声带白斑组织标志蛋白的表达及临床意义

李 峰，高志光，蒋杏丽，安 然，金 梦

（黑龙江省医院耳鼻咽喉科，黑龙江 哈尔滨 150036）

声带白斑（vocal cord leukoplakia）具有恶变潜能的特质，因此需要得到临床的高度重视。细胞增殖的异常调控是恶性肿瘤发生的主要特征，而研究发现各种致病因素均会导致细胞中的癌基因激活，且抑癌基因失活，进而引发细胞周期的调控发生改变，进而引发癌变[1]。本研究应用免疫组化的方法，对比分析成年声带白斑和成年声带良性病变患者中标志蛋白的表达进行探讨，旨在为临床早期诊断和预后判断提供可靠的指导。

1 资料与方法

1.1 一般资料

研究纳入2017年8月～2019年8月我院鼻咽喉头科收治的120例换这个，所有患者均经显微手术明确病理性质，其中成年声带白斑55例（包括伴上皮单纯增生22例，伴上皮异型增生33例），成年声带良性病变42例（包括声带息肉28例，声带任克水肿14例）。成年声带良性病变组（n=42）中：男27例，女25例，年龄23～82岁；平均（52.52±5.36）岁。声带白斑伴上皮单纯增生组（n=22）中：男12例，女10例，年龄23～82岁；平均（51.89±5.21）岁。声带白斑伴上皮异型增生组（n=33）中：男17例，女16例，年龄23～82岁；平均（52.23±5.45）岁。且上述资料中的组间数据对比差异均保持均衡性，差异无统计学意义（P＞0.05）。纳入标准：所有患者均经喉显微手术明确病理性质；声带白斑病变表现为声带单侧或双侧白色点状、片状或外生性白色物。排除标准：有有喉部外伤、插管史、喉部活检史、头颈部放化疗和手术史者；合并多种声带病变者；合并其他全身恶性肿瘤者；病变组织过小，不能制备足够病理切片者。

1.2 方法

结合世界卫生组织（WHO）修订的头颈部肿瘤的分类标准（2005年）将所有声带白斑患者进行病理分型，主要包括：重度异型增生、鳞状上皮单纯增生、轻度异型增生、原位癌及中度异型增生。选用VEGF，Survivin兔抗人多克隆抗体试剂；p53、Ki-67鼠抗人单克隆抗体；福州迈新公司生产的免疫组化试剂盒，对病例石蜡标本二步法免疫组织化学染色检测蛋白表达。Ki-67、p53阳性物质分布在细胞核内，VEGF在细胞质及细胞膜均可阳性染色。

1.3 判定方法

（1）细胞核阳性：根据占病变上皮细胞总数的比例，也就是阳性范围进行判定，①强阳性（+++）：阳性细胞数＞50%；②阳性（++）：阳性细胞数26%～50%；③弱阳性（+）：阳性细胞数5%～25%；④阴性（-）：阳性细胞数＜5%。

（2）细胞膜阳性和细胞质阳性：①阳性细胞数所占比例：3分：阳性细胞＞50%；2分：阳性细胞26%～50%；1分：阳性细胞1%～25%；0分：未见阳性细胞着色。②根据免疫组化检查结果中的染色范围和染色强度进行判断，3分：深棕黄色染色；2分：中等强度棕黄色染色；1分：浅棕黄色染色；0分：上皮细胞阴性染色。综合评分为两项积分的乘积：阴性（-）：0分；（+++）：7～9分；（++）：4～6分；（+）：1～3分。

1.4 统计学方法

采用SPSS 23.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（）表示，两组间比较采用t检验；计数资料用率表示，组间比较采用x2检验，将统计学检验水准设定为：α=0.05，P小于0.05象征数据有差异。

2 结 果

声带白斑伴上皮单纯增生和声带良性病变中的Ki-67、p53及VEGF表达，差异无统计学意义（P＞0.05）。声带白斑伴上皮异型增生中的Ki-67、p53阳性表达比声带白斑伴上皮单纯增生、声带良性病变的级别明显增高，差异有统计学意义（P＜0.05）。

3 讨 论

声带白斑的的病因复杂，病理类型较多，临床治疗和随访的标准缺乏统一性。有相关研究表明，如何有效预测声带白斑中癌前病变的病理学特点、基因血特点及生物标志物阳性表达情况等是未来临床研究的重点方向[2]。相关研究证实，导致多种肿瘤发生的原因之一为抑癌基因p53的突变或缺失[3]。也有学者研究发现，Ki-67是用判断细胞增殖活性的参考指标，能够预测肿瘤的分化、浸润转移及预后判断。吴昆曼的研究指出，VEGF作为血管内皮细胞生长因子，在肿瘤血管形成中发挥着重要的作用。上述因子与肿瘤的发证和发展之间存在着较为复杂的关系

本组研究发现Ki-67、p53及VEGF表达在声带白斑伴上皮单纯增生和声带良性病变中的级别之间相比较差异无统计学意义（P＞0.05），并且Ki-67、p53及VEGF蛋白在声带白斑伴上皮异型增生中的阳性表达比声带白斑伴上皮单纯增生、声带良性病变中的级别明显增高，差异有统计学意义（P＜0.05），这提示异型增生程度会随着阳性级别程度的增高而越严重。VEGF在不同病变组织中的阳性表达差异无统计学意义，这对病变严重程度并无明显的提示性作用。而临床需要对Ki-67、p53中等级别以上阳性表达的声带白斑伴上皮异型增生者加强观察和随访。Ki-67、p53可以从分子生物学水平来反应生物学特性和细胞异常增殖情况，且对异型增生向恶性转变的早期诊断及预后预测有重要的指导意义。

综上所述，Ki-67、p53阳性级别在声带白斑伴上皮异型增生中比声带良性病变明显增高，能够从分子生物学水平反应细胞异常增殖情况和生物学特性，且同时对可能对诊断异型增生、癌前病变和判断预后有重要的提示作用，临床建议对于即使声带白斑伴轻．中度异型增生及Ki-67、p53中等级别以上阳性表达者需要加强密切随访。