ZO-1 相关性核酸结合蛋白表达对原发性膀胱癌癌细胞增殖、凋亡的作用研究

陈秀俭

（河南省滑县人民医院 滑县456400）

膀胱癌是临床多发泌尿系恶性肿瘤，膀胱黏膜处高发，隐匿性强，90%以上仅表现为血尿，但血尿肉眼可见时多数已至中晚期[1]。血清肿瘤标志物检测早期膀胱癌敏感性较低，临床急需寻找特异性、敏感性高的膀胱癌相关分子标志物，以便早期确诊、治疗。紧密连接蛋白主要构成部分有闭锁小带蛋白-1相关性核酸结合蛋白（ZONAB），在多种肿瘤组织内显示变异表达，细胞学研究指出，ZONAB 在膀胱癌组织中表达异常，可能参与肿瘤的发病、发展[2]。本研究旨在探讨ZONAB 表达在原发性膀胱癌癌细胞增殖、凋亡中的作用机制。现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年6月～2019年7月我院收治的原发性膀胱癌患者64例为研究对象，男41例，女23例；年龄48～64 岁，平均（56.03±3.01）岁；体质量指数17.8～24.9 kg/m2，平均（21.36±1.05）kg/m2。本研究经医院医学伦理委员会审批通过。

1.2 纳入及排除标准 纳入标准：（1）病理组织学确诊；（2）原发性膀胱癌；（3）未经治疗；（4）患者及其家属知情研究并签署知情同意书。排除标准：（1）继发性膀胱癌患者；（2）伴感染性疾病者；（3）合并自身免疫性疾病者；（4）其他肿瘤疾病患者。

1.3 检测方法 取每位膀胱癌患者的膀胱癌、癌旁组织各1 块（1 cm×1 cm×1 cm），生理盐水洗涤，液氮保存，随后转至-80℃冰箱保存；取60～100 mg 标本加Trizol 1 ml，提取总RNA，以分光光度计检测所提取RNA 吸光值，用实时荧光定量PCR 技术检测ZONAB 基因、增殖基因、凋亡基因表达情况。实时荧光定量PCR 仪购自中山大学达安基因股份有限公司，所用试剂、试剂盒均为仪器配套提供，并由相同资深专科检验医师规范完成。

1.4 观察指标 （1）对比膀胱癌组织、癌旁组织的ZONAB mRNA 表达量。（2）对比膀胱癌组织、癌旁组织增殖基因，包括核转运蛋白（KPNA2）、HS 糖蛋白（HSG）、Yes 相关蛋白（YAP）mRNA 的表达量。（3）对比膀胱癌组织、癌旁组织凋亡基因，B 淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、胱冬肽酶-3（Caspase-3）、胱冬肽酶-7（Caspase-7）、抗凋亡因子（Livin）、凋亡抑制蛋白（Survivin）mRNA 表达量。（4）分析膀胱癌组织、癌旁组织ZONAB mRNA 表达量与增殖基因mRNA、凋亡基因mRNA 表达量的关系。

1.5 统计学处理 数据采用SPSS21.0 统计软件学分析处理。符合正态分布的计量资料以（±s）表示，两组间比较采用t检验。相关性用Pearson 相关分析。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 膀胱癌组织、 癌旁组织ZONAB mRNA 表达量分析 膀胱癌组织ZONAB mRNA 表达量较癌旁组织高（P＜0.05）。见表1。

表1 膀胱癌组织、癌旁组织ZONAB mRNA 表达量分析（±s）

表1 膀胱癌组织、癌旁组织ZONAB mRNA 表达量分析（±s）

组织 n ZONAB mRNA 表达量膀胱癌组织癌旁组织6464 tP 139.67±15.7697.56±9.4818.317＜0.001

2.2 膀胱癌组织、癌旁组织增殖基因mRNA 表达量分析 膀胱癌组织KPNA2、HSG、YA 的mRNA 表达量较癌旁组织高（P＜0.05）。见表2。

表2 膀胱癌组织、癌旁组织增殖基因mRNA 表达量分析（±s）

表2 膀胱癌组织、癌旁组织增殖基因mRNA 表达量分析（±s）

组织 n KPNA2 HSG YAP膀胱癌组织癌旁组织6464 tP 129.68±13.6795.33±9.0216.779＜0.001121.29±14.3882.67±8.0618.742＜0.001123.54±13.6698.77±11.8010.978＜0.001

