毛樱桃炎痛贴的制备及活性研究

古 虹，范紫微，邹天琪，张铮旭，孙利娟，陈 曦，张成义

(1.北华大学药学院，吉林 吉林 132013；2.北华大学基础医学院，吉林 吉林 132013)

贴剂是将天然药物或有机化学合成药物与适宜的基质混合，采用相关制备工艺制成供机体表面外敷且能够进入全身血液循环进而治疗相关疾病的外用制剂[1].贴剂中药的作用方式是药物与相关基质混合后容易透过皮肤，并通过毛细血管吸收后进入全身血液循环，进而对机体的病变部位起到治疗作用[2].

毛樱桃炎痛贴(Prunustomentosathumb Yantong Plaster，PTTYP)是在水凝胶基础上加入毛樱桃提取物制成的贴剂.前期研究已发现毛樱桃提取物具有较强的免疫调节和抗炎作用[3].因此，本研究拟在毛樱桃提取物具有抗炎作用的基础上，开发一种疗效确切、使用安全的新型抗炎镇痛贴剂.

1 试验仪器与材料

初黏力测定仪(AT-730，东莞奥通仪器设备有限公司)；毛樱桃炎痛贴(北华大学药学院实验室自制)；双氯芬酸钠贴(50 mg/50 cm2，蚌埠丰原涂山制药有限公司)；聚丙烯酸钠NP-700(天津市永大化学试剂有限公司)；氮酮(天津市大茂化学试剂厂)；卡波姆940(天津市永大化学试剂有限公司)；丙三醇(天津市永大化学试剂有限公司)；蒸馏水(北华大学药学实验室自制)；玻璃器材均为国产.

2 试验方法

2.1 毛樱桃炎痛贴的制备依据

按刘建霞[4]贴剂基质用量的筛选方法，取处方量的聚丙烯酸钠NP-700，并加入丙三醇，使之充分混合均匀；取处方量的卡波姆940加入处方量的水，温水加热，使其充分溶胀，搅拌均匀；将上述两者充分搅拌混匀后即可得空白基质.将空白基质均匀涂抹于无纺纱布上，即可得到空白基质贴，后续试验备用；将复方药物溶于10 mL水中，均匀涂布于无纺纱布上，覆衬物使用较为常见、稳定且对药物作用没有影响的塑料膜，制备毛樱桃炎痛贴.

2.2 毛樱桃炎痛贴基质的单因素分析

为得到适宜的毛樱桃炎痛贴，首先通过单因素试验考察卡波姆940 溶液、聚丙烯酸钠NP-700、丙三醇的用量对毛樱桃炎痛贴贴剂质量的影响.在不改变聚丙烯酸钠NP-700、丙三醇的情况下，分别加入 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 g的卡波姆940制备成贴剂，对其进行评分，通过得分选出适合的卡波姆940加入量.按照此方法依次对聚丙烯酸钠NP-700、丙三醇的用量进行优化筛选.

2.3 毛樱桃炎痛贴基质制备工艺的优选

以丙三醇、卡波姆940和聚丙烯酸钠NP-700为试验因素，每个因素选择3个水平，设计了 L9(34)正交试验[5]，探讨卡波姆940、聚丙烯酸钠NP-700、丙三醇的用量对贴剂质量的影响.见表1.

表1 毛樱桃炎痛贴基质制备工艺正交试验因素水平Tab.1 Orthogonal experimental factors for preparation of PTTYP stroma

2.4 毛樱桃炎痛贴基质质量评价方法

使用初黏力[6]测定仪测定毛樱桃炎痛贴的初黏力，对其初黏力、膜残留度、均匀性、涂布性、皮肤黏力进行评分，总分为50分.由于初黏力对贴剂质量的影响比较大，所以规定初黏力所占比例为60%，其余各项各占 10%.见表2.

