血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223联合检测对早期结直肠癌的诊断价值

杨章元，周正菊

(荆州市第一人民医院检验科,湖北荆州 434000)

结直肠癌的预后取决于确诊时的疾病阶段，在早期时确诊，患者5年生存率达90%，当确诊时已发生远处转移的患者5年生存率不到10%[1]。结直肠癌的早期诊断并不容易，因为常规的体格检查不能提供灵活的结肠镜检查[2]。另外，柔性结肠镜检查是侵入性的，体验感差[3]。血清肿瘤标志物糖类抗原(CA)19-9和癌胚抗原(CEA)可用于检测结直肠癌，但特异度较低[4]。因此，迫切需要找到快速和高度灵敏的结直肠癌筛查的最佳标志物。WANG等[5]发现血清外泌体中miR-125a-3p是早期结直肠癌的潜在标志物。HOSSEINI等[6]发现，miR-192和miR-223可作为新型非侵入性生物标志物用于结直肠癌患者的早期发现和风险评估。但是，对于血清外泌体miR-125a-3p、miR-192、miR-223联合诊断早期结直肠癌的诊断效能相关研究鲜见报道。基于此，本研究旨在探讨血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223联合检测对早期结直肠癌的诊断价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 纳入2018年10月至2020年3月本院收治的早期结直肠癌患者120例作为肿瘤组，其中男63例，女57例；平均年龄(51.34±22.50)岁。选取结直肠良性疾病患者120例作为良性组，其中男59例，女61例；平均年龄(53.51±20.06)岁。本研究纳入的早期结直肠癌患者均按照《中国结直肠癌诊疗规范(2017年版)》[7]明确诊断。排除标准：(1)经过相应的药物治疗者；(2)心、肝、肾功能严重受损者；(3)长期使用皮质类固醇激素及免疫抑制剂者；(4)精神疾病者；(5)同时患有其他癌症者。良性组包括结肠慢运输型便秘40例，直肠肛管周围脓肿31例，脾曲综合征28例，乙状结肠冗长症21例。纳入2018年10月至2020年3月本院接受体检的体检健康者120例作为对照组，其中男60例，女60例；平均年龄(55.03±21.47)岁。各组一般资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究获本院伦理委员会批准，且受试者均签署知情同意书。

1.2血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223的测定 采集早期结直肠癌患者、结直肠良性疾病患者和体检健康者的肘前静脉血15 mL。通过北京普利莱基因技术有限公司的体液外泌体提取试剂(货号：C1273-10)抽取血清外泌体。通过北京百灵克生物科技有限责任公司的RNA小量提取试剂盒(货号：R2052)抽取外泌体中的总RNA。通过广州市齐云生物技术有限公司的反转录试剂盒(货号：205111)进行cDNA第一链的合成。通过北京伊诺凯科技有限公司的SYBR(货号:S5193-20RXN-20RXN)进行实时荧光定量PCR。

2 结 果

2.13组受试者血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223的相对表达量 血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223的相对表达量在肿瘤组、良性组和对照组中比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 3组受试者血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223的相对表达量

2.2肿瘤组与良性组血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223的诊断价值 miR-125a-3p的AUC为0.91(95%CI：0.873 1～0.954 4)，miR-125a-3p的截断值为1.601时，其诊断灵敏度为92%，特异度为92%；miR-192的AUC为0.90(95%CI：0.860 7～0.949 6)，miR-192的截断值为0.851 2时，其诊断灵敏度为92%，特异度为91%；miR-223的AUC为0.91(95%CI：0.864 7～0.951 4)，miR-223的截断值为1.134时，其诊断灵敏度为91%，特异度为92%。

2.3肿瘤组与对照组血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223的诊断价值 miR-125a-3p的AUC为0.96(95%CI：0.928 7～0.987 1)，miR-125a-3p的截断值为1.140时，其诊断灵敏度为99%，特异度为92%；miR-192的AUC为0.95(95%CI：0.918 9～0.985 4)，miR-192的截断值为0.530 7时，其诊断灵敏度为99%，特异度为93%；miR-223的AUC为0.98(95%CI：0.955 4～0.998 9)，miR-223的截断值为0.552 8时，其诊断灵敏度为97%，特异度为94%。

2.4血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223联合检测诊断早期结直肠癌 患早期结直肠癌者为真阳性，未患早期结直肠癌者为真阴性，以miR-125a-3p的截断值为1.601、miR-192的截断值为0.851、miR-223的截断值为1.134为诊断界限，三者均满足则为联合诊断阳性，反之则为联合诊断阴性。血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223联合检测对早期结直肠癌的诊断灵敏度为95%(114/120)，特异度为92%(221/240)，准确度为93%(335/360)。见表2。

表2 血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223联合检测诊断早期结直肠癌(n)

3 讨 论

结直肠癌是全球范围内与癌症死亡相关的主要原因之一[1]。诊断病理状况的系统方法可能有助于结直肠癌早期患者的检出，从而降低病死率。粪便潜血试验和柔性乙状结肠镜检查可在一定程度上降低结直肠癌的病死率[8]。但是，这些技术具有固有的局限性。粪便潜血试验的检测灵敏度相当低，柔性乙状结肠镜检查对患者是侵入性的，让患者感到非常不舒服。CA19-9和CEA作为肿瘤标志物，已被广泛用于检测多种癌症，包括结肠癌、肝癌、胰腺癌和胃癌[9]。但是，这些标志物对结直肠癌检测的灵敏度较低，尤其是在疾病的早期阶段。因此，需要找到用于结直肠癌的特异性诊断标志物，以便快速、非侵入性和高度灵敏地筛选出患者。在本研究中，对受试者血清外泌体中总RNA进行提取，通过实时荧光定量PCR法和ROC曲线分析发现，血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223联合检测诊断早期结直肠癌的灵敏度为95%，特异度为92%，准确度为93%。

血清中的外泌体是多囊体与细胞膜融合后释放到细胞外环境中的小膜囊泡(30～100 nm)[10]。据报道，外泌体含有从亲本细胞中选择性富集的蛋白质和RNA(特别是小的非编码RNA)[11]。外泌体外膜可防止RNA在体内循环时被降解，因此，外泌体RNA有可能被用作癌症的预后和预测性生物标志物[12]。研究者逐渐发现血浆中的许多外泌体RNA可作为各种肿瘤类型的诊断、预后甚至是治疗性的生物标志物[13-14]。在本研究中，肿瘤组、良性组和对照组血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223的相对表达量比较，差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤组与良性组血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223诊断的灵敏度分别为92%、92%、91%，特异度分别为92%、91%、92%。肿瘤组与对照组血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223诊断的灵敏度分别为99%、99%、97%，特异度分别为92%、93%、94%。因此，血清中的miRNA，尤其是包裹有外泌体的miRNA，可能有助于结直肠癌的诊断。据报道，与外泌体无关的血清或血浆miRNA对核糖核酸酶A的治疗显示出不同的稳定性[15]。这表明外泌体miRNA更适合作为诊断性生物标志物，因为它们在血清或血浆中的稳定性较高。

综上所述，血清外泌体中miR-125a-3p、miR-192、miR-223检测可作为诊断早期结直肠癌的潜在标志物。