5种植物源农药对苹果斑点落叶病的防效评价*

赵国康，李 焰，张树武，徐秉良，刘 佳

（甘肃农业大学植物保护学院，甘肃省农作物病虫害生物防治工程实验室，兰州 730070）

苹果斑点落叶病是苹果上的主要病害，主要为害幼叶，严重时也可为害叶柄、1年生枝条和果实[1]，不仅削弱树势，而且还降低苹果的产量和品质，造成巨大的经济损失[2]。目前，苹果斑点落叶病多采用化学防治，如5%己唑醇微乳剂、80%代森锰锌可湿性粉剂、三唑类杀菌剂戊唑醇和苯醚甲环唑等药剂[3-5]。然而，化学防治虽然效果较好，但是对环境介质（大气、土壤和水体）、农作物和环境生物的污染较为严重，而且破坏果园的生态环境，影响果实品质，甚至产生食品安全问题。因此，寻找低毒、高效、对环境友好的农药变得极为重要[6-7]。

植物源杀菌剂是利用植物中的某些抗菌物质或诱导产生的植物防卫素，杀死或有效抑制某些病原菌的生长[8-10]。植物源杀菌剂具有毒性弱、无持久性残留和对环境友好等特点，已成为新农药研发的热点。相关研究表明，植物源农药种类较多，其中，乙蒜素是20世纪60年代我国自行研制开发的广谱高效杀菌剂，80%乙蒜素可抑制粮油、棉花、蔬菜、花卉、药材、茶叶等作物以及渔业、蚕业的数十种病菌[11-12]；小檗碱是从中草药黄连中提取分离的喹啉类生物碱，对细菌和真菌都有抑制效果[13]。刘祥东等[14]研究表明，植物源杀菌剂对桃叶片穿孔病防效较好。关于植物源杀菌剂防治苹果斑点落叶病的研究，目前为止鲜有报道。

本试验采用菌丝生长速率法和离体叶片刺伤法测定了5种植物源农药对苹果斑点落叶病菌菌落生长的抑制作用和离体叶片的保护作用，旨在筛选防治苹果斑点落叶病的最佳药剂。

1 材料与方法

1.1 试验材料

供试的苹果斑点落叶病菌（Alternaria mali）菌株由甘肃农业大学植物保护学院植物病原学实验室分离保存。供试叶片采集于甘肃省兰州市西固区苹果园‘新红星’树上，树龄20年。

供试药剂：20%乙蒜素乳油，河南省南阳卧龙农药厂生产；0.3%丁子香酚可溶液剂，南通神雨绿色药业有限公司生产；5%香芹酚水剂，兰州世创生物科技有限公司生产；1.3%苦参碱水剂，恒源伟业生物科技发展有限公司生产；0.5%小檗碱水剂，潍坊奥丰作物病害防治有限公司生产。

1.2 试验方法

（1）药剂对苹果斑点落叶病菌菌落生长的抑制作用。初筛试验，采用半倍稀释法[15]将5种药剂配制成表1所示的推荐质量浓度，然后，分别加入灭菌后冷却至50 ℃的PDA培养基中，充分振荡混匀，均匀倒入培养皿中，以加等量无菌水的培养基为空白对照。培养基凝固完全后，用直径为5 mm的打孔器在培养5 d后的苹果斑点落叶病菌菌落边缘打取菌饼，接种在每个处理的培养基中央。接种后在25 ℃恒温光照培养箱中黑暗培养5 d，采用十字交叉法测量菌落直径，计算生长抑制率。

生长抑制率（%）=［（对照菌落直径-处理菌落直径）/（对照菌落直径-0.5）］×100

根据初筛试验中含药培养基上苹果斑点落叶病菌的生长情况确定供试药剂的5个稀释质量浓度（表2），如上述方法测定生长抑制率，测定毒力。

（2）药剂对苹果斑点落叶病菌菌丝干重的影响。将5种药剂分别配制成如表3浓度的PDB培养液各100 mL，以加入等量无菌水为对照。在PDB培养液中加入培养7 d的苹果斑点落叶病菌菌饼，在27 ℃下摇床培养7 d，烘干，称菌丝干重。

（3）药剂对苹果斑点落叶病离体叶片的保护作用。选取新鲜叶片，先用自来水冲洗干净，后用75%酒精消毒15 s，再用无菌水冲洗，置于超净工作台晾干。将0.3%丁子香酚可溶液剂2.14 μg/mL、5%香芹酚水剂12.50 μg/mL、20%乙蒜素乳油5.56 μg/mL、1.3%苦参碱水剂26.00 μg/mL、0.5%小檗碱水剂100.00 μg/mL分别涂抹于叶片上，晾干后接种培养5～7 d的苹果斑点落叶病菌菌饼（直径5 mm），每处理接种3片叶，每片叶接种2个点，每处理共6次重复，对照叶片先涂抹无菌水，后接种病原菌。接种的叶片在25 ℃培养箱中保湿培养10 d后，用十字交叉法测量病斑长度，利用椭圆公式计算病斑面积。