表2 毛樱桃炎痛贴基质评价指标及评分标准Tab.2 Evaluation index and scoring standard of PTTYP stroma

2.5 毛樱桃炎痛贴促透剂最适剂量的优选

本试验选择氮酮作为促透剂，采用Franz透皮扩散装置[6-9]，将制备好的分别含有氮酮0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 g毛樱桃炎痛贴依次贴于离体鼠皮上，裁剪与透皮扩散池扩散通道直径一般大小后，黏附在扩散池通道，皮肤角质层朝外，扩散池中加入约4.0 mL的PBS溶液，扩散池恒温水浴夹层内循环水温为 (32±0.5)℃.将搅拌子放入扩散室中，恒速(100 r/min)搅拌，平衡5 min后开始计时，在规定时间点 2、4、6、8、10、12 h分别取样2.0 mL，同时补充等量PBS溶液，所取样品液采用 UV 法测定毛樱桃总黄酮(Prunustomentosathumbtotal flavonoids，PTTTF)含量，代入标准曲线Y=0.009 1X+0.000 2(R2=0.999 2)换算成浓度，并按照下列公式计算出总黄酮累积透过量Q(μg/cm2)：

其中：Q为单位时间累积渗透量；V为接受池体积；Cn为第n次取样时接受液的浓度；Ci为第i次取样时接受液的浓度；Vi为取样量.

2.6 毛樱桃炎痛贴对小鼠巴豆油致耳肿胀影响

取昆明种雄性小白鼠50只，随机分5组，每组10只，分别为模型组、毛樱桃炎痛贴0.4、0.8、1.6 mg/cm2透皮给药组、双氯芬酸钠贴1.0 mg/cm2透皮给药组.给药前小鼠背部脱毛大于1 cm2，分别剪取毛樱桃炎痛贴0.4、0.8、1.6 mg/cm2和双氯芬酸钠贴1.0 mg/cm2各1 cm2，贴于相应剂量组小鼠的背部脱毛区，模型组小鼠背部脱毛区贴空白贴剂1 cm2，各组1次/d进行透皮给药，连续贴4 d.最后1次给药30 min后去除药贴，在小鼠右耳廓两面均匀涂抹2%巴豆油溶液25 μL，左耳不抹巴豆油作为空白对照.4 h后断髓处死，剪下左右耳片，用6 mm打孔器打下双侧耳片.然后用电子天平分别称重，计算各组肿胀度及肿胀抑制率：

耳肿胀度(mg)=右耳重(mg)-左耳重(mg)，

2.7 毛樱炎痛贴对热板所致小鼠疼痛的影响

将致痛小鼠放在55 ℃的恒温热板上，分别在0.5、1、1.5、2 h时记录痛阈，并计算痛阈提高百分率，若给药后超过60 s无舔足现象，取出小鼠，痛阈值按60 s记录[10].痛阈提高百分率=[给药后痛阈(s)-给药前痛阈(s)]/给药前痛阈(s)×100%.

2.8 统计学分析

3 结 果

3.1 毛樱桃炎痛贴基质中单因素对贴剂评分的影响

3.1.1 聚丙烯酸钠NP-700对贴剂基质评分的影响

0.75 g聚丙烯酸钠NP-700对贴剂的影响总分最高，0.5 g和1 g聚丙烯酸钠NP-700对贴剂的影响总分次之.见表3.

表3 聚丙烯酸钠NP-700对贴剂基质评分的影响Tab.3 Effect of sodium polyacrylate NP-700 on matrix score of patch stroma

3.1.2 丙三醇对贴剂基质评分的影响

配方中加入4 g丙三醇对贴剂基质的影响总分最高，配方中加入3、5 g丙三醇对贴剂基质的影响总分次之.见表4.

表4 丙三醇对贴剂基质评分的影响Tab.4 Effect of glycerol on matrix score of patch stroma

3.1.3 卡波姆940对贴剂基质评分的影响

配方中加入0.1 g卡波姆940对贴剂的影响总分最高，0.2、0.4 g卡波姆940对贴剂的影响总分次之.见表5.

