犬吉氏巴贝斯虫病的诊治分析

翟晓虎，张风荣，李 玲，赵学刚，贺卫华

(1.江苏农牧科技职业学院，江苏 泰州 225300；2.山东畜牧兽医职业学院，山东 潍坊 261061)

巴贝斯虫是由蜱虫传播的一种血液寄生虫，全世界广泛分布。笔者近期接诊1例犬吉氏巴贝斯虫感染的病例，使用阿托伐醌(Atovaquone)和阿奇霉素联合治疗，后期使用克林霉素和强力霉素联合用药方法进行巩固，效果良好，诊治过程介绍如下。

1 病例介绍

松狮犬，3岁，雄性未绝育，体重为26 kg，主述：该犬1周前开始出现精神不好，食欲减退，2 d前食欲废绝，喝水量较之前减少，尿液呈棕褐色，不愿运动，嗜睡。

2 临床检查

听诊呼吸频率为52 次/min，心率160 次/min，体温40.1 ℃。视诊可见该犬精神萎靡、喜卧、全身无力，鼻镜干燥，被毛杂乱无光泽，可视黏膜苍白、黄染。

3 实验室检验

3.1 血常规检测 头静脉采集血液，EDTA-K2(乙二胺四乙酸二钾)抗凝。采用Mindray BC-5000 Vet兽用全自动血液细胞分析仪检查血常规。结果显示，红细胞数(RBC)2.14× 1012/L(正常值5.5× 1012～8.5× 1012/L、红细胞压积(HCT)9.4%(正常值37%～55%)、血红蛋白浓度(HGB)29 gL(正常值110～190 g/L)和血小板数(PLT)46× 109/L(正常值117× 109～490× 109/L)，均严重低于正常范围，说明该犬有严重的贫血。其他检测结果未见异常。

3.2 血涂片检查 EDTA抗凝血制备血涂片，瑞氏吉姆萨染色镜检，结果见中插彩版图1。在多个红细胞内见淡蓝色的环形虫体，疑似为犬吉氏巴贝斯虫。另外可见红细胞大小不均，存在少量大红细胞、球形红细胞、多染性红细胞和有核红细胞。白细胞大小、着色良好。

3.3 血液生化检测 头静脉采集血液，肝素锂抗凝，采用斯马特SMT-120V全自动生化分析仪检测血液生化指标。血液生化结果显示，总胆红素升高，其他未见异常，提示该犬有溶血的可能。

3.4 PCR检测 采用蛋白酶K裂解、苯酚抽提的方法从EDTA抗凝血中提取该犬血液中的DNA，根据犬巴贝斯虫18S rRNA 基因设计的犬吉氏巴贝斯虫和犬巴贝斯虫通用引物，上游引物：5′-GTCTTGTAATTGGAATGATGGTGAC-3′，下游引物：5′-ATGCCCCCAACCGTTCCTATTA-3′，扩增目的片段339 bp，引物由英潍捷基(上海)贸易有限公司合成[1]。25 μL PCR反应体系：2×TaqPCR Master Mix 12.5 μL，10 mmol/L 上、下游引物各0.5 μL，模板DNA 2 μL，补水至25 μL。PCR 循环参数:94 ℃预变性5 min；94 ℃变性30 s，60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，重复10个循环，每个循环退火温度降0.5 ℃；然后94 ℃变性15 s，55 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，重复25个循环；最后72 ℃延伸5 min。PCR产物用1.5%的琼脂糖凝胶电泳鉴定。鉴定结果如图2所示，待检样品PCR扩增条带大小为339 bp，与设计的理论值相符，与阳性对照一致，同时阴性对照没有条带扩增，说明没有假阳性。因此可判定该犬感染了巴贝斯虫。

