呼吸道感染病原体IgM抗体检测结果分析及其干扰因素探讨

江云川 龚丽坤 高卫 杨婷 沈蓝 张瑛

[摘要] 目的 分析呼吸道感染病原体IgM抗体检测结果，总结呼吸道感染病原体分布情况以及其相关影响因素。方法方便选取2018年4月—2019年2月该院收治的1 004例疑似呼吸道感染患儿的血清标本为研究对象，应用间接免疫荧光法对肺炎支原体、乙型流感病毒、甲型流感病毒、腺病毒、嗜肺军团菌、肺炎衣原体、呼吸道合胞病毒、副流感病毒、Q热立克次体9项病原体IgM抗体，分析检测结果。 结果 1 004例疑似呼吸道感染患儿的血清标本中IgM总阳性率40.04%，其中肺炎支原体阳性率最高，占32.84%，乙型流感病毒阳性率次之，占29.64%。402例阳性样本中单一感染338例，占84.08%，混合感染64例，占15.92%，而在混合感染样本中肺炎支原体+乙型流感病毒感染混合所占比例最高，为45.31%。而且肺炎支原体、乙型流感病毒、嗜肺军团菌1型、呼吸道合胞病毒在不同年龄段儿童之间的病原体检测阳性率差异有统计学意义（MP：χ2=12.475，P=0.006;IFB：χ2=19.554，P=0.000;LP1：χ2=11.999，P=0.007;RSV：χ2=35.992，P=0.000）。 结论 呼吸道感染的病原体主要以肺炎支原体、乙型流感病毒為主，但受流行病学因素、病原体协同易感性以及试剂交叉反应等因素影响，间接免疫荧光法检测呼吸道感染病原体IgM抗体有可能导致阳性重和率升高，针对此情况临床可采用病原体抗原检测、分子生物学检测、病原体分离培养等方法加以分析验证，保证疾病诊断的准确性。

[关键词] 呼吸道感染;病原体IgM抗体;间接免疫荧光法;干扰因素

[中图分类号] R446          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-0742（2020）06（c）-0172-03

Respiratory Tract Infection Pathogen IgM Antibody Detection Result Analysis and Its Interference Factors

JIANG Yun-chuan1， GONG Li-kun1， GAO Wei1， Yang Ting1， SHEN Lan2， ZHANG Ying3

1.Department of Medical Laboratory， Chuxiong Yi Autonomous Prefecture Traditional Chinese Medicine Hospital， Chuxiong， Yunnan Province， 675000 China; 2.Department of Emergency Medicine， South Yunnan Central Hospital （Honghe First People's Hospital）， Honghe Prefecture， Yunnan Province， 661199 China; 3.Department of Medical Laboratory， First People's Hospital of Zhaotong， Yunnan Province， 675000 China

[Abstract] Objective To analyze the detection results of IgM antibody against pathogens of respiratory tract infection， and to summarize the distribution of pathogens of respiratory tract infection and their related influencing factors. Methods Serum specimens of 1004 children with suspected respiratory tract infections admitted to the hospital from April 2018 to February 2019 were convenient selected as the research subjects， Legionella pneumophila， Chlamydia pneumoniae， respiratory syncytial virus， parainfluenza virus， Q fever Rickettsia 9 pathogen IgM antibodies， analysis and detection results. Results The total positive rate of IgM in 1004 children with suspected respiratory tract infection was 40.04%. Among them， the positive rate of Mycoplasma pneumoniae was the highest， accounting for 32.84%， followed by the positive rate of influenza B virus， accounting for 29.64%. Among the 402 positive samples， there were 338 single infections， accounting for 84.08%， and 64 mixed infections， accounting for 15.92%. Among the mixed infection samples， the proportion of Mycoplasma pneumoniae + influenza B virus infection was the highest， which was 45.31%. And the positive rate of pathogen detection of Mycoplasma pneumoniae， Influenza B virus， Legionella pneumophila type 1 and respiratory syncytial virus in children of different ages was significantly different（MP：χ2=12.475， P=0.006; IFB：χ2=19.554， P=0.000; LP1：χ2=11.999， P=0.007; RSV：χ2=35.992， P=0.000）. Conclusion The pathogens of respiratory tract infections are mainly Mycoplasma pneumoniae and influenza B virus， but influenced by epidemiological factors， synergistic susceptibility of pathogens and reagent cross-reactivity and other factors， indirect immunofluorescence detection of respiratory tract infection pathogen IgM antibody may lead to an increase in the rate of positive recombination， for this situation can be clinically analyzed by pathogen antigen detection， molecular biology detection， pathogen isolation culture and other methods to ensure the accuracy of disease diagnosis.

