无偿献血血液标本核酸检测法HBV病毒筛查对临床输血安全的影响

河南省驻马店市中心血站（463000）孙四力

输血现阶段已成为了临床中应用较为广泛的治疗手段之一，其作用越来越突出，而对于血液工作者来讲，保证临床输血安全则是工作重点[1]。有临床研究发现，病毒“窗口期”较长是导致输血感染的主要原因[2]；所以让窗口期缩短，让病毒检出率提高就成为了现阶段需要及时解决的问题。在现代医学技术逐渐发展和进步的过程中，核酸检测作为新型的检测手段之一，开始逐渐应用于临床检测工作中，核酸检测法不但能让病毒检测的窗口期明显缩短，而且还能让血液传播病原体残余风险显著降低，在对隐匿性HBV病毒感染进行检测时，核酸检测法的作用非常重要[3]。本研究主要分析了无偿献血血液标本核酸检测法HBV病毒筛查对临床输血安全的影响，现作如下分析。

1 一般资料与方法

1.1 一般资料 选取某站2019年1月～7月采集的1500份无偿献血血液标本，纳入标准：签署知情同意书；脉搏和血压正常，不存在严重疾病；男性≥50kg，女性≥45kg。排除标准：淋巴结肿大；皮肤感染；传染性疾病。全部1500份无偿献血血液标本中，848例男性，652例女性；其年龄为23～39岁，平均为（29.4±3.2）岁；其体质量指数为19.1～25.3kg/m2，平均为（22.3±1.4）kg/m2。采用丙氨酸氨基转移酶（ALT）化学法和HBs-Ag快速试纸法初筛合格，每一位无偿献血者均留取血液标本2管，分别采用酶联免疫法和核酸检测法对HBV病毒进行筛查。

1.2 方法 （1）仪器、试剂：选择上海浩源生物科技有限公司的全自动核素监测仪，瑞士FAME全自动仪器（酶联免疫法检测仪）；上海浩源生物科技有限公司的HBV核酸提取试剂和检测试剂；英科新创生物科技有限公司的HbsAg检测试剂。（2）核酸检测法：①初检：选择医疗专用试剂对无偿献血血液标本进行核酸检测单人份初检；根据核酸检测法的相关要求在分析扩增产物区、试剂制备区和标本制备区进行试验，试验时应对相关污染事件进行严格控制。在制备好24h内，严格遵循试剂说明书开展HBV-PCR荧光定量检测，进行PCR加样、扩增、试剂准备和样品准备等。PCR反应程序的具体设置为：温度设置为94℃，持续时间为3分钟，温度为50℃，时间为2分钟，延伸65℃，时间为35秒，退火50℃，时间为10秒；变性94℃，时间为10秒，循环扩增45次，在完成荧光检测后，进行64℃循环共40个，检测通道为550nm、530nm。②追踪监测和复检：如果标本为酶联免疫法（-）、核酸检测法（+），则应接受复检，复检标本为新鲜全血分离冰冻血浆。有相同复检结果的酶联免疫法（-）、核酸检测法（+）标本应进行追踪检测；再次采集血液标本开展酶联免疫法检测，选择专用试剂开展核酸检测法定量检测，并开展HBsAg确诊检测，按照上述结果对免疫学检测窗口期进行判断。（3）酶联免疫法检测：在开展HBsGa检测时，在献血标本中分别加入2种酶联免疫法试剂，应同时具备阴性对照、空白对照、阳性对照以及室内质控；S/CO≥1则判断为阳性，S/CO≤0.7则判断为阴性，0.7≤S/CO≤1则为灰区[4]。

1.3 观察指标 ①HBV病毒阳性检出率与漏诊率进行观察；②对窗口期进行观察；③对检测敏感性和特异性进行观察比较。

1.4 统计学分析 本实验相关数据运用SPSS21.0软件做统计学处理，计数资料以百分率（%）表示，组间数据比较进行X2检验，计量资料以均值±标准差（±s）表示，组间数据比较进行t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HBV病毒阳性检出率与漏诊率观察 核酸检测法的HBV病毒阳性检出率为0.67%，漏诊率为0.13%；酶联免疫法的HBV病毒阳性检出率为0.60%，漏诊率为0.20%；在HBV病毒阳性检出率以及漏诊率方面，核酸检测法与酶联免疫法比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.2 窗口期观察 核酸检测法的窗口期为（21.21±3.76）d，明显短于酶联免疫法的（35.17±4.83）d，两者比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。

2.3 敏感性和特异性观察 核酸检测法的敏感性为99.73%，特异性为99.47%；酶联免疫法的敏感性为93.13%，特异性为93.40%；在检测敏感性、特异性方面，核酸检测法明显高于酶联免疫法（P＜0.05）。

3 讨论

我国现阶段已成为了一个HBV病毒感染大国，所以加强HBV病毒感染的预防和控制工作就显得非常重要[5]。有临床研究发现，血液传播是导致HBV病毒感染风险增加的主要原因，所以现阶段在开展输血管理工作时，积极开展HBV病毒筛查工作就显得非常关键[6]。

酶联免疫法是临床中应用比较广泛的血清学检测手段之一，是现阶段临床诊断HBV病毒感染的常用手段，在血液筛查和临床诊断中的作用非常重要[7]。核酸检测法则是最近几年开始逐渐应用于临床的新型诊断手段之一，对血液中是否存在病毒核酸进行检测，进而来对有无感染病原体进行确诊。有临床研究发现，采用核酸检测法开展血液筛查，能让HIV病毒感染的临床检出率明显提高，让漏诊事件明显减少[8]。

分析本研究发现，在HBV病毒阳性检出率以及漏诊率方面，核酸检测法与酶联免疫法比较差异无统计学意义（P＞0.05）；核酸检测法的窗口期明显短于酶联免疫法（P＜0.05），而且在检测敏感性、特异性方面，核酸检测法明显高于酶联免疫法（P＜0.05）；结果表明，核酸检测法能让窗口期明显缩短，诊断效能较高。核酸检测法选择二次扩增套式PCR扩增法，能让假阳性率明显降低，让检测敏感性和特异性显著提升。在实际的临床检测中，外周血中的病毒表现为间歇性存在，所以核酸检测法也可能出现漏诊的情况，联合应用酶联免疫法进行检测则能有效弥补核酸检测法的缺点。

总之，采用核酸检测法对无偿献血血液标本进行HBV病毒筛查，检测敏感性和特异性较高，而且能让窗口期明显缩短，让临床输血安全得以保证。