静脉血真空采血管预稀释法校正EDTA依赖性假性血小板减少的效果探讨

汪学耀，荆成宝，张 倩，王 禅

（1.安康市汉滨区第三人民医院，陕西安康 725018；2.安康市中心医院，陕西安康 725000；3.安康市中医医院，陕西安康 725000）

EDTA 依赖性假性血小板减少症（EDTA-PTCP）是指临床检测中血样的血小板数目原本正常，但其检测结果却显示假性减少的现象，其原因是血样应用EDTA-K2来作为抗凝剂抗凝而导致血小板聚集，使血液细胞分析仪不能正确识别血小板，在假性血小板减少症中占比高达九成以上[1]。临床工作中若不能及时鉴别EDTA-PTCP 而采取不必要的医疗措施，不但增加患者痛苦，还会引起医疗纠纷。

目前校正EDTA-PTCP 的方法有：稀释模式法、更换抗凝剂法、微量离心法、药物稳定法[2]，但稀释模式法、微量离心法和药物稳定法在实际应用中存在着操作不便，更换抗凝剂法虽然操作简单但是存在校正不彻底的缺陷[3]。本次实验采用由笔者发明的预稀释真空采血管（实用新型名称：预稀释真空采血管专利号ZL 2017 20335701.X）。此方法是建立在稀释模式法的基础上，但又解决原稀释模式法采集末梢血不方便、标本不可靠，操作环节多、血小板计数稳定时间短、计数不可靠等问题，可操作性强，便于在临床上推广。

1 材料与方法

1.1 研究对象 2015年3月～2018年12月汉滨区第三人民医院门诊及住院确诊的假性血小板减小症患者（PTCP）共60 例，依据实验室复检标准筛选出47 例患者作为研究对象，其中男性22 例,女性25 例,年龄9～86 岁,平均年龄57±20.34 岁。

1.2 仪器与试剂 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司BC-5300 血液细胞分析仪及原厂配套试剂，三力医用科技发展有限公司EDTA-K2抗凝管，日本奥林巴斯BX41 双目显微镜，重庆天海医疗设备有限公司骨髓图像分析管理系统，珠海贝索生物技术有限公司瑞氏-吉姆萨复合染色液。

1.3 方法 采集静脉血2ml到EDTA-K2抗凝管中，倒置放正混匀8 次后，使用全自动血细胞分析仪BC-5300 在全血模式下进行PLT 检测。采静脉血1 ml 于预稀释真空采血管（内含稀释倍数为10 倍的氯化钠稀释液）[4]中,倒置放正混匀8 次后，使用全自动血细胞分析仪DxH800 在稀释模式下进行PLT检测。分别记录患者1，2和3 h的PLT检测数据。

1.4 统计学分析 统计分析软件使用SPSS19.0，计量资料用均数±标准差(±s)及差值的均数±差值的标准差(±Sd)表示，采用方差分析及配对t检验对数据进行分析，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同采血管各时间组PLT 计数比较 见表1。47 例EDTA-PTCP 患者不同采血管各时间PLT 计数值的方差分析结果差异有统计学意义（F=4.79,P=0.01）；而静脉血真空采血管预稀释法组内PLT 计数值各时间分析结果无统计学意义（F=0.65,P=0.53），3h内整体的PLT计数值结果稳定。

表1 不同采血管各时间组PLT 计数值比较[(±s)×109/L]

表1 不同采血管各时间组PLT 计数值比较[(±s)×109/L]

项 目 1h 2h 3h F P EDTA 法 173.69±78.33 144.37±71.49 128.45±70.17 4.79 0.01静脉血真空采血管预稀释法 206.76±71.75 203.35±70.31 190.92±75.37 0.65 0.53

2.2 不同时间下静脉血真空采血管预稀释法 见表2。静脉血真空采血管预稀释法不同时间测得的PLT计数值与EDTA 真空采血管法所测得PLT 计数值之差的结果差异有统计学意义（t=4.19～6.92,P＜0.001），且均远大于0，证明静脉血真空采血管预稀释法可以校正EDTA-PTCP 的计数结果。

表2 不同时间下静脉血真空采血管预稀释法与EDTA 法PLT 计数值之差分析结果

3 讨论

EDTA-PTCP 是指因使用EDTA-K2作为抗凝剂而导致临床检测血样中的PLT 数目原本正常，其检测结果却显示假性减少的现象。虽然EDTA-PTCP发病概率为0.03%～1.9%[5]，但若就诊患者人数多，加之血细胞检测是临床检验的常规项目，如不加以鉴别而导致误诊,不仅加重患者负担，还会引起医疗纠纷。

本文实验结果表明，采用EDTA 法对EDTAPTCP 患者的血样进行检测，组内PLT 计数结果在采样后3h 内降低较为明显，差异具有统计学意义（P＜0.05）；而采用静脉血真空采血管预稀释法检测EDTA-PTCP 患者的血样，3 h 内整体的PLT计数结果稳定，虽PLT 计数结果随着血样放置时间（1h,2h,3h）而稍有降低，但差异无统计学意义（P＜0.05），证明静脉血真空采血管预稀释法对临床EDTA 依赖性假性血小板减少的PLT 计数结果有较好的校正作用。不同时间段（1h,2h,3h）的静脉血真空采血管预稀释法测得的PLT 值与EDTA 真空采血管法所得PLT 计数值之差的结果差异均有统计学意义（P＜0.05），且均远大于0，证明静脉血真空采血管预稀释法对血小板具有保护作用，这是由于此次实验使用不含抗凝剂的非溶血性稀释液来稀释患者的静脉血，稳定血小板膜表面糖蛋白GPIIb/IIIa，防止出现隐蔽抗原的暴露，同时通过固定比例（1∶10）的稀释来降低抗体的滴度，以此来有效地拮抗抗凝剂诱发的血小板聚集。

静脉血真空采血管预稀释法解决了抗凝管带来的血液聚集问题。以其结构简单，具有精准的刻度线，用来稀释静脉全血，防止抗凝剂(钙离子螯合剂)诱发暴露血小板膜上糖蛋白GPIIb 中的自身抗原(Ag)；预稀释真空采血管内血溶液中所有凝血因子的浓度因大比例稀释静脉血液而降低，增大凝血因子之间的距离，阻断凝血因子之间的链式激活，从而阻止预稀释真空采血管内血溶液的凝固[6]；通过采血管上的精密刻度，保证采集静脉血液血量的准确可靠；采集静脉血，防范采集末梢血时，组织液及皮肤表面残留物质对血液的稀释和干扰、对血小板及凝血因子的活化；以往开放式采集血液由于操作者和环境的污染，导致血液样本的再现性受到影响，现通过真空采血的方式，采用预稀释真空采血管，实现血液采集、制样保存为一体，简化操作，保证血小板数目的准确可靠；且采用预稀释真空采血管进行临床采集血样,综合了采血、稀释、抗凝、血样保存一步完成，降低临床操作难易度,增加血液样本的再现性，且静脉采血已在临床广泛应用，使此法更易于推广。

综上所述，使用静脉血真空采血管预稀释法校正EDTA-PTCP 患者的血小板计数减少问题，具有简单、有效、彻底、可靠的优点，避免临床误诊误治。