传统及趁鲜加工工艺对荆芥饮片质量的影响

刘雨晴，许凤清，2，吴德玲，2，廖延武，张 伟，2，赵宏苏

(1.安徽中医药大学药学院，安徽 合肥 230012；2.中药饮片制造新技术安徽省重点实验室，安徽 合肥 230012)

荆芥始载于《神农本草经》，来源于唇形科植物荆芥SchizonepetatenuifoliaBriq. 的干燥地上部分[1]，是临床常用辛温解表药。其性温、味辛，以全草入药，具有解表散风、透疹、消疮之功效，主治风寒感冒、咽喉肿痛及多种皮肤病[2-3]。荆芥主要含有挥发油、黄酮、单萜苷类、甾体等化学成分[4-5]。现代药理研究[6-7]表明，荆芥在抗感染和抗病毒方面具有较好的疗效。

传统荆芥饮片生产加工过程中涉及清洗、软化工序，与水较长时间接触，一方面会导致荆芥中亲水性有效成分流失，另一方面软化切制后的二次干燥也会使荆芥中挥发性成分丢失，从而影响荆芥饮片的质量[8]。因此，荆芥作为一种富含挥发油类成分的全草类药材，其饮片的切制加工工艺对保证其质量优劣起决定性作用。有研究[9]表明，新鲜药材在产地采收后就趁鲜加工成饮片，对于提高中药饮片的质量具有十分重要的意义。2015年版《中华人民共和国药典》以挥发油和胡薄荷酮作为荆芥质量控制的主要指标。现有研究[10-11]表明，荆芥中黄酮类成分之一的橙皮苷具有抗感染、抗病毒、抗氧化等多种药理活性，荆芥总黄酮亦具有抗肿瘤等作用[12-13]。因此，本研究以荆芥饮片挥发油、胡薄荷酮、橙皮苷及总黄酮含量作为指标，通过综合评分法建立荆芥药材及饮片的质量评价标准，并利用正交偏最小二乘判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA)比较传统加工与趁鲜加工方式对荆芥饮片质量的影响，旨在探讨趁鲜加工的合理性与可行性。

1 仪器与试药

1.1 仪器 水分测定装置：湘潭市三星仪器有限公司；挥发油测定器：湘潭市三星仪器有限公司；岛津LC-2030C 3D型高效液相色谱仪：日本岛津公司；ME204E电子天平：梅特勒·托利多仪器有限公司；TU-1810紫外可见分光光度计：北京普析通用仪器有限公司；RHP-100型高速多功能粉碎机：浙江永康市荣浩工贸有限公司；HH-6型数显恒温水浴锅：常州普天仪器制造有限公司；KQ-500DE型数控超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司。

1.2 试药 胡薄荷酮对照品(批号 YBF18052406，纯度≥98%)、橙皮苷对照品(批号 YBF18052412，纯度≥98%)：购于南京元宝峰医药科技有限公司；芦丁标准品(批号 100080-201610，纯度≥92.6%)：购于中国食品药品检定研究院；甲醇、乙腈为色谱纯：德国默克公司；水为纯净水；其他试剂均为分析纯。

荆芥药材于2018年9月13日采自国家中药标准化荆芥种植基地——安徽省亳州市十八里荆芥种植基地，经安徽中医药大学刘守金教授鉴定为唇形科植物荆芥SchizonepetatenuifoliaBriq新鲜地上部分。将原药材割取荆芥地上部分，除去杂质，晒干。传统加工饮片：将原药材喷淋清水，洗净润透，于50 ℃烘1 h，切段，阴干干燥后即得。趁鲜加工饮片：将荆芥新鲜植株除去杂质，经过自然干燥至五成干，切段，阴干干燥即得。

2 方法与结果

2.1 挥发油及胡薄荷酮含量测定 依照2015年版《中华人民共和国药典》，分别取荆芥原药材、传统加工饮片、趁鲜加工饮片对挥发油及胡薄荷酮进行含量测定[3]，结果见表1。

2.2 总黄酮的含量测定

2.2.1 对照品溶液的制备 取芦丁对照品适量，置于50 mL量瓶中，加甲醇溶解，配制成每1 mL含228.84 μg的对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取荆芥饮片粉末(过2号筛)0.5 g，精密称定。置于100 mL具塞磨口三角瓶中，加入甲醇25 mL，密塞，称定质量。水浴加热回流30 min，放置室温，加甲醇补足减失的质量，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 测定方法 取芦丁对照品溶液或供试品溶液，置于25 mL量瓶中，加水至10 mL，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀，放置6 min，再加10%硝酸铝溶液1 mL，摇匀，放置6 min，续加4%氢氧化钠溶液10 mL，加水定容至刻线，摇匀，放置15 min[13]，以相应试剂为空白，进行全波长扫描，结果表明供试品溶液的最大吸收在500 nm处，且阴性对照品无干扰。在该条件下测定吸收度A，计算总黄酮的含量，结果见表1。

2.2.4 线性关系的考察 精密吸取“2.2.1”项下的对照品溶液2、3、4、5、6、7 mL，自“置于25 mL量瓶中”起，按“2.2.3”方法制备系列浓度的芦丁对照品溶液，以浓度(ρ)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标，绘制标准曲线，标准曲线为A=0.011 6ρ+0.012 9，r=0.999 9，线性范围为18.307～64.075 μg/mL。