[Key words] Respiratory tract infection; Pathogen IgM antibody; Indirect immunofluorescence; Interference factors

呼吸道感染性疾病为临床常见的一种肺部疾病，主要由于机体感染细菌、病毒、衣原体、支原体等病原体而致病。在临床上，不同病原体导致的感染其治疗方法不尽相同，但因为不同病原体引起感染的临床表现无显著的差异，故若依靠临床症状体征观察以及临床经验难以明确诊断治疗本病，极易造成抗生素滥用现象或耽误病情，因此，临床往往采用实验室检查手段明确呼吸道感染的病原体[1]。该文对2018年4月—2019年2月该院收治的1 004例疑似呼吸道感染患儿进行的9项病原体IgM抗体实验室检测结果进行分析，现报道如下。

1  对象与方法

1.1  研究对象

方便选取该院收治的1 004例疑似呼吸道感染患儿的血清标本为研究对象，其中有626例男患儿，378例女患儿，年龄在6个月～13岁之间，平均年龄（5.06±1.98）岁，包括96例6个月～1岁，118例1～3岁，633例3～6岁，157例6～13岁。患儿家属对该研究内容知情，自愿参与，签订了同意书，且该研究经该院伦理委员会审批同意。

1.2  方法

1.2.1  仪器与试剂  奥林巴斯BX-51荧光显微镜;九项呼吸道感染病原体1 gM抗体检测试剂盒（间接免疫荧光法）（国械注进20173406446）。

1.2.2  检测方法  （1）标本采集：收集受检者的空腹肘静脉血2～3 mL，并进行离心处理提取血样本中血清。（2）间接免疫荧光法检测：选用间接免疫荧光法检测9项病原体的IgM抗体，具体操作方法：①按照1：1的比例将血样样品进行稀释，再经过吸附剂处理、离心后分别取15 μL稀释后血清样品添加到在载玻片的10个检测孔中，同时每次实验用试剂盒配套的阴性、阳性对照，做阴性、阳性对照片各一张，置于湿盒内放37摄氏度恒温箱静置90 min;②用PBS缓冲液洗涤2次，蒸馏水洗涤1次;③晾干后加入适量荧光素结合物，置于湿盒内放37摄氏度恒温箱静置30 min后洗涤（重复步骤②）、晾干并分别滴入适量封闭介质，封片;④在荧光显微镜下观察检验结果，根据试剂盒说明书的标准判断阴阳性。

1.3  观察指标

①分析9项呼吸道感染病原体IgM抗体的检测结果;②比较不同年龄段患儿呼吸道感染病原体检测阳性率的差异。

1.4  统计方法

数据应用SPSS 21.0统计学软件进行分析，其中计数资料用（%）表示，进行χ2检验;计量资料用（x±s）表示，进行t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2  结果

2.1  9项呼吸道感染病原体IgM抗体检测结果分析

1 004例疑似呼吸道感染患儿的血清标本中有402例（469项病原体）IgM抗体检测阳性，阳性率40.04%。其中，单一感染338例，占84.08%，混合感染64例，占15.92%。而单项呼吸道感染病原体检测结果显示，肺炎支原体阳性率最高，占32.84%，乙型流感病毒阳性率次之，占29.64%，见表1。而且在混合感染样本中肺炎支原体+乙型流感病毒感染混合所占比例最高，为45.31%，见表2。

2.2  不同年龄段患儿呼吸道感染病原体检测阳性率分析

肺炎支原体、乙型流感病毒、嗜肺军团菌1型、呼吸道合胞病毒在4个年龄组之间的病原体检测阳性率差异有统计学意义（P<0.05），见表3。

3  讨论

在临床中大多数感染呼吸道病原体后的患儿具有病情重、并发症多等特点，严重影响着患儿的生长发育[2]。因此，快速明确呼吸道感染病原体，并了解相关病原体感染分布状况，对于促进患儿身心健康发展至关重要。

临床检测呼吸道病原体的常用方法有培养法、PCR扩增技术、抗原抗体检测等。PCR扩增技术是当前研究中证实敏感度最高的一种检测方法，但受检测成本、检测条件等因素限制，难以推广应用。培养法是明确病原体的金标准，但对检测技术要求较高，培养时间长，而且容易受前期应用抗生素影响，导致检测阳性率偏低。该研究应用的间接免疫荧光法检测9项呼吸道感染病原体具有敏感性、特异性良好，检测快速等优点，尤其适合于临床筛查。

