lncRNAAK093987 表达与胃癌淋巴结转移及预后的相关性

田 伟，高爱红

近年来，随着胃癌诊治水平逐步提高，早期胃癌筛查率日益增高。 外科手术是早期胃癌患者有效选择，但术前较难判断患者是否存在淋巴结转移风险，影响患者预后预测［1］。 研究表明早期胃癌预后良好，5 年生存率高于90%，而存在淋巴结转移患者生存率常低于70%［2］，因此早期准确判断胃癌患者淋巴结转移情况对改善患者预后至为重要。 近期国内外学者一致认为长链非编码RNA（lncRNA）在肿瘤发生、转移和凋亡中发挥重要作用［3⁃4］，其中ln⁃cRNAAK093987 目前广泛应用于各类肿瘤研究中。研究证实lncRNAAK093987 在小细胞肺癌组织中呈高表达，且lncRNAAK093987 参与非小细胞肺癌的发生发展，有望成为肺癌患者预后评估的有效分子标志物［5］。 另有研究表明lncRNAAK093987 在结肠癌发病、病情进展中起重要作用［6］。 国内关于ln⁃cRNAAK093987 表达与胃癌发生和转移的相关性研究尚处于初探阶段，为此本研究收集78 例胃癌患者临床资料，旨在探讨lncRNAAK093987 与胃癌淋巴结转移及预后的相关性。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2017 年1 月—2018 年1 月本院收治的78 例胃癌行手术治疗患者临床资料。 纳入标准：经术后病理结果证实为胃癌；临床资料完整；存在外科手术治疗适应证；术前未接受放化疗等辅助治疗。 排除标准：合并其他类型恶性肿瘤；严重并发症；合并高血压病及重要脏器功能损伤；有器官移植史。 78 例均收集癌组织及癌旁（距癌灶边缘≥5 cm）组织标本。 78 例中男46 例，女32 例；年龄49～75（60．09±6．11）岁；淋巴结转移12 例；病程12～37（25．03±3．01）个月；病理类型：鳞癌53 例，腺癌25 例；分化程度：高分化13 例，中分化38 例，低分化27 例；TNM 分期：I 期12 例，Ⅱ期39 例，Ⅲ期15例，Ⅳ期12 例。1.2研究方法

1.2.1胃癌组织及癌旁组织中lncRNAAK093987表达量：采用实时定量聚合酶链式反应检测ln⁃cRNAAK093987 表达，具体步骤：RNA 提取→逆转录合成cRNA→引物设计→三步法扩增→结果分析，以β⁃Actin 为内参基因，每个样本测3 次取平均Ct 值（相差0．5 个Ct 值舍弃）。 lncRNAAK093987正向引物序列为5＇⁃ACG⁃GAGGAGAGAGAGAATGT⁃3＇，反 向 引 物 序 列 为5＇⁃TACATGGGGAGACAAG⁃GATT⁃3＇。 读取目的基因和内参基因的Ct 值，采用2⁃△△CT 法 计 算 lncRNAAK093987mRNA 表 达水平。

1.2.2胃癌淋巴结转移影响因素：收集78 例性别、年龄、病理分期、分化程度、lncRNAAK093987 表达量等临床资料，以手术病理结果将患者分为转移组、无转移组，应用二元Logistic 回归分析寻找胃癌淋巴结转移的影响因素。

1.2.3lncRNAAK093987 表达与淋巴结转移、预后的相关性：78 例依据lncRNAAK093987 表达量中位数（7．35）为截点分为高表达组、低表达组，比较两组术后2 年总生存率、无进展生存率，分析患者ln⁃cRNAAK093987 表达量与淋巴结转移、预后的相关性。 术后2 年以电话或复诊形式进行随访，末次随访时间为2020 年1 月。 无进展生存率指患者从接受治疗开始到观察到疾病进展或因任何原因发生死亡的这段时间内的生存率。

1.3主要试剂 免疫印迹有关试剂、 ln⁃cRNAAK093987 序列购自上海百信生物科技公司，实时定量聚合酶链式反应试剂盒购自广州锐博生物科技有限公司。

1.4统计学方法 应用SPSS 20．0 软件分析数据。计数资料以率（%）表示，组间比较采用χ2检验；计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用独立样本t检验。 采用Spearman 分析进行相关性分析。 以α ＝0．05 为检验水准。

2 结果

2.1胃癌组织及癌旁组织中lncRNAAK093987 表达量比较 胃癌组织中lncRNAAK093987 表达量为（7．35±0．79）明显高于癌旁组织中的（1．09±0.11），差异有统计学意义（t＝69．315，P＜0.001）。