2.3 橙皮苷含量的测定

2.3.1 色谱条件 色谱柱：SinoChrom ODS-BP(4.6 mm×250 mm，5 μm)。流动相采用乙腈-0.05%磷酸水梯度洗脱程序：0～19 min，20%乙腈；19～20 min，20%→85%乙腈；检测波长为283 nm，柱温30 ℃，流速为1.0 mL/min。色谱图见图1。

图1 橙皮苷标准品(A)及荆芥样品(B)的高效液相色谱图(1代表橙皮苷)

2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含121.48 μg的对照品溶液。

2.3.3 供试品溶液的制备 精密称取荆芥饮片样品粉末(过2号筛)0.5 g，置于三角锥形瓶中，加甲醇25 mL，密塞，称定质量，回流30 min，放冷，称定质量，加相应溶剂补足减失的质量，摇匀，经0.45 μm滤膜滤过，取续滤液制成供试品溶液。

2.3.4 线性关系的考察 精密吸取橙皮苷对照品溶液，以甲醇稀释成不同浓度按“2.3.1”项下色谱条件进样10 μL，以橙皮苷进样浓度(ρ)为横坐标，以峰面积(A)为纵坐标，进行线性回归分析，得线性方程A=19.11ρ+17.328，r=0.999 9(n=6)，表明橙皮苷在3.80～121.48 μg/mL的范围内线性关系良好。

2.3.5 含量测定 取18批荆芥样品，按照“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，按照“2.3.1”项下色谱条件进行测定，计算样品中橙皮苷的含量，结果见表1。

表1 不同加工方式荆芥饮片及药材挥发油、胡薄荷酮、总黄酮、橙皮苷含量

2.4 综合评分法分析 将上述各组样品的挥发油、胡薄荷酮、总黄酮及橙皮苷含量测定结果进行加权综合评分。以各指标的最大值为参照，对各组数据进行归一化处理，再按各指标的重要性，给出权重系数。以挥发油含量(A，%，权重系数0.3)、胡薄荷酮含量(B，%，权重系数0.3)、总黄酮含量(C，%，权重系数0.2)、橙皮苷含量(D，%，权重系数0.2)为综合考察指标，计算各组样品综合评分值，结果见表2。由表中结果可知，原药材综合评分最高，趁鲜加工次之，最后是传统加工，表明不同加工方式的荆芥质量存在一定的差异。

表2 不同加工方式荆芥饮片及药材

2.5 OPLS-DA 将归一化处理后的各组数据，采用SIMCA14.1软件进行OPLS-DA研究，散点得分图见图2。图中趁鲜加工饮片与原药材聚为一类，传统加工饮片单独聚为一类，说明相比传统加工工艺而言，趁鲜加工饮片与原药材的质量更为接近，更大程度上保留了药材中有效成分。此外，对模型中变量重要性投影(variable importance projection，VIP)参数进行分析，发现挥发油、总黄酮、橙皮苷3个指标VIP值均大于1，说明3种成分是形成荆芥各组样品间差异的主要因素，且贡献率大小依次为总黄酮、橙皮苷、挥发油，表明荆芥中黄酮类成分在加工过程中变化较为显著。见图3

注：JD：传统加工饮片；CXJD：趁鲜加工饮片；YC：原药材

3 讨论

本实验考察了趁鲜加工与传统加工工艺对荆芥中挥发油、胡薄荷酮、总黄酮和橙皮苷含量的影响，利用综合评分法对各样品质量进行评价。荆芥原药材总体质量最好，其次是趁鲜加工饮片，最后是传统加工饮片。

比较传统加工与趁鲜加工结果可以发现，两种工艺所制得的饮片中挥发油和胡薄荷酮含量均符合《中华人民共和国药典》的要求，趁鲜加工饮片各指标成分的含量和综合评分均高于传统加工饮片，说明趁鲜加工饮片总体质量优于传统加工饮片；利用OPLS-DA法对数据分析可以得知，趁鲜加工饮片质量更接近原药材质量，而传统加工饮片质量橙皮苷、总黄酮、挥发油等多种成分均有显著差异，与原药材质量差距较大，模型中的VIP参数表明加工过程中橙皮苷和总黄酮在区分三者中起到重要作用。

注：V-1.挥发油；V-2.胡薄荷酮；V-3.总黄酮；V-4.橙皮苷

上述结果表明，荆芥饮片趁鲜加工在保证饮片质量上具有较高的可行性。综合生产成本、生产效率及不同指标的质量评价结果，荆芥趁鲜加工工艺可行性最高。后期应利用现代分析检测技术和统计分析方法，在继承传统经验鉴别指标的基础上，引入表征荆芥内在品质的指标，还需对趁鲜加工的加工干燥方式，产地趁鲜加工工艺条件开展进一步研究进一步优化，对干燥方法等方面进一步开展深入研究，完善并规范趁鲜加工荆芥饮片生产工艺流程，保障荆芥饮片质量均一、稳定、可控，从而进一步完善荆芥药材趁鲜加工工艺流程，以期为荆芥饮片趁鲜加工生产提供理论依据。