点杂交法进行HPV核酸检测及基因分型，应用PCR-荧光探针法进行HSV-Ⅱ型核酸检测，结果显示：HPV与HSV-Ⅱ检出率明显高于正常对照组，说明HPV与HSV-Ⅱ感染与宫颈病变密切相关，与相关研究[9]相符.HPV16和HPV18阳性的女性后期发展成CIN或宫颈癌的概率在我国高达84.5%，在世界范围达70%[10].HPV与HSV-Ⅱ感染通过性传播引起妇女宫颈病变，且常反复发作，导致了HPV与HSV-Ⅱ在人群中的传播.本研究显示：宫颈病变患者中出现HPV与HSV-Ⅱ两种病毒混合感染，HPV与HSV-Ⅱ混合感染率在46～55年龄组中高.随着宫颈病变程度的加重，HPV、HSV-Ⅱ及 HPV与HSV-Ⅱ混合感染率都明显增加，与CHEN W等[11]提出的HPV与HSV-Ⅱ协同致癌的学说一致.

近年来，病毒感染与宫颈癌发病的关系引起人们的关注，宫颈癌在宫颈病变患者的发生率高于正常妇女.宫颈病变HPV与HSV-Ⅱ感染是宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的高危因素，因此，宫颈病变患者应行HPV与HSV感染的联合检测，并及时进行抗病毒治疗.同时，广泛开展教育，重视宫颈病变的预防与治疗，加强接种HPV宣传教育工作，有效并及时治疗各种宫颈病变[12-13].

在HPV和HSV感染的宫颈炎临床诊断中，基于PCR技术有多种方法可选用[14-15].本实验采用PCR-反向点杂交法进行HPV核酸检测，同时还能进行HPV基因分型；HSV-Ⅱ型核酸采用PCR-荧光探针法检测，这些方法可以对前病毒或潜伏期低复制时的病毒特异性靶DNA片段进行扩增检测，在血清特异抗体出现之前就可以检出微量的DNA，而且比DNA分子探针敏感.因此，这两种技术是临床检测HPV与HSV感染的首选方法，具有简便、敏感和特异性强等特点.

综上所述，宫颈病变严重程度与HPV、HSV-Ⅱ感染密切相关，临床上应重视HPV感染，同时也要兼顾HSV-Ⅱ感染，尤其46～50岁女性，即使阴道镜检查正常，也要做好跟踪和随访，及时干预.