丹芝舒心胶囊的质量标准提升研究

2020-12-23龚光明黄鲁廖欣王璐任海祥苏华

中国医药导报 2020年28期

龚光明黄鲁廖欣王璐任海祥苏华

[摘要] 目的提升丹芝舒心胶囊的质量标准。方法利用薄层色谱法（TLC）鉴别丹芝舒心胶囊中的丹参、冰片、元胡3种组分，运用高效液相色谱法（HPLC）测定制剂中丹酚酸B的含量。色谱条件：Agilent C18色谱柱（4.6 mm ×250 mm，5 μm），流动相条件：乙腈-甲酸-水（22∶1∶77），利用286 nm波长进行检测，流速1.0 mL/min，柱温为25℃，进样量为10 μL。结果建立的丹参、冰片、元胡的TLC鉴别中，成分斑点清晰，分离度好，且阴性对照样品无干扰。丹酚酸B含量在19.4582～311.3312 μg/mL范围内，与峰面积呈良好的线性关系，R2=1;平均加样回收率为100.84%，RSD为1.37%（n = 9）。结论该方法准确易行，可用作丹芝舒心胶囊的质量标准。

[关键词] 丹芝舒心胶囊;质量标准;丹酚酸B;薄层色谱法;高效液相色谱法

[中图分类号] R282 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2020）10（a）-0014-04

Research on the quality standard improvement of Danzhi Shuxin Capsules

GONG Guangming HUANG Lu LIAO Xin WANG Lu REN Haixiang SU Hua

Department of Pharmaceutical Preparation， General Hospital of Eastern Theater Command， Jiangsu Province， Nanjing 210002， China

[Abstract] Objective To improve the quality standard of Danzhi Shuxin Capsules. Methods Thin layer chromatography （TLC） was used to identify the three components of Danzhi Shuxin Capsules， including danshen root， borneol and rhizoma corydalis， and high performance liquid chromatography （HPLC） was used to determine the content of salvianolic acid B in the preparation. Chromatographic conditions： Agilent C18 column （4.6 mm ×250 mm， 5 μm）， mobile phase conditions： acetonitrile-formic acid-water （22∶1∶77）， 286 nm wavelength was used for detection， flow rate was 1.0 mL/min， column temperature was 25℃， injection volume was 10 μL. Results In TLC identification of danshen root， borneol and rhizoma corydalis， the component spots were clear， the separation degree was good， and the negative control samples had no interference. The content of salvianolic acid B was within the range of 19.4582-311.3312 μg/mL， which showed a good linear relationship with the peak area， R2=1. The average recovery was 100.84% and the RSD was 1.37% （n = 9）. Conclusion This method is accurate and feasible， and can be used as the quality standard of Danzhi Shuxin Capsules.

[Key words] Danzhi Shuxin Capsules; Quality standard; Salvianolic acid B; Thin layer chromatography; High performance liquid chromatography

丹芝舒心膠囊由紫丹参、灵芝、川芎等八味中药制成，具有活血化瘀，理气止痛的功效。原质量标准仅对丹参、冰片和元胡进行薄层色谱（TLC）定性鉴别，没有主成分的含量测定。因此，为进一步加强对该制剂的质量控制[1-2]，本研究对以上3味药的鉴别方法进行了改进。另方中丹参为君药，可活血化瘀、凉血消痈[3-4]。研究表明丹酚酸B是丹参中丹酚酸类化合物中含量最多且活性最强的化合物[5]，具有保护血管内皮细胞[6-7]、改善心肌缺血/再灌注的损伤[8-9]、抑制心肌细胞肥大[10]、抑制动脉粥样硬化[11]以及调节血管新生等作用[9，12]。因此，利用高效液相色谱法（HPLC）测定丹参中主成分丹酚酸B的含量[13]，为更好地控制丹芝舒心胶囊的质量提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent1100高效液相色谱仪（VWD检测器，安捷伦科技有限公司）;FA1604S型电子天平（万分之一，上海精密科学仪器有限公司）;AE240型电子天平（十万分之一，METTLER TOLEDO仪器有限公司）;HH6型电热水浴锅（常州国华电器有限公司）。