表5 卡波姆940对贴剂基质评分的影响 Tab.5 Effect of carbomer 940 on matrix score of patch stroma

3.2 正交试验结果

以初黏力和综合感官总评分作为考察指标，结果可见：B因素对毛樱桃炎痛贴的制备具有显著的影响，A、C 因素对结果也具有一定的影响，各因素的影响程度依次是卡波姆940(B)>聚丙烯酸钠NP-700(C)>丙三醇(A)，并得到最佳的制备配方A2B1C2，即卡波姆940 0.2 g、聚丙烯酸钠NP-700 0.5 g、丙三醇3.0 g.见表6.

表6 毛樱桃炎痛贴制备工艺正交试验结果

3.3 毛樱桃炎痛贴促透剂氮酮最适剂量筛选结果

氮酮在0.2 g添加剂量时毛樱桃总黄酮透过量明显高于其他4组，所以选定0.2 g为促透剂量.见表7.

表7 氮酮对毛樱桃总黄酮渗透量的影响Tab.7 Effect of Azone on the permeation of PTTTF

3.4 毛樱桃炎痛贴对巴豆油致小鼠耳肿胀的影响

与模型组比较，毛樱桃炎痛贴0.4 mg/cm2对小鼠耳肿胀有明显的抑制作用(P<0.05)，且其抗炎作用具有剂量依赖性.见表8.

表8 毛樱桃炎痛贴对小鼠巴豆油耳肿胀的影响Tab.8 Effect of Prunus tomentosa thumb Yantong Plaster on the swelling of croton oil ears in mice

3.5 毛樱桃炎痛贴对小鼠热板法致痛的影响

毛樱桃炎痛贴各剂量组和模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05).毛樱桃炎痛贴L组、M组用药前后小鼠的痛阈提高率差异不大，但均比对照组高，其中高剂量组用药后痛阈增加明显，与对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)；毛樱桃炎痛贴各剂量对小鼠痛阈的影响随着剂量的增加而加大，作用与剂量具有一定的相关性.见表9.

表9 毛樱桃炎痛贴对小鼠热板法致痛的影响Tab.9 Effect of Prunus tomentosa thumb Yantong plaster on pain induced by hot plate method in mice

4 结 论

炎症是机体对各种伤害因素所产生的防御反应，主要表现为红、肿、热、痛等，常伴发于其他疾病的发病过程，以风湿和类风湿等疾病的炎性反应更为突出.

本试验设计了毛樱桃炎痛贴的制备方法，并通过巴豆油致小鼠耳肿胀试验和热板法致小鼠疼痛试验观察毛樱桃炎痛贴对炎症和疼痛的抑制作用.结果表明：卡波姆940对炎痛贴有较好的增稠作用，不同含量的卡波姆940制成的贴剂黏度不同，卡波姆940在0.2 g时炎痛贴质量评分最高；聚丙烯酸钠NP-700对基质具有较好的增黏作用，聚丙烯酸钠NP-700 0.5 g时贴剂的质量评分最高.丙三醇作为保湿剂，用量过多时基质黏性不够，贴服性较差，用量过少时黏性过大，不易涂展[11].本研究发现：选取丙三醇3 g时，炎痛贴质量评分最高.透皮促进剂的种类有很多，促进吸收的效果也有强有弱，用量过多不仅会达到饱和，还会影响巴布剂基质性能，太少促透效果差，因此，透皮促进剂的选择应遵循用量少、作用强的原则；常用的透皮吸收促进剂包括氮酮、油酸、冰片、薄荷醇等.有研究[6-8]证实：氮酮作为贴剂的促透剂，具有脂溶性高、用量少的优点，尤其是与天然植物提取物配伍使用.通过透皮吸收试验的研究发现，氮酮含量为0.2 g时，毛樱桃总黄酮24 h累积渗透量最多.药效活性研究结果表明：毛樱桃炎痛贴可显著抑制巴豆油致小鼠耳肿胀，与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05).同时，毛樱桃炎痛贴能够抑制小鼠热板所致的疼痛，且与剂量呈正相关，1.5 h内作用明显，说明毛樱桃炎痛贴具有显著的抗炎镇痛活性.

综上，毛樱桃炎痛贴具有较强的抗炎镇痛作用，安全性高，炎症患者可以长期贴敷.因此，毛樱桃炎痛贴可能成为一种新的抗炎抗风湿类天然药物.