该研究结果显示，1 004例疑似呼吸道感染患儿的血清标本中有402例IgM抗体检测阳性，阳性率40.04%，與其他文献报道的宜宾地区（35.0%）[3]相比，该地区的呼吸道病原体检测阳性率较高，但较深圳地区的57.2%[4]要低，这可能与地域的差异性有关。

在病原体合并感染中，检测出混合感染64例占15.92%，其中肺炎支原体+乙型流感病毒感染混合所占比例最高，为45.31%，与北京地区（32.8%）[5]的报道较高。笔者分析该地区混合感染阳性率较高的可能原因有以下几项：①人群易感性：儿童机体免疫相对较弱，淋巴细胞数量较少，抑制病毒的能力较弱，极易同时感染多种病原体[6]。此外，受气候环境、空气质量差等因素影响，病原体的协同易感性因素也会导致混合感染阳性升高。②试剂交叉反应：在应用间接免疫荧光法检测9项病原体的过程中有可能是抗体之间发生冲突，或与其它试剂有效成分发生交叉反应，进而影响检测结果。针对此因素，对于混合感染阳性的样本可通过更换试剂厂家重复检测1次进行验证[7]。另外在临床实践中还发现嗜肺军团菌1型IgM检测在血清稀释1：1的时候假阳性率偏高与临床症状差异较大， 其原因很可能是非军团菌感染的患者也经常出现低滴度的交叉抗体，根据说明书的建议在嗜肺军团菌1型IgM检测时适当增加稀释倍数可以有效提高阳性预测值， 便于临床诊断工作。

此外，该研究结果显示，不同年龄组患儿的不同呼吸道感染病原体易感性是不完全一致的，肺炎支原体和乙型流感病毒的抗体阳性率在3～6岁最高，分别为17.69%、17.38%;嗜肺军团菌1型抗体检测阳性率在6～13岁最高，占12.74%;呼吸道合胞病毒抗体检测阳性率在6个月～1岁最高，占11.46%。学龄前儿童肺炎支原体、乙型流感病毒检测阳性率高可能是儿童免疫功能尚未发育完善，而且此阶段儿童在主要在幼儿园中进行集体活动，极易发生相互感染[8]。而嗜肺军团菌1型阳性率在6～13岁较高，具体原因不明确，但大多数患儿是在机体感染流感病毒后并发混合感染的。呼吸道合胞病毒具有普遍易感性，6个月～1岁的幼儿机体免疫力低下，且其逐渐频繁与外界接触。

综上所述，呼吸道感染的病原体主要以肺炎支原体、乙型流感病毒为主，但受流行病学因素、病原体协同易感性以及试剂交叉反应等因素影响，间接免疫荧光法检测呼吸道感染病原体IgM抗体有可能导致阳性重和率升高，针对此情况临床可采用病原体抗原检测、分子生物学检测、病原体分离培养等方法加以分析验证，保证疾病诊断的准确性。

[参考文献]

[1]  陈武，谢书琳，陈立坚.九项呼吸道感染病原体lgM抗体联合检测在呼吸道感染诊治中的临床应用价值[J].医学检验与临床，2017，28（8）：47-49.

[2]  莫江萍，潘伟.585例儿童急性下呼吸道感染病毒病原学特征分析[J].中国病原生物学杂志，2016，11（1）：79-81，86.

[3]  王莉.宜宾地区973例儿童急性呼吸道感染9种病原体抗体分析[J].四川医学，2015，36（3）：389-391.

[4]  曹科，罗小娟，崔晓燕，等.深圳地区急性呼吸道感染住院患儿病原检测结果分析[J].检验医学与临床，2015，12（3）：380-382.

[5]  张淑艳，王娜，李婧，等.北京地区1942例儿童急性呼吸道感染病原体检测结果分析[J].临床军医杂志，2015，43（6）：617-619，622.

[6]  周博.急性呼吸道感染儿童血清8种呼吸道病原体IgM抗体检测分析[J].临床肺科杂志，2017，22（1）：132-134.

[7]  郭敏，肖密丝，张莹莹，等.手足口病相关肠道病毒感染血清IgM抗体交叉反应及动态变化[J].临床检验杂志，2016，34（10）：762-764.

[8]  龚慧，杜冀晖，高灵莉，等.深圳市5918例呼吸道感染患者9种呼吸道病原体IgM抗体检测分析[J].国际检验医学杂志，2017，38（19）：2657-2659，2662.

（收稿日期：2020-03-23）

[作者简介] 江云川（1983-），男，云南楚雄人，本科，主管检验师，研究方向：临床医学检验。

[通讯作者] 张瑛（1985-），女，云南昭通人，本科，主管檢验师，研究方向：临床医学检验， E-mail：308448544@qq.com。