1.2 试药与样品

冰片对照品（111688～201501）、延胡索乙素对照品（110726～201610），丹参对照药材（120923～201513）均购自中国药品生物制品检定所;乙腈（色谱纯，TEDIA）;薄层层析硅胶G（青岛海洋化工）;水为超纯水，其他试剂均为分析纯。丹芝舒心胶囊样品（东部战区总医院药剂科生产，批号170520、180409、181115、190123、190211、190310）。

2 方法与结果

2.1 TLC鉴别

2.1.1 丹参取本品20粒，倒出内容物，加入60 mL乙醇，加热回流1 h，滤过，蒸干滤液，残渣中加入30 mL水并置分液漏斗中，加入乙酸乙酯振摇提取3次，每次15 mL，将3次提取液合并，水浴蒸干，将剩余残渣加入1 mL甲醇，制成供试品溶液。取丹参药材0.5 g，加入60 mL乙醇，同上述方法制备对照药材溶液。另取丹参以外的药材，制成阴性对照溶液。上述溶液各取20 μL，点在同一硅胶G薄层板上，用甲苯-乙酸乙酯-甲酸（8.0∶5.0∶0.8）作为展开剂，展开，取出，晾干，喷2%三氯化铁乙醇溶液，然后放置2 h后观察。供试品在和对照品相应位置显现出同样颜色的斑点，同时，阴性对照色谱无斑点，说明该方法可行。见图1A（封四）。

2.1.2 冰片取本品5粒，倒出内容物置坩埚中，加盖，加热数分钟，待冒热气，取下坩埚盖，倒置加入1 mL甲醇制成供试品溶液。取冰片对照品，用甲醇制成浓度为1 mg/mL的溶液用作对照品溶液。另取冰片以外的药材，制成阴性对照溶液。上述溶液各吸取20 μL，点于同一硅胶G薄层板上，用正己烷-乙酸乙酯（9∶1）作为展开剂，展开，取出，晾干，喷5%的磷钼酸乙醇溶液，然后在105℃条件下烘至斑点显色清晰。供试品在和对照品相应位置显现出同样颜色的斑点，同时，阴性对照色谱无斑点，说明该方法可行。见图1B（封四）。

2.1.3 元胡取本品30粒，倒出内容物，加乙醇80 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加2%盐酸溶液30 mL于分液漏斗中，用浓氨水将PH调为10，用氯仿振摇提取3次，每次15 mL，合并提取液，蒸干，残渣加入1 mL甲醇制成供试品溶液。另取延胡索乙素对照品，加甲醇制成浓度为1 mg/mL的对照品溶液[14]。另按处方比例称取除元胡以外的药材制成阴性对照溶液。将上述三种溶液各吸取10 μL，点于同一硅胶G薄层板上，用正丁醇-冰醋酸-水（4∶1∶5）上层溶液作为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液显色。供试品在和对照品相应位置的色谱显现出同样颜色的斑点，同时，阴性对照色谱无斑点，说明该方法可行。见图1C（封四）。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件与系统适用性色谱柱：Agilent C18（4.6 mm ×250 mm，5 μm）;流动相：乙腈-甲酸-水（22∶1∶77）;柱温：25℃;流速：1.0 mL/min;进样量为10 μL;检测波长为286 nm;理论塔板数按丹酚酸B峰计算不低于5000。

2.2.2 对照品溶液的制备向适量丹酚酸B对照品中加入75%甲醇制成每1 mL含0.08 mg丹酚酸B的对照品溶液[15-16]。

2.2.3 供试品溶液的制备取适量本品，研细，精密称取本品约2.0 g，置于圆底烧瓶中，加入75%甲醇50 mL，称定重量，80℃水浴回流2 h，放冷，然后加入甲醇补足减重，并摇匀，过滤，将续滤液用作供试品溶液[17]。