2.2胃癌患者淋巴结转移的单因素分析 78 例胃癌出现淋巴结转移12 例，无转移66 例。 两组性别、年龄比较差异无统计学意义（P＞0.05）；两组在病理分期、 分 化 程 度、 瘤 灶 大 小、 深 层 浸 润 及 ln⁃cRNAAK093987 表达量方面比较差异有统计学意义（P＜0.01），见表1。

表1 78 例胃癌患者淋巴结转移的单因素分析

2.3胃癌患者淋巴结转移的二元Logistic 回归分析 以胃癌患者淋巴结转移为应变量（有转移＝1、无转移＝0），以上述有统计学意义的单因素［分化程度：低分化＝1、中，高分化＝0；深层浸润：有＝1、无＝0；lncRNAAK093987 表达量：＞7．99 ＝1、≤7.99 ＝0）］为自变量进行赋值，代入二元Logistic 回归模型中进行分析，结果显示低分化程度、有深层浸润、ln⁃cRNAAK093987 表达量＞7．99 是胃癌患者淋巴结转移的影响因素（P＜0.05 或P＜0.01），见表2。2.4lncRNAAK093987 表达量与胃癌患者预后的关系 低表达组术后2 年总生存率、无进展生存率明显高于高表达组，差异有统计学意义（P＜0.05 或P＜0.01），见表3。

表2 78 例胃癌患者淋巴结转移的二元Logistic 回归分析

表3 lncRNAAK093987 表达量与78 例胃癌预后的关系［例（%）］

2.5胃癌患者lncRNAAK093987 表达量与淋巴结转移、预后的相关性分析 相关性分析显示：ln⁃cRNAAK093987 表达量与淋巴结转移呈明显正相关，而与患者预后呈明显负相关，见表4。

表4 78 例胃癌lncRNAAK093987表达量与淋巴结转移、预后的相关性分析

3 讨论

淋巴结是胃癌转移的重要途径，早期胃癌有10%～15%的淋巴结转移率［7］。 淋巴结转移与患者预后密切相关，尽管根治术是目前淋巴结转移患者有效治疗手段，但对无淋巴结转移的早期胃癌患者，贸然采取胃癌根治术会造成过度治疗，因此早期预测胃癌淋巴结转移风险至为重要。 早期主要采用超声内镜、CT 等影像学技术对胃癌进行辅助检查，但这些检查手段无法在早期准确判断患者是否存在淋巴结转移。 研究表明lncRNAs 可通过转录调控、mRNA 加工等参与肿瘤的生理、病理过程，lncRNAs表达水平与多种肿瘤病理特征和预后密切相关［8⁃10］，在肿瘤诊治方面具备良好的临床应用前景。相关研究表明lncRNAAK093987 在弥漫大B 细胞淋巴瘤患者中呈高表达，lncRNAAK093987 或可作为反映弥漫大B 细胞淋巴瘤预后的标志物［11］。 另有研究指出lncRNAAK093987 在胃癌组织中呈高表达，其表达水平与胃癌恶性程度存在明显正相关［12］，提示lncRNAAK093987 可能参与胃癌的发生、发展。

本结果显示，胃癌组织中lncRNAAK093987 表达量较癌旁组织中显著增高，与Liu 等［13］研究结果大体类似，提示lncRNAAK093987 在癌组织中呈高表达。 本结果还显示，低分化程度、有深层浸润、ln⁃cRNAAK093987 表达量＞7．99 是胃癌患者淋巴结转移的影响因素。 深层浸润、分化程度一定程度反映了肿瘤的恶性程度，肿瘤分化程度越低、存在深层浸润表示癌灶侵袭性越强，肿瘤恶性程度就越高，故而推测存在深层浸润且分化程度低的患者发生淋巴结转移的风险也越高，与权蕊良等［14］结论基本相符。研究表明lncRNAAK093987 转录水平低于蛋白质编码基因，且其表达存在高度的组织特异性，可精密调控并参与机体组织及细胞功能，参与肿瘤细胞的存活、增殖、侵袭及转移等生物学行为［15］。

此外，本结果同时显示lncRNAAK093987 低表达胃癌患者术后2 年总生存率、无进展生存率较高表达患者显著增高，lncRNAAK093987 表达量与淋巴结转移呈明显正相关，而与患者预后呈明显负相关，初步说明lncRNAAK093987 表达量与胃癌患者淋巴结转移和预后密切相关。 尽管具体机制尚未明确，但是提示在胃癌患者治疗期间动态监测ln⁃cRNAAK093987 表达，能够为患者淋巴结转移风险的早期预警和预后判断提供一定参考。

综 上， 本 文 初 步 证 实 胃 癌 患 者 ln⁃cRNAAK093987 表达量与淋巴结转移和预后密切相关，其有望成为胃癌新型分子标志物。