病斑面积（mm2）=1/4×π×长径×短径

1.3 数据处理

采用Excel 2010制作相关表格，采取DPS软件将抑制率转换成几率值，将质量浓度转变成质量浓度的对数，以各个药剂质量浓度的对数值为x，相应的几率值为y，得到毒力回归方程y=a+bx，计算供试药剂有效中浓度EC50值，比较各药剂的相对抑制效果[16]。

2 结果与分析

2.1 5种植物源农药推荐浓度对苹果斑点落叶病菌生长的抑制作用

从表1可以看出，5种植物源农药对苹果斑点落叶病菌均具有抑制作用。其中，0.3%丁子香酚可溶液剂、5%香芹酚水剂和20%乙蒜素乳油的抑制率最高，其次为1.3%苦参碱水剂，0.5%小檗碱水剂的抑制率最低，仅为17.0%，故筛去，选择剩余4种药剂进行毒力测定。

表1 5种植物源农药推荐浓度对苹果斑点落叶病病菌的抑制率

2.2 4种植物源农药不同稀释浓度对苹果斑点落叶病菌生长的抑制作用

从表2和图1均可以看出，4种植物源农药各浓度处理对苹果斑点落叶病菌菌落生长均有一定的抑制作用。其中，0.3%丁子香酚可溶液剂对菌落生长的抑制率最高，EC50为1.18 µg/mL；20%乙蒜素乳油和5%香芹酚水剂对菌落生长的抑制率次之，EC50分别为4.86、5.56 µg/mL；1.3%苦参碱水剂对菌落生长的抑制率最差，EC50为7.97 µg/mL。

表2 4种植物源农药不同稀释浓度对苹果斑点落叶病菌的抑制率

图1 4种植物源农药对苹果斑点落叶病菌菌落生长的抑制效果

2.3 5种植物源农药对苹果斑点落叶病菌菌丝干重的影响

从表3可以看出，5种植物源农药处理的苹果斑点落叶病菌菌丝干重均显著小于对照。其中，0.3%丁子香酚可溶液剂2.14 μg/mL处理干重为1.2 mg，5%香芹酚水剂12.50 μg/mL处理干重为3.3 mg，这2种药剂效果较好，而0.5%小檗碱水剂100.00 μg/mL、20%乙蒜素乳油5.56 μg/mL和1.3%苦参碱水剂26.00 μg/mL处理效果略差。

表3 加入5种植物源农药PDB培养液的苹果斑点落叶病菌菌丝干重

2.4 5种植物源农药对苹果斑点落叶病菌的离体叶片保护作用

从表4可以看出，与对照相比，5种植物源农药对接种苹果斑点落叶病菌的离体叶片均有显著的保护作用。其中，5%香芹酚水剂12.50 μg/mL处理对接种苹果斑点落叶病菌的离体叶片的保护作用最好，病斑扩展面积最小，为19.63 mm2，且与对照相比差异显著；其次为0.3%丁子香酚可溶液剂2.14 μg/mL、1.3%苦参碱水剂26.00 μg/mL和20%乙蒜素乳油5.56 μg/mL处理，0.5%小檗碱水剂100.00 μg/mL处理效果最差，病斑扩展面积最大，为82.43 mm2。

表4 5种植物源农药对接种苹果斑点落叶病菌叶片的保护作用

3 结论与讨论

近年来，植物源农药在农作物病害的防治研究中越来越重要。单承莺等[17]对我国植物源农药的发展概况研究发现，我国植物源农药的研究深度与广度均不够，而且有些品种的作用机理是空白。邱德文[18]概述了我国已开发的一些用于农作物病虫害防治的植物源农药种类，如苦参碱、烟碱、鱼藤酮、大蒜素、苦皮藤素、蛇床子素、丁子香酚、香芹酚、藜芦碱、黄芩甙+黄酮、茴蒿素、百部碱、除虫菊素等，但是有关植物源农药对苹果斑点落叶病的防治方面目前报道较少。

本试验发现，5种植物源农药对苹果斑点落叶病菌的菌落生长和菌丝干重均具有抑制作用，其中，0.3%丁子香酚可溶液剂对苹果斑点落叶病菌菌落和菌丝生长的抑制作用最为显著。魏晓兵等[19]研究表明，0.3%丁子香酚可溶液剂在田间对人参灰霉病的防效可达到70.07%。兰成忠等[20]研究表明，丁子香酚对辣椒疫病的田间防治效果达86.28%，显著优于常用化学杀菌剂克露（代森锰锌·霜脲氰）等。

此外，本试验结果表明，5%香芹酚水剂对接种苹果斑点落叶病菌的离体苹果叶片的保护作用显著好于其他4种药剂。董芳等[21]研究表明，5%香芹酚水剂500倍液对葡萄霜霉病的田间防效较好，处理后的葡萄增产16.13%。席金凤[22]研究表明，5%香芹酚水剂对马铃薯早疫病的防效为57.07%，对马铃薯晚疫病的防效为53.60%。植物源药剂与化学药剂混合使用或多种植物源药剂混合使用能否有效提升对苹果斑点落叶病的防治效果，有待于进一步的研究。