2.2.4 阴性对照溶液的制备制备不含丹参的阴性对照样品，然后制成阴性对照溶液。

2.2.5 专属性试验将对照品溶液，供试品溶液与阴性对照溶液各取10 μL，按“2.2.1”中的条件进样，结果表明，阴性对照溶液色谱图中在相应位置无色谱峰出现，说明处方中除丹参以外的其他药材对丹酚酸B的测定均无干扰。见图2。

2.2.6 线性关系考察精密称取丹酚酸B对照品20.06 mg，置于50 mL量瓶中，加75%甲醇溶解，稀释，摇匀，作储备液[18-19]。分别精密吸取丹酚酸B储备液0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mL至10 mL容量瓶中，用70%甲醇稀释至刻度，按“2.2.1”项下的色谱条件进样，得回归方程：Y=1.817X-16.991，R2=1（n = 5），其中，横坐标（X）为丹酚酸B对照品溶液浓度，纵坐标（Y）为峰面积。见图3。结果表明，丹酚酸B的浓度在19.4582～311.3312 μg/mL之间，与峰面积线性关系良好。

2.2.7 精密度试验取丹酚酸B对照品溶液，连续进样5次，记录峰面积，计算峰面积RSD为0.84%。结果证明该方法精密性较好[20]。

2.2.8 稳定性试验取同一批号（批号：181115）的丹芝舒心胶囊，制备成供试品溶液，在常温下分别于0、1、2、4、8 h，按“2.2.1”項下的色谱条件进样，并记录峰面积，经计算，峰面积RSD为1.09%。结果证明供试品在8 h内稳定。

2.2.9 重复性试验取同一批号（批号：181115）的丹芝舒心胶囊，制备5份供试品溶液，测得丹酚酸B的平均含量为1.3511 mg/g，RSD为1.55%。结果证明此法的重复性良好[21]。

2.2.10 加样回收率试验精密称取已知含量的样品（批号：181115），每份约1.0 g，共9份，分别置于圆底烧瓶中，按低、中、高3个浓度分别精密加入丹酚酸B储备液1.5、2.5、3.5 mL，制备供试品溶液。进样结果见表1。

2.2.11 样品含量测定取3个批次（批号：190123、190211、190310）丹芝舒心胶囊，按照拟定色谱条件进样，对每个批次丹芝舒心胶囊进行3次平行测定，根据记录的峰面积计算其含量。见表2。

3 讨论

3.1 流動相的选择

本研究中含量测定法为提升制剂质量标准而新建，实现在较好分离度下对丹酚酸B的测定。由于中药品种药味较多，在尝试了乙腈-醋酸、甲醇-磷酸、乙腈-四氢呋喃系统后发现分离度差，阴性干扰强。丹酚酸B含有羧基，显酸性[22]，而甲酸既具有羧基结构，又有醛基结构，且酸性强于醋酸和磷酸，丹酚酸B在乙腈-甲酸-水系统中可以很好地被分离，故确定使用该流动相系统[23]。

3.2 鉴别方法的优化

冰片鉴别项中，原标准中是以冰片药材作为对照。根据2015年版《中华人民共和国药典》[24]四部中对照药材及对照品的收载记录说明，市面上可以购买冰片对照品。为确保质量标准的严肃性及专一性，故把原标准中的冰片药材换为冰片对照品。元胡鉴别项中，原标准中元胡的鉴别方法是理化鉴别法，专属性不高，根据《2014年军队医疗机构制剂质量标准提高要求》中关于“复方制剂不宜采用化学试验方法”的规定，把元胡的鉴别方法改为薄层色谱鉴别法，以延胡索乙素作为对照品，专属性强，能够有效地保证药品质量[25]。

总之，由各项测定结果可知，修订后的丹芝舒心胶囊质量标准更加全面、准确、可行，也为相似制剂的质量控制提供了参考。该制剂中，丹参虽是君药，但其它药味也有着不可忽视的协同作用，依据中医基础理论以及君、臣、佐、使的配伍原理，为确保更加全面、科学地制剂评价，是否结合药效并将川芎、元胡等药味中特征成分的含量测定纳入丹芝舒心胶囊的质量标准仍有待研究。

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