喉癌及癌前病变中hPOT1的表达及其与HP感染的相关研究

杨艳青 张丽萍 张立荣 朱 文

（黑龙江省哈尔滨市第四医院，黑龙江 哈尔滨 150026）

喉癌的发生是一个多因素综合作用的结果，如常见喉癌发生的危险因素有吸烟、饮酒、食管反流、生物学因素等。近几年有报道：HP感染增加喉癌的发病风险，二者的关系较为密切[1]。最初发现hPOT1基因组织是一种癌症基因是美国的两名学者，这种癌基因在出现之后会存留于真核细胞内，因此有被称为“看家基因”，能够非常优秀的支持端粒功能同时使患者体内的染色体更佳稳定，促进细胞加速生长与衍生，以上作用皆反映了此因子的重要性[2-6]。至目前为止，对于喉部癌症和癌前病变的临床研究中，HP感染和人端粒保护蛋白表达情况调查相对较少见。本研究通过免疫组化检测喉癌及癌前病变组织中hPOT1的表达及HP的感染情况，探讨喉癌及癌前病变中hPOT1的表达及与HP感染的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 所有标本均来自本院病理科存档蜡块（2015—2018年）。HE切片经镜下病理检查证实为喉乳头状瘤、喉角化症、喉鳞状上皮不典型增生、喉鳞状细胞癌，其中喉乳头状瘤、喉角化症、不典型增生均视为喉癌前病变；喉鳞状细胞癌视为喉癌。共100个样本（手术前均未进行治疗），其中喉癌前病变、喉癌各50例。喉不典型增生HE切片见图1，喉鳞状细胞癌HE切片见图2。

1.2 试剂 检测鼠抗hPOT1单抗所使用的仪器为美国进口产品，需使用的各种试剂盒与抗体提供商为江苏衡州生物技术有限公司提供，包含免抗HP、试剂盒——免疫化学组织SP与DAB。

1.3 方法 蜡块切3～4 μm厚白片，免疫组化采用SP法，按说明书步骤操作。

图1 喉不典型增生（HE×20）

图2 喉鳞状细胞癌（HE×20）

1.4 结果判定 细胞核与胞质是为显示人端粒保护蛋白显色的主要定位所在，颗粒状，除特殊情况外多半显示为棕黄色。数据计算标准：在显示器上随机定位五点，记录下对应视野对其进行评分，标准为染色程度和阳性细胞比率显示。其中，染色阳性细胞评分中0分：≤5%；1分：6%～25%；2分：26%～50%；3分：≥51%。染色程度分级标准如下。0分：99%以上不着色；1分：颜色轻且浅黄色；2分：表现正黄色；3分：棕褐色。将两组患者的基线评分险相乘，若结果高于4分，表示患者为癌症阳性，若再0≤X≤3分，表示为阴性。

HP判定标准：幽门螺杆菌菌体呈棕黄色表达。

1.5 统计学处理 应用SPSS16.0统计软件包进行数据分析，计数资料行χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 hPOT1表达及HP感染情况 喉癌前病变、喉癌患者hPOT1表达阳性率分别为38%、86%，经χ2检验有统计学意义，χ2=24.448，P=0.000。喉癌患者的hPOT1表达阳性率明显高于喉癌前病变患者。见表1。hPOT1表达及HP感染情况见图3、图4。

图3 喉不典型增生HP感染（×20）

图4 喉乳头状瘤HP感染（×20）

喉癌前病变、喉癌患者HP感染阳性率分别为66%、24%，经χ2检验有统计学意义，χ2=17.818，P=0.000。喉癌前病变患者的HP感染阳性率明显高于喉癌患者。见表1。

2.2 HP阳性组和HP阴性组患者中hPOT1蛋白表达的变化 喉癌前病变HP阴性组、阳性组患者hPOT1蛋白表达的阳性率分别为11.76%、51.51%，HP阳性组高于HP阴性组，经χ2检验有统计学意义，χ2=7.525，P=0.006。见表2。HP阳性组和HP阴性组患者中hPOT1蛋白表达的变化见图5、图6。

图5 喉不典型增生hpot1阳性表达胞质（×20）

图6 喉鳞状细胞癌hpot1阳性表达胞质（×20）

喉癌HP阴性组、阳性组患者hPOT1蛋白表达的阳性率分别为84.21%、91.66%，HP阳性组高于HP阴性组，经χ2检验没有统计学意义，χ2=0.421，P＞0.05（P=0.516）。见表2。

表1 喉癌前病变、喉癌患者hPOT1蛋白表达及HP感染情况

表2 HP阳性组和HP阴性组患者中hPOT1蛋白表达的变化

3 讨论

喉癌是头颈部科室中发病率最高的恶性肿瘤疾病之一，在全身所有恶性肿瘤中占比为5.7%～7.6%，鳞状细胞癌则是其病理类型。对于喉癌临床中的致病因素目前仍未完全明确，其中长期吸烟与酗酒、人类乳头状瘤病毒、性激素以及放射性损伤等可能与喉癌的发病相关，近来有研究表明：HP感染可能是喉癌发生发展的危险因素之一[7-10]。喉癌的发生发展是一个长时间、多阶段的过程。hPOT1属于端粒单链结合蛋白，它也许在调控端粒的长度、保护末端和分裂细胞过程中能起作用，DNA的损伤结果致使端粒功能重度失活，阻碍了转细胞的正常生长机制，这也是导致肿瘤疾病得以不断增殖的原因之一[11-13]。但是，有关喉癌的发生机制与发展研究有关报道仍旧较少。

本研究选择免疫组化法进行检测，结果显示：喉癌前病变、喉癌患者HP感染阳性率分别为66%、24%，经χ2检验，二者感染情况有显著性差异（P＜0.05）。结果提示：喉癌前病变患者中HP感染阳性率高于喉癌，HP感染可能在喉癌的早期事件中发挥一定的作用，但在喉癌组织中HP感染阳性率反而低于癌前病变，原因可能是由于喉癌组织中的环境改变了，而这种改变后的环境不适合HP的存活，最终导致在喉癌组织中HP的表达降低，具体机制还有待于今后更深入的研究。本研究结果进一步提示：HP感染可能是喉癌的致病因素之一，可能参与喉癌的发生。本研究结果与Titiz等[14]文献报道相符合。尽量根除HP感染可能会降低癌前病变的发生[14-18]，进而降低喉癌的出现。所以，为控制喉癌发生可通过尽早清除HP感染完成，对限制疾病发生具有重要意义。