耐药性癫痫脑脊液P-糖蛋白、转化生长因子β1水平变化的临床意义研究

程丽妞，白树风，闫俊强，金梦华

癫痫是中枢神经系统的常见疾病，是一种由多种病因引起的慢性脑部疾病，是大脑神经元突发性、高度同步化异常放电所造成的短暂性大脑功能障碍疾病。经正规的抗癫痫药物治疗，约70%的患者基本可以控制发作，但仍存在约1/3的患者对抗癫痫药物产生耐药，最终发展为耐药性癫痫[1]。在对耐药性癫痫进行研究显示，其脑组织中P-糖蛋白(P-gp)过度表达，阻止了抗癫痫药物透过血脑屏障，进而影响药物的吸收和分布，产生耐药[2]。而转化生长因子(TGFβ)参与癫痫的发病[3]，其中TGFβ1通过炎症反应参与癫痫神经元兴奋性和(或)胶质细胞瘢痕形成，可能与癫痫耐药有关。本研究即对耐药性癫痫脑脊液中P-gp、TGFβ1水平变化的临床意义进行探讨分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2015年6月-2018年8月于我院治疗有效的癫痫患者30例为敏感组，男17例，女13例；年龄19～58岁，平均(35.3±2.1)岁；病程2～11 y，平均(5.1±0.7)y。耐药性癫痫患者30例为耐药组，男16例，女14例；年龄17～55岁，平均(35.0±2.4)岁；病程2～10 y，平均(5.2±1.0)y。同期经我院体检健康者20例为对照组，男15例，女15例；年龄19～60岁，平均(35.8±2.2)岁。3组受试者性别、年龄差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 纳入标准 (1)符合2001年国际抗癫痫联盟提出的癫痫诊断标准；(2)发作类型符合《现代神经内科学》相关标准[4]；(3)头部影像学未见明显器质性病变；(4)经医院伦理委员会批准，且患者知情同意。

1.3 排除标准 (1)服用P-gp 的底物类药物(AEDs除外)或(和)抑制剂类药物；(2)有酒精或药物依赖史；(3)合并恶性肿瘤、全身炎症反应、严重器质性疾病或先天性代谢异常疾病。

1.4 方 法

1.4.1 标本采集 所有受试者均接受腰穿采集脑脊液4 ml，取部分于我院检验科常规检测无异常后，4 ℃环境下将剩余脑脊液以2000 r/min离心10 min，分离细胞组分，保存于-80 ℃冰箱待测。

1.4.2 标本检测 取试剂盒和脑脊液标本，室温(20 ℃～25 ℃)放置15～30 min，酶联免疫吸附法定量检测P-gp 和TGFβ1，试剂盒购自美国贝克曼库尔特，具体步骤根据试剂盒说明书操作。

1.5 观察指标 比较分析耐药组、敏感组和对照组脑脊液P-gp和TGFβ1水平差异。将耐药组依据发作类型再次分组，组间比较脑脊液P-gp 和TGFβ1水平差异。

1.6 统计学分析 采用SPSS 23.0软件，组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用独立样本t检验，P<0.05表示有统计学意义。

2 结 果

2.1 3组受试者脑脊液P-gp、TGFβ1水平比较 耐药组脑脊液中P-gp、TGFβ1显著高于敏感组和对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。敏感组和对照组脑脊液中P-gp、TGFβ1水平差异无统计学意义(P>0.05)(见表1)。

表1 3组受试者脑脊液P-gp、TGFβ1水平比较

2.2 不同发作类型耐药组脑脊液P-gp、TGFβ1水平比较 不同发作类型的耐药性癫痫患者脑脊液中P-gp、TGFβ1水平差异无统计学意义(P>0.05)(见表2)。

表2 不同发作类型耐药组脑脊液P-gp、TGFβ1水平比较

3 讨 论

目前对于耐药性癫痫的发病机制尚未明了，其可能与多种细胞因子或受体的异常表达有关[5]。

1995年由Tishler 等学者[6]首先提出P-gp在脑组织中的过度表达可能是癫痫耐药的原因之一，从而形成了癫痫耐药转运假说的基础。P-gp在正常人组织中广泛表达，是多药耐药基因-1的编码产物，具有药物外排泵功能。在病理状态下，P-gp可过度表达，并将多种达到或已经进入细胞内的药物泵出，使靶细胞内药物浓度降低，从而产生耐药[7,8]。

本研究中，通过对耐药性癫痫和治疗有效的癫痫患者进行分析显示，前者脑脊液中P-gp水平显著高于后者。P-gp主要在血脑屏障的血管内皮细胞中表达，阻止异物或药物透过血脑屏障进入颅内；其表达水平过高可将抗癫痫药物泵出，靶细胞内难以达到有效血药浓度。

TGFβ信号参与癫痫的发作。动物实验显示，TGFβ1治疗可诱发癫痫样活动，而其阻滞剂可防止癫痫样活动的产生[9]。氯沙坦等TGFβ信号阻断剂可以防止延迟自发性发作复发的进展[10]，表明TGFβ信号在耐药性癫痫的发生发展中具有重要作用。本研究中，耐药性癫痫患者脑脊液TGFβ1水平显著增高。TGFβ1可以触发TGFβ信号激活，引起胞外稳态受损和炎症反应，引发癫痫[11]。

在对不同发作类型的耐药性癫痫患者进行分析显示，部分性发作、全面强直痉挛发作、部分性发作继发全面强直痉挛发作以及两种或两种以上发作形式的耐药性癫痫患者脑脊液中P-gp、TGFβ1水平差异无统计学意义；表明P-gp、TGFβ1水平升高可引起耐药性癫痫，而与其发作类型无明显关系。

通过本研究显示，脑脊液中P-gp、TGFβ1水平可以作为癫痫耐药的一项重要指标。对于正在服用抗癫痫药物的患者，应定期检测上述指标，一旦发现其水平升高，应及时针对性地选择治疗药物，制定个体化治疗方案，降低耐药性癫痫的发生概率。但由于本研究纳入受试者数量有限，个体差异难以排除，后续需大样本、大范围研究进一步证实。