图2 PCR检测电泳图

结合临床症状、血常规检查、血涂片镜检可见红细胞内巴贝斯虫虫体和PCR可检测到犬巴贝斯虫基因片段，诊断为犬吉氏巴贝斯虫感染。

4 治疗与转归

治疗犬吉氏巴贝斯虫病的原则为杀虫、补血、保肝、防止继发感染。因该犬贫血情况较严重，危及生命，需要先给该犬输血。采集健康犬血液进行交叉配血试验。根据该交叉配血结果，输入200 mL新鲜血液[2]，肌内注射促红细胞生成素5.0 mL(1 000 IU/mL)和右旋糖酐铁3.0 mL(0.1 g/mL)以促进血液的生成。该病例使用阿托伐醌[13.3 mg/(kg·bw·d)，口服]和阿奇霉素[10 mg/(kg·bw·d)，口服]联合治疗，连用2周。

治疗过程中需要不断监控患犬的血液学指标，红细胞数量、血红蛋白浓度和红细胞压积。治疗第2天患犬出现呕吐，皮下注射止吐宁0.1 mL/(kg·bw)(10 mg/mL)。治疗第7天，患犬恢复食欲，血常规检查红细胞数4.3×1012/L、红细胞压积22.4%、血红蛋白浓度77 g/L。治疗第14天，红细胞参数恢复到正常范围。为防止复发，使用克林霉素[12.5 mg/(kg·bw·d)，口服]、强力霉素[10 mg/(kg·bw·d)，口服]联合用药方法进行巩固治疗1周。1个月后，该犬所有血液指标正常，PCR检测呈阴性。

5 讨论

巴贝斯虫病在世界广泛分布，在热带、亚热带和温带地区特别严重。犬感染吉氏巴贝斯虫的临床症状主要表现为高热、黏膜苍白、黄染、尿液深黄色或暗褐色。发病时间主要集中在春夏之交和夏秋之交，这也正是巴贝斯虫的传播者蜱虫的活跃期[3]。近年来由于药物的长期使用，部分巴贝斯虫对药物产生耐药，导致该病治疗周期较长[1]。目前在我国流行的犬巴贝斯虫主要为犬吉氏巴贝斯虫[4-5]。吉氏巴贝斯虫感染是一种蜱传播疾病，感染犬可能出现免疫介导性溶血性贫血，治疗不及时可能迅速死亡[6]。该病的致病机理是虫体会在红细胞内繁殖，破坏红细胞引起溶血性贫血，并引起黄疸[7]。患犬常表现精神不佳、喜卧、贫血、发热、黄疸、血红蛋白尿、可视黏膜苍白等症状。急性感染或初次感染巴贝斯虫的犬，血涂片不一定发现虫体，但作为传染原会使感染扩散，只有严重患犬通常可通过血涂片镜检发现虫体而确诊。PCR技术为准确地诊断感染早期的病犬和带虫犬提供了敏感性高、特异性好、试剂容易获得、检测速度快的诊断方法[8]。18S rRNA基因常用于犬巴贝斯虫的PCR检测，结合PCR产物限制性多态性分析(PCR-RFLP)可以鉴别不同种的犬巴贝斯虫[1]。因此，通过结合血涂片血液寄生虫检查和PCR检测可大大提高巴贝斯虫病的检出率，并能区分所感染巴贝斯虫的类型。

治疗犬巴贝斯虫病的杀虫药通常使用抗梨形虫的药物。贝尼尔被视为传统上最为有效的治疗犬巴贝斯虫病的药物，过去临床使用较多。由于贝尼尔的肝毒性较大，使用该药物杀虫的同时需要使用保肝药物，即便如此剂量掌控不好也容易导致患犬死亡。阿托伐醌是抗原虫动物药，用于治疗人类肺孢子虫感染，对于抗巴贝斯虫感染也有一定效果，阿托伐醌联合阿奇霉素治疗吉氏巴贝斯虫最有效，是目前使用较多的治疗犬巴贝斯虫病的药物。近年来，有报道显示，贝尼尔治疗后患犬的复发率较高，阿托伐醌联合阿奇霉素治疗后为了降低复发率，最好使用克林霉素和强力霉素进行巩固治疗。鉴于犬巴贝斯虫很难被完全清除，复发率较高，因此做好疾病的预防十分重要，尤其是生活于犬巴贝斯虫病流行地区或是经常在户外运动的犬一定要定期体外驱虫，切断传播途径。