血清凋亡分子caspase-3、P53与突发性耳聋病情及治疗效果的相关性

王智超 乐海桂

突发性耳聋是耳鼻咽喉科的常见疾病，以不明原因的瞬间听力损失为特征，以单侧发病多见，伴有耳闷胀感、耳鸣、眩晕等症状［1］。目前，该病的发病机制尚不清楚，相关研究认为耳蜗微循环障碍、细胞凋亡异常激活可能与突发性耳聋的发生有关［2-3］。P53 蛋白及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3（cysteinyl aspartate specific proteinase-3，caspase-3）是两种参与耳蜗组织中细胞凋亡调控的分子，P53 通过caspase 依赖和caspase 非依赖两种途径引起级联反应、促进细胞凋亡，caspase-3 则直接执行细胞凋亡的过程。冷辉的动物实验发现，在顺铂诱导耳聋小鼠的耳蜗组织中caspase-3 及P53 表达增加［4］，但caspase-3 及P53 是否与突发性耳聋的发病有关并未见相关报道。因此，本研究将具体分析血清凋亡分子caspase-3、P53 与突发性耳聋病情及治疗效果的相关性，旨在为阐明突发性耳聋的发病机制、发现突发性耳聋新的病情评价标志物提供依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选择2018年9月至2019年6月东风茅箭医院耳鼻喉科收治的50 例突发性耳聋患者作为观察组，其中男性28 例、女性22 例，年龄37～59 岁、平均（47.47±8.95）岁；另取同期体检的50 例健康志愿者作为对照组，其中男性30 例、女性20 例，年龄35～60 岁、平均（48.32±9.37）岁，两组间一般资料的比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

纳入标准：①符合《突发性耳聋诊断和治疗指南（2015）》［5］中突发性耳聋的诊断标准并进行治疗；②入组时留取血清标准；③临床资料完整；排除标准：①合并中耳病变；②遗传及药物因素引起的听力下降；③既往有耳鼻手术史。

1.2 血清caspase-3、P53 的检测

观察组患者入院后采集外周静脉血5～8 mL，对照组志愿者体检时采集外周静脉血5～8 mL，静置凝血后3 000 转/分离心10 min，分离血清后采用酶联免疫吸附法试剂盒（上海西唐公司）检测caspase-3、P53 的含量，按照试剂盒说明书进行实验操作。

1.3 突发性耳聋病情的评估

采用听力损伤程度及听力曲线类型评估突发性耳聋的病情，听力损伤程度包括听阈26～40 d 分贝听力水平（Decibel Hearing Level，BHL 的轻度缺失、41～60 d BHL 的中度缺失、61～80 d BHL 的重度缺失、≥81 d BHL 的极重度缺失；听力曲线类型包括≤1 k Hz 任意频率下降＞15 d BHL 的低中频下降型、2 k Hz 以上频率下降＞15 d BHL 的中高频率下降型、各频率听阈均有下降且（0.5～4.0）k Hz 听阈均值＜80 d BHL 的平坦下降型、各频率听阈均有下降且（0.5～4.0）k Hz 听阈均值≥80 d BHL 的全聋型。

1.4 治疗效果的评估

治疗后参照《突发性耳聋诊断和治疗指南（2015）》［5］评估疗效，受损频率听力恢复正常为痊愈、听力增加30 d BHL 为显效、听力增加15～30 d BHL 为有效、听力增加＜15 d BHL 为无效。总有效为痊愈、显效及有效。

1.5 统计学方法

采用SPSS 21.0 及Prism6.0 软件进行数据分析，计量资料以（±s）表示、两组间比较采用t检验、多组间比较采用方差分析，计数资料以n（%）表示、组间比较采用χ2检验，预测疗效采用ROC曲线分析。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清caspase-3、P53 含量的比较

与对照组比较，观察组患者血清中caspase-3、P53 的含量明显增加，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组血清caspase-3、P53 含量的比较（±s）Table 1 Comparison of serum caspase-3 and p53 contents between 2 groups（±s）

表1 两组血清caspase-3、P53 含量的比较（±s）Table 1 Comparison of serum caspase-3 and p53 contents between 2 groups（±s）

组别观察组对照组t 值P 值n 50 50 Caspase-3（pg/mL）17.67±5.29 6.58±1.31 14.389 0.000 P53（pg/mL）0.98±0.29 0.39±0.10 13.600 0000

2.2 观察组中不同病情患者血清caspase-3、P53含量的比较

观察组中不同听力损伤程度血清caspase-3、P53 含量及听力曲线类型患者比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

2.3 观察组中不同caspase-3、P53 含量患者治疗效果的比较

与观察组中caspase-3、P53 含量≤中位数的患者比较，caspase-3、P53 含量＞中位数患者的治疗总有效率较低，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表2 观察组中不同病情患者血清caspase-3、P53 含量的比较（±s）Table 2 Comparison of serum caspase-3 and p53 contents in patients with different diseases condition in the observation group（±s）