2.3 膀胱癌组织、癌旁组织凋亡基因mRNA 表达量分析 膀胱癌组织Bcl-2、Livin、Survivin 的mRNA表 达 量 较 癌 旁 组 织 高，Caspase-3、Caspase-7 的mRNA 表达量较癌旁组织低，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 膀胱癌组织、癌旁组织凋亡基因mRNA 表达量分析（±s）

表3 膀胱癌组织、癌旁组织凋亡基因mRNA 表达量分析（±s）

组织 n Bcl-2 Livin Survivin Caspase-3 Caspase-7膀胱癌组织癌旁组织6464 tP 113.67±12.3993.05±10.0610.336＜0.001126.54±13.0782.13±8.2922.955＜0.001101.77±11.2383.08±8.1410.780＜0.00174.05±7.34102.66±11.3916.891＜0.00179.67±7.9291.06±8.447.873＜0.001

2.4 分析ZONAB mRNA 表达与增殖基因mRNA、凋亡基因mRNA 的关系 经Pearson 分析，ZONAB mRNA 与增殖基因mRNA、凋亡基因Bcl-2、Livin的 Survivin、mRNA 呈 正 相 关， 与 Caspase-3、Caspase-7 的mRNA 呈负相关，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 分析ZONAB mRNA 表达量与增殖基因mRNA、凋亡基因mRNA 的关系

3 讨论

近年来膀胱癌患病率有显著升高趋势，且隐匿性强，发现时往往已是中晚期。因此临床需寻找敏感性高、诊断效果可靠的检测手段，以早确诊，早治疗[3]。ZONAB 激活进入细胞核后高特异性结合增殖细胞核抗原（PCNA）启动子，刺激细胞恶性转化，研究表明，ZONAB 在异常增殖、分化细胞内呈现高表达[4～5]。本研究结果显示，与癌旁组织对比，膀胱癌组织ZONAB mRNA 高表达（P＜0.05），表明ZONAB可能介导膀胱癌的发病、发展。

有研究显示，增殖基因表达紊乱为膀胱癌核心进展机制，增殖基因高表达，抗增殖基因弱表达[6～7]。KPNA2 是核转运蛋白，已有研究发现，其在卵巢癌、食管癌中呈异常表达状态[8]。YAP 是下游转录因子，可能介导肿瘤分期、淋巴结转移。HSG 主要调节线粒体融合过程，恶性细胞过度增殖会致能量大量消耗，线粒体持续代谢补充，因此，HSG 高表达属恶性细胞活跃增殖关键证据。本研究结果显示，膀胱癌组织KPNA2、YAP、HSG 的mRNA 高表达（P＜0.05），与上述机理基本相符。此外，与细胞增殖活性对应的是凋亡活性，当凋亡活性降低时，恶性细胞出现持续增殖及恶性转变[9]。Bcl-2、Livin、Survivin 均为凋亡抑制因子，Caspase-3、Caspase-7 为凋亡行为主要执行者，已有研究显示，在结肠癌、前列腺癌中上述指标存在表达失衡情况[10]。本研究发现结果显示，膀胱癌组织内Livin、Bcl-2、Survivin 的mRNA表达高于癌旁组织，Caspase-3、Caspase-7 的mRNA低于癌旁组织，经Pearson 分析，ZONAB mRNA 表达与增殖基因mRNA、凋亡基因mRNA 呈正相关，与Caspase-3、Caspase-7 的mRNA 呈负相关（P＜0.05），表明ZONAB 表达参与癌细胞增殖、凋亡。综上所述，闭锁小带蛋白-1 相关性核酸结合蛋白表达与原发性膀胱癌癌细胞增殖、凋亡关系密切，可为临床评估病情提供数据支持。