表2 观察组中不同病情患者血清caspase-3、P53 含量的比较（±s）Table 2 Comparison of serum caspase-3 and p53 contents in patients with different diseases condition in the observation group（±s）

病情听力损伤程度n 分类轻度中度重度极重度F 值P 值平坦型低中频下降型高中频下降型全聋型F 值P 值11 19 13 7听力曲线类型15 18 7 10 Caspase-3(pg/mL)8.95±2.44 15.52±4.08 22.13±5.77 28.93±7.74 28.391 0.000 7.58±2.23 14.58±3.24 26.39±8.85 32.26±9.12 34.184 0.000 P53(pg/mL)0.54±0.14 0.79±0.22 1.21±0.29 1.76±0.35 23.575 0.000 0.49±0.14 0.80±0.24 1.22±0.31 1.87±0.36 32.389 0.000

表3 观察组中不同caspase-3、P53 含量患者治疗效果的比较［n（%）］Table 3 Comparison of treatment effect of patients with different levels of Caspase-3 and p53 in the observation group［n（%）］

2.4 血清caspase-3、P53 含量预测疗效的ROC 曲线分析

血清caspase-3、P53 含量预测疗效的ROC 曲线下面积为0.771（95%CI：0.642～0.899）。根据约登指数最大值确定最佳截点分别为14.76 pg/mL、0.835 ng/mL。见图1。

图1 血清caspase-3、P53 含量预测疗效的ROC 曲线Figure 1 ROC curve of serum caspase-3，P53 content predicting curative effect

3 讨论

突发性耳聋是造成听力损伤、影响生活质量的常见原因，表现为感音神经性耳聋，伴有耳闷胀感、耳鸣、眩晕等症状。该病的病理生理改变复杂，关于致病因素、发病机制等均不十分清楚，临床治疗常采用激素、改善循环、高压氧等方式，但疗效差异较大［6-8］。目前关于突发性耳聋的研究认为，听力损伤程度及听力曲线类型影响治疗效果，听力损伤程度越高以及全聋型患者的治疗效果较差［9-10］。

近些年，越来越多的学者开始关注突发性耳聋的发病机制，也有多种标志物被证实对治疗效果具有评估价值。微循环障碍、细胞凋亡等引起耳蜗功能降低是目前已知与感音神经性耳聋发生密切相关的因素，血管硬化、内皮损伤、血栓形成等引起耳蜗微循环障碍后，局部毛细胞会发生过度凋亡，进而引起听力降低［11-12］。已有研究报道，胆固醇代谢指标、同型半胱氨酸代谢指标、C 反应蛋白、内皮细胞特异性分子-1 等与微循环障碍相关的标志物在突发性耳聋患者血清中存在异常且与预后及疗效有关［13-16］，但凋亡标志物在突发性耳聋病情评估中的作用尚不清楚。

本研究选择凋亡分子caspase-3 及P53 作为评估突发性耳聋的标志物。已有动物实验表明，在顺铂诱导耳聋小鼠的耳蜗组织中caspase-3 及P53 的表达均明显增加，P53 能够通过信号转导促进caspase-3 表达，进而由caspase-3 来执行细胞凋亡过程。P53 及caspase-3 异常高表达能够释放进入血液循环，脑血管疾病相关的研究证实，脑梗死患者血清中P53 及caspase-3 的含量明显增加且与神经损伤程度密切相关。本研究结果表明P53 及caspase-3的增多与突发性耳聋的发病有关，这也与既往其他学者关于凋亡与突发性耳聋的相关研究结果吻合。

突发性耳聋的病情轻重不一，听力损伤程度及听力曲线类型是评估病情的常用方法，听力损伤程度越重、提示病情越重；听力曲线类型中全聋型的病情最重，中高频下降型可能由毛细胞损伤引起、病情较重，由内耳血管痉挛引起的平坦型及内耳膜迷路积水引起的低中频下降型病情较轻。本研究结果发现：随着听力损伤程度及听力曲线类型的加重，血清中P53 及caspase-3 的含量明显增加，表明P53 及caspase-3 的增加与突发性耳聋病情的加重有关。已有研究表明，听力损伤程度及听力曲线类型是影响突变型耳聋治疗效果的因素，本研究结果发现：P53 及caspase-3 含量增加会使治疗总有效率降低，且P53及caspase-3对疗效具有预测价值。

综上所述，血清凋亡分子caspase-3、P53 增多与突发性耳聋的发生、病情加重及治疗效果可能有关，未来caspase-3、P53 有望作为突发性耳聋的病情评估标志物用于临床，同时也为今后研究细胞凋亡在突发性耳聋分别中的作用机制提